茶树CsPNPO基因的功能鉴定与表达分析

论文摘要

PNP氧化酶是VB6代谢途径中一个重要的转化酶。该研究以茶树‘龙井43’为材料,采用RT-PCR方法克隆PNP氧化酶基因,以pET22b（+）为载体构建原核表达载体,通过IPTG进行诱导表达并进行功能鉴定;采用荧光定量PCR方法分析茶树不同组织中CsPNPO基因的表达差异以及在低温和干旱胁迫下的表达特征,为进一步解析茶树VB6的生理生化功能奠定基础。结果表明:（1）茶树CsPNPO编码框长度为1 503 bp,编码501个氨基酸,分子量为48.5 kD,理论等电点5.82,不含信号肽,属于亲水性的非分泌蛋白,定位于叶绿体;氨基酸序列分析结果显示,其有叶绿体转运肽区域、YjeF-N功能域和PNP氧化酶功能域。（2）成功构建pET22b（+）-CsPNPO原核表达载体,并在pH 8.5、37℃时测定重组蛋白有较强的PNP氧化酶活性。（3）荧光定量PCR检测结果显示,CsPNPO基因在茶树叶中的表达量最高,其次是茎,根的表达量最低仅为叶的十分之一,表明CsPNPO基因具有组织表达特异性;在低温和干旱条件下CsPNPO基因的表达量下降明显,推测CsPNPO基因可能参与了茶树对低温和干旱的逆境应答。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 实验材料
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 总RNA提取及cDNA合成
•     1.2.2 茶树CsPNPO的克隆
•     1.2.3 茶树CsPNPO基因的生物信息学分析
•     1.2.4 CsPNPO的原核表达
•     1.2.5 重组蛋白酶活测定及部分酶学性质分析
•     1.2.6 茶树CsPNPO的表达模式分析
• 2 结果与分析
•   2.1 茶树CsPNPO 的克隆
•   2.2 CsPNPO基因氨基酸生物信息学分析
•   2.3 茶树CsPNPO基因的原核表达
•   2.4 茶树CsPNPO酶活性分析
•   2.5 CsPNPO基因的表达模式分析
•     2.5.1 组织表达差异性
•     2.5.2 低温和干旱胁迫下的表达模式
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈星星,夏莹,黄龙全,张剑韵

关键词: 茶树,功能鉴定,逆境胁迫,组织特异性

来源: 西北植物学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,农作物

单位: 安徽农业大学茶与食品科技学院,安徽农业大学外国语学院

基金: 国家自然科学基金面上项目(No.31670297)

分类号: S571.1;Q943.2

页码: 580-587

总页数: 8

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