导读:本文包含了表达文库免疫论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:文库,免疫,基因组,免疫学,阿米巴,基因,杆菌。
表达文库免疫论文文献综述
张宏梅,郑文彧,刘迪,时文艳,孙宏宇[1]（2018）在《棘阿米巴表达文库的免疫学筛选》一文中研究指出通过棘阿米巴感染兔血清对棘阿米巴原虫全长cDNA文库进行免疫学筛选,采用角膜注射的方法构建棘阿米巴感染兔模型,收集感染后第1、7、14、21、28、35、42天兔血清,ELISA法测定抗体滴度;选用感染后第7、14、21天和28天混合血清对c DNA文库进行免疫学初筛和复筛;阳性克隆送样测序,并进行PCR鉴定和序列分析。结果:角膜刮片镜检,感染动物试验组均检出棘阿米巴的包囊和滋养体,感染血清抗体滴度在感染后第7天升高显着,在感染后第28天达到高峰;经免疫学筛选共获得3个阳性克隆,经测序和PCR鉴定,3个克隆的插入序列和ORF长度分别为:actin1,774 bp、polyubiquitin,234 bp和HSP20,564 bp。本研究为进一步棘阿米巴原虫感染的快速诊断试剂和免疫预防分子的筛选奠定基础。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2018年01期）
刘丽娜,张洁,周静,钟乃凤,胡祖权[2]（2016）在《金黄色葡萄球菌基因组表达文库的构建及免疫学初步筛选》一文中研究指出为从基因组水平筛选金黄色葡萄球菌疫苗抗原,建立金黄色葡萄球菌基因组表达文库,用患者恢复期血清对表达文库进行血清学筛选,并对获得的阳性克隆进行序列测定及同源性分析。结果显示,构建的金黄色葡萄球菌基因组表达文库共有5×10~4个克隆,片段插入正确率为91.67%。对文库进行初步筛选,共获得6个阳性克隆,经测序鉴定和同源性分析发现6个克隆涉及金黄色葡萄球菌基因组6个开放阅读框(ORF)。结果表明,本研究建立的疫苗抗原筛选方法可用于金黄色葡萄球菌疫苗抗原的系统筛选。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2016年08期）
郑利兵[3]（2015）在《魁蚶转录组文库的构建分析及免疫相关基因的克隆、表达、抗菌活性研究》一文中研究指出魁蚶(Scapharca broughtonii)属于软体动物门(Mollusc),双壳纲(Bivalve),蚶目(Arcoida),蚶科(Arcoidae),毛蚶属(Arca))。壳面有42-48条放射肋,以43条者居多。主要分布于我国渤海及黄海北部。魁蚶因其个体大、生长快,肉味鲜美,富含蛋白质和多种维生素,具有很高的经济价值,是我国出口换汇率较高的水产品之一。近几年来,我们课题组对魁蚶的血细胞形态、免疫功能及种质资源和遗传多样性做过研究,发现魁蚶对鳗弧菌具有较强的抗菌功能。早期野生魁蚶资源丰富,市面上销售的也都是野生捕捞种。近年来,近海养殖规模的不断扩大和人类活动的日渐频繁,导致滩涂生态环境恶化,加之过度捕捞,野生魁蚶群体出现病害和资源量下降的现象。为恢复其资源,魁蚶增殖放流和人工养殖便应运而生,且发展迅猛,为防止魁蚶在规模化养殖过程中爆发病害,需加强魁蚶抗病选育及其免疫机制研究。然而相关研究报道还较少,主要是运用传统分析学方法在细胞水平上对血细胞及其免疫功能等进行一些基础性的研究,有关魁蚶免疫系统作用的分子机制研究在国内外几乎还是空白。魁蚶功能基因的研究可为疾病防治提供理论基础,因此发掘魁蚶免疫基因、加强免疫机制研究显得尤为重要,深入挖掘魁蚶免疫因子对其产业的发展具有重要的理论和现实意义。本研究通过Illumia HiseqTM 2000技术构建并分析魁蚶转录组文库。采用拼接软件Trinity对所得序列进行de-novo组装,共获得86,689条高质量unigenes(>200 bp),总长度为71,873,603 bp,平均长度829 bp,N50长度为2256 bp,N90长度是454 bp,最长的序列为33,269 bp。通过BLAST比对进行基因功能注释:共有22,117(25.51%)条unigenes在Nr数据库中存在相似序列,分别有21,404(24.69%)、21,207(24.46%)条unigenes在GO和PFAM数据库中注释成功,在注释成功的序列中有7,531条序列被定位在31个KEGG的通路当中。结果表明:构建的魁蚶转录组文库质量较高,筛选获得的免疫相关unigenes为魁蚶功能基因的分子克隆和研究奠定基础。采用RACE技术克隆获得魁蚶锰超氧化物歧化酶(Mn SOD)基因全长c DNA序列,命名为Sb Mn SOD。序列结构分析表明:Sb Mn SOD基因c DNA全长1003 bp,5’-和3’-非编码区(UTR)分别为32 bp、275 bp;开放阅读框长696 bp,编码一个由232个氨基酸组成的多肽,预测的蛋白分子量为25.67 KDa,理论等电点为7.13。;4个负责与金属离子Mn2+结合的保守氨基酸残基分别为His57,His105,Asp190,His194;Mn SOD的特征序列为-DVWEHAYY-。同源性分析结果表明,Sb Mn SOD氨基酸序列与其他软体动物Mn SOD氨基酸序列的相似性达66%-91%,与蟹类的相似度高于虾类。q RT-PCR结果显示:Sb Mn SOD基因在魁蚶斧足、腮、外套膜、肝胰腺、闭壳肌和血细胞中都有表达,血淋巴细胞中的表达量最高;注射鳗弧菌Vibrio anguillarum后,各组织中Sb Mn SOD基因的表达量显着上调,且表达量均表现出不同程度的滞后性。重组蛋白可以有效地抑制大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和藤黄微球菌(Micrococcus leteus)的生长;且重组蛋白耐高温、耐酸碱。采用RACE技术克隆获得魁蚶铁蛋白(ferritin)基因全长c DNA序列,命名为Sb Fer。序列结构分析表明:c DNA全长930 bp,5’-和3’-UTR分别为182 bp和229 bp;开放阅读框长519 bp,编码一个由172个氨基酸组成的多肽,预测分子量为20.0 k Da,理论等电点5.16。PCR扩增获得魁蚶铁蛋白基因的内含子,间插在4个外显子之间。5’-UTR存在高度保守的铁反应元件。Sb Fer氨基酸序列具有脊椎动物铁蛋白基因的诸多功能序列。同源性分析表明,Sb Fer氨基酸序列与其他软体动物的相似性为63%-96%,与脊椎动物H型铁蛋白的相似性高于L型铁蛋白;系统进化分析表明,Sb Fer与无脊椎动物铁蛋白先聚为一支,再与脊椎动物H型铁蛋白聚类。q RT-PCR结果指出,Sb Fer基因在各组织中均有表达,在血淋巴细胞中的表达量最高;感染鳗弧菌后,Sb Fer基因在各组织中的表达量在除斧足外的其他组织中均显着上调,且具有一定的时间依赖性。重组蛋白的抑菌试验结果指出其可以有效抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌的生长。采用RACE技术获得魁蚶热休克蛋白90(HSP90)基因c DNA全长序列,命名为Sb HSP90。序列和结构分析表明:c DNA全长2707 bp,5’-和3’-UTR长分别为195 bp,325 bp,开放阅读框长2187 bp,编码一个由728个氨基酸组成的多肽,预测分子量为83.72 k Da,理论等电点为4.85。Sb HSP90氨基酸序列含有HSP90家族共有的5个签名序列,ATP酶结构域和C末端高度保守的MEEVD短肽序列。同源性及系统分析表明,Sb HSP90氨基酸序列与软体动物的HSP90氨基酸序列的相似性达到83%以上,与脊椎动物HSP90-α和HSP90-β的同源性很接近。q RT-PCR结果表明:Sb HSP90基因在魁蚶6种组织中均有表达,斧足中的表达量最高,而在肝胰腺中的表达量最低;注射鳗弧菌后,Sb HSP90基因在不同组织中的表达量都显着上调,且具有显着的时间依赖性和瞬时表达趋势。采用RACE技术克隆获得魁蚶半乳糖凝集素(Galectin)基因c DNA全长,命名为Sb Gal。序列和结构分析表明:该c DNA全长3120 bp,5’-和3’-UTR长分别为213 bp、1342 bp,开放阅读框长1565 bp,编码554个氨基酸,预测蛋白的分子量为63.32 k Da,理论等电点为4.99。Sb Gal是一个含有4个糖识别结构域的在双壳贝类中较为独特的半乳糖凝集素。同源性及系统分析表明:Sb Gal氨基酸序列与其他软体动物半乳糖凝集素氨基酸序列的同源性为46%-70%,其四个糖识别结构域彼此的相似性为36%-41%。q RT-PC结果表明:Sb Gal基因在各组织中均有表达,血淋巴细胞中的表达量最高;注射鳗弧菌后,Sb Gal基因在各组织中的表达量都显着上调,且表达具有显着的时间依赖性和瞬时表达趋势,呈现先升高后降低的趋势。(本文来源于《上海海洋大学》期刊2015-04-10）
李梦辉[4]（2015）在《巨型艾美耳球虫cDNA免疫表达文库的构建及其免疫保护性抗原的筛选》一文中研究指出巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)具有中等强度的致病性,是集约化养鸡场最常见的球虫之一。寻找有效的保护性抗原有助于研制第叁代抗球虫疫苗。本研究构建了巨型艾美耳球虫孢子化卵囊的cDNA表达文库,经过四轮免疫筛选,筛选出6个免疫保护效果较好的阳性克隆基因,并选择了其中一个进行克隆表达。具体进行了以下工作:1.利用Gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库利用Gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库。首先,从新鲜采集的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA并分离纯化mRNA,用CloneMinerTMⅡcDNA文库构建试剂盒构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库。再将cDNA重组到表达载体pVAX1.0上,从而构建了巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库。之后,用7种已知巨型艾美耳球虫基因的引物对文库进行验证。结果显示,构建的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库总容量为0.92× 107cfu,插入片段平均大小约为1.63kb,表达文库总容量为2.32×107cfu,插入片段平均大小约为1.64kb,二者的重组率都为100%,能用特异性引物扩增出7种已知的巨型艾美耳球虫基因。表明该文库质量高,代表性强,为进一步筛选免疫保护性抗原基因奠定了坚实基础。2.巨型艾美耳球虫cDNA表达文库免疫筛选本部分利用表达文库免疫法对巨型艾美耳球虫cDNA表达文库进行了四轮免疫筛选。每轮筛选提取质粒,14日龄,实验组腿部肌肉注射文库质粒,pVAX1.0空质粒免疫感染对照组注射pVAX1.0空质粒,免疫剂量100μg/羽,非免疫非感染对照组和非免疫感染对照组注射PBS,21日龄加强免疫。28日龄,除非免疫非感染组外,其余组分别经口感染新鲜的E.maxima孢子化卵囊1.5×105个/羽。7天后剖杀所有鸡,对增重、克粪便卵囊数、肠道病变记分这些指标进行统计,然后综合计算每组的抗球虫指数(ACI),评价其免疫保护效果。ACI≥160的判定为阳性克隆组,之后进行连续分割直到筛选出免疫保护性抗原基因,推导出各个基因的最大ORF,翻译成氦基酸序列后进行BLASTP同源性分析。结果表明,EmHP-1编码氨基酸序列与巨型艾美耳球虫一保守的 hypothetical protein(GenBank:CDJ56976.1)的相似性达 82%,EmSAG编码氨基酸序列与巨型艾美耳球虫的SAG family member(GenBank:CD J60815.1)的相似性为100%,EmRP编码氨基酸序列与巨型艾美耳球虫的rhomboid family domain-containing protein,putative(GenBank:CDJ59262.1)相似性为 84%,EmHP-2编码氨基酸序列与巨型艾美尔球虫的推测蛋白(GenBank:CDJ61108.1)相似性为70%,EmCKRS编码氨基酸序列与巨型艾美耳球虫一个推定的蛋白cAMP-dependent protein kinase regulatory subunit(GenBank:CDJ61187.1.)的相似性达 100%,EmJS-1与和缓艾美尔球虫的一假定蛋白selR domain-containing protein相似性达66%,与柔嫩艾美耳球虫的一假定蛋白selR domain-containing protein相似性达69%,与巨型艾美耳球虫的已知基因无相似性。3.EmRP基因的克隆与表达本部分利用PCR技术扩增从巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库中筛选出的阳性克隆EmRP基因。序列分析表明EmRP基因的ORF含774bp,编码257个氦基酸,理论分子量28.2kDa。构建EmRP基因的原核表达质粒pClodTF-EmRP,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功获得了表达,免疫印迹试验结果显示:表达的重组蛋白能被自然感染巨型艾美耳球虫的鸡血清所识别。(本文来源于《南京农业大学》期刊2015-04-01）
宫强,程茗,牛明福,秦翠丽,孙晓菲[5]（2013）在《禽多杀性巴氏杆菌基因组表达文库的构建及其免疫效果》一文中研究指出以限制性内切酶Sau3AⅠ酶切禽多杀性巴氏杆菌基因组DNA,回收500～3000bp的DNA片段,连接真核表达载体pcDNA3.1(+),电转化于大肠杆菌感受态细胞TG1中,构建禽多杀性巴氏杆菌的基因组表达文库。将文库随机分为5个子文库(子文库Ⅰ-子文库Ⅴ),分别提取各子文库重组质粒,以pcDNA3.1(+)和PBS为对照进行动物试验,每组16只BALB/c小鼠,各子文库组和pcDNA3.1(+)组以100μg/只的剂量肌注免疫,PBS组每只小鼠肌注100μL 1×PBS,各组均免疫3次,每次间隔2周。间接ELISA检测免疫小鼠的血清抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况,叁免2周后检测脾淋巴细胞IFN-γ的分泌情况。强毒攻击,计算小鼠的相对保护率。结果显示,动物免疫后子文库Ⅰ组质粒免疫的小鼠血清抗体水平及淋巴细胞增殖水平和IFN-γ分泌水平均持续上升,明显高于其他各组(P<0.05)。动物攻毒试验表明,各子文库组的重组质粒均可为免疫小鼠提供一定的保护,其中第Ⅰ组的保护效果最好,说明子文库Ⅰ组中含有较好的保护性抗原基因,这为进一步筛选相关的免疫原基因和研制新型疫苗奠定了的基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2013年05期）
王锦明,刘军龙,刘爱红,马米玲,牛庆丽[6]（2012）在《莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA表达文库的构建及免疫学筛选》一文中研究指出为了构建莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)裂殖子cDNA表达文库,从中筛选和鉴定功能基因,利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子,提取总RNA并纯化mRNA。在合成的双链cDNA两端加上含EcoRⅠ和HindⅢ定向接头后连接到λSCREEN载体上。通过体外包装形成完整的噬菌体颗粒,并用之转染ER1647,构建莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库。用莫氏巴贝斯虫阳性血清筛选cDNA文库,获得的阳性克隆,经过测序和Blast软件分析鉴定,然后利用末端快速扩增技术(RACE)对筛选到的功能基因片段进行全长扩增。结果表明构建的cDNA表达文库其初级库容量约为1.0×106 PFU,扩增文库为3.5×109 PFU;通过免疫学筛选,获得50个阳性克隆。测序和Blast分析后,鉴定出10个莫氏巴贝斯虫基因片段,RACE扩增获得了其中8个基因的全长。本试验构建的莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库和筛选到的10个结构和功能基因,为研究巴贝斯虫生物学特性、筛选疫苗与诊断用抗原及药物靶位奠定了基础。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2012年12期）
程茗[7]（2012）在《禽多杀性巴氏杆菌基因组表达文库的构建、免疫检测及ptfa基因的原核表达》一文中研究指出禽多杀性巴氏杆菌病，又称禽出血性败血症或者禽霍乱(fowl cholera)，是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida， Pm)引起的一种接触性、败血性传染病，可感染鸡、鸭、鹅、鹌鹑和火鸡等禽类。该病的发病率和死亡率均很高，具有突发性和流行的特点，给养禽业造成巨大的经济损失。该病具发病周期短死亡率高不易治疗特点，被列为重点防治的家禽疫病之一，预防和控制本病的流行已刻不容缓。疫苗接种成为巴氏杆菌病的有效措施，多年来国内外学者一直都很重视对该病预防和控制的研究，研制高效的疫苗已成为研究热点。近年来，所研究的禽多杀性巴氏杆菌抗原，主要有荚膜、菌毛、脂多糖和外膜蛋白，然而每种抗原所提供的保护力是有限的。高效的禽多杀性巴氏杆菌病疫苗应该使疫苗中尽可能多的包含多种特征性重组抗原。本研究构建出禽多杀性巴氏杆菌基因组表达文库，以其免疫小鼠，筛选出具有免疫保护性抗原基因，为新型疫苗的研制奠定基础，并从所获得的具有保护性抗原的基因文库中提取单个片段的基因，对其进行原核表达分析，为进一步开展深入的疫苗研制工作作了铺垫。本实验以禽多杀性巴氏杆菌CVCC474菌株作为研究对象，提取该菌的基因组，采用限制性内切酶Sau3AⅠ进行酶切，将其酶切成500-3000bp的DNA片段，将其插入到真核表载体的BamHⅠ酶切位点，转化人肠杆菌DH5a宿主，构建出5个DNA表达子文库，文库总容量为105个克隆。分别提取5个文库的重组质粒，纯化后将其溶解于PBS缓冲液，获得重组质粒；将105只6周龄纯系雌性小白鼠随机分配为7组，每组15只。1-5组分别为实验组，同时设空载体pcDNA3.1(+)组和PBS对照组。其中1-5组实验组分别免疫接种禽多杀性巴氏杆菌子文库1-5所提取的重组质粒，该重组质粒用灭菌的1×PBS（pH7.2)稀释，其浓度为100μg/μL，pcDNA3.1(+)组接种用用灭菌的1×PBS（pH7.2)稀释，浓度为100μg/μL的质粒pcDNA3.1(+)；PBS组接种1×PBS（pH7.2)。每只小鼠每次免疫剂量为100μL，采取双侧胫前肌注射，自第一次免疫开始每隔2周免疫一次，共免疫3次。然后通过对各免疫组小鼠的血清特异性抗体、细胞免疫应答和相对保护率的检测，来筛选确定免疫效果较好的组，筛选含有保护性抗原基因的子文库，结果筛选出基因组表达子文库1为免疫效果较好的文库，证明文库中含有保护性基因，为进一步筛选保护性抗原基因打下基础，有助于从分子水平上认识禽多杀性巴氏杆菌和寻找禽霍乱病的新的基因。同时研制出预防禽多杀性巴氏杆菌病的廉价、高效疫苗打下基础。然后从文库1中随机挑选一个重组质粒，进行质粒酶切鉴定，序列测定，结果表明该基因为已知的菌毛基因ptfa，随后构建该基因的原核表达载体进行诱导表达，为相应基因工程亚单位疫苗的研制奠定基础。(本文来源于《河南科技大学》期刊2012-05-01）
郑薇[8]（2012）在《弓形虫ME49株速殖子cDNA表达文库的构建与免疫学筛选》一文中研究指出刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是专性细胞内寄生虫，属原生动物门，孢子虫纲。它能够感染多种家禽及野生生物，包括鸟类及人类；由其引起的弓形虫病（Toxoplasmosis）是一种呈全球性分布的重要的人兽共患病。人群普遍容易感染弓形虫。人可以通过摄食生的或未被煮熟的含有包囊的肉而感染，或接触被猫或其他被感染的猫科动物排泄物中包囊污染的土壤、食物或水而感染。大多数免疫功能正常的人感染弓形虫后呈隐性感染，无明显症状。女性在怀孕前感染弓形虫通常不会将感染传给胎儿；然而如果孕期(妊娠3-5周)感染弓形虫，弓形虫就会通过胎盘屏障传播给胎儿，引起流产、早产、死胎及先天性弓形虫病。先天性弓形虫病在胎儿和婴儿中可引起脑积水、脉络膜视网膜炎、肝脾肿大、血小板减少症、小头畸形等，严重者引起死亡。弓形虫病的诊断方法有直接镜检、病原学检查、动物接种、卵囊分离、免疫学检测、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验等。本实验通过利用弓形虫速殖子提取的总RNA进行弓形虫表达文库的构建，并用慢性感染弓形虫的大鼠血清对构建好的弓形虫文库进行免疫学筛选，以便获得高反应原性的抗原基因，为下一步制备高反应性的重组蛋白用于弓形虫病的诊断奠定基础。方法：本实验通过培育幼鼠肾细胞（BHK）来进行弓形虫ME49株速殖子的体外培养与传代，纯化出弓形虫速殖子，利用Trizol Reagent提取出弓形虫总RNA，以总RNA为模板，在反转录酶的作用下分别反转录出cDNA的第一链及第二链，以及一系列的蛋白酶K处理，sfi酶切，用CHROMA SPIN H-1000进行过柱分离，与λTriple×2载体相连，最终经过体外包装形成cDNA初始文库；对初始文库进行滴度检测，文库扩增，最后进行筛库.用弓形虫感染大鼠6周后取其血清筛选表达性文库。将筛选出的阳性斑挑出，置于1ml SM buffer中。继续进行二次筛选，将筛选出的阳性斑置于1ml SM buffer中。将两次筛选出的阳性斑进行PCR扩增，然后将片段与PMD-18T连接后测序。结果：原始cDNA文库容量为4×10~7pfu，扩增后的滴度为4.2×10~9pfu/ml，文库的重组率大于95%，初筛后共筛出阳性克隆40个，复筛后持续阳性的克隆共有26个，通过测序结果表明共筛到2个cDNA分子，分别编码弓形虫ME49株ROP8蛋白和CELF蛋白。结论：成功构建弓形虫ME49株cDNA表达文库，采用人工感染的大鼠血清对文库进行筛选，通过测序分析获得2个cDNA分子，分别编码弓形虫ME49株ROP8蛋白和CELF蛋白，这两种蛋白有望成为弓形虫感染的新的诊断抗原。(本文来源于《吉林大学》期刊2012-03-01）
刘丹丹,李建梅,韩宏晓,王尚尚,曹李琴[9]（2011）在《巨型艾美耳球虫免疫原性相异株间差异表达基因消减cDNA文库的构建与分析》一文中研究指出为了探索巨型艾美耳球虫上海株和南通株球虫在免疫原性上差异的分子基础,分别以上海株未孢子化卵囊cDNA为试验组,南通株未孢子化卵囊cDNA为驱动组,或相反,以南通株未孢子化卵囊cDNA为试验组,上海株未孢子化卵囊cDNA为驱动组,分别构建了2个抑制性消减文库。随机从两个消减文库中挑取阳性克隆,用接头引物Nest PCR primer 1和Nest PCR primer 2R进行PCR扩增,经PCR鉴定显示,上海株和南通株未孢子化卵囊消减cDNA文库的重组率分别为95%(284/300)和89%(231/261),差异基因片段大小分布在0.25 kb～1.0 kb之间。随后,用地高辛标记方法制备了4种探针,即上海株消减组cDNA探针、上海株未消减组cDNA探针和南通株消减组cDNA探针、南通株未消减组cDNA探针。分别用同源株消减组探针和异源株未消减组探针对同一克隆进行检测,筛选差异表达克隆。在被检测的515个克隆(上海株284个,南通株231个)中,共获得86个差异表达克隆,其中上海株63个,南通株23个。对差异表达克隆测序和同源性比对,共获得10个重迭群(Contigs),其中上海株6个,南通株4个。通过BLAST分析,上海株的6个contigs中5个见有同源序列,1个未见同源序列,可能为新基因;南通株的4个contigs中3个见有同源序列,1个未见同源序列,可能为新基因。最后,选取6个差异表达基因,根据其序列分别设计引物,进行RT-PCR检测,结果发现这些基因在两个虫株内均有表达;随后又从RT-PCR验证的6个差异表达基因中选取2个基因,重新设计引物进行实时定量PCR验证,结果显示这2个差异表达基因在SH株和NT株中确实存在着表达量上的差异。(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集》期刊2011-11-18）
冯冰冰[10]（2011）在《缢蛏肝胰脏cDNA文库构建和免疫相关基因的克隆与表达研究》一文中研究指出缢蛏(Sinonovacula constricta Lamarck)是我国重要的滩涂经济贝类,与牡蛎、蛤仔、泥蚶一起号称我国“四大养殖贝类”。但是近年来,缢蛏病害经常出现,大批死亡现象时有发生,提高缢蛏抗病能力是减少缢蛏病害发生的重要途径。本研究构建和分析了缢蛏肝胰脏cDNA文库,筛选了免疫相关基因,应用RACE技术以及长PCR技术获得了免疫相关基因cDNA和DNA全长,利用实时荧光定量PCR技术分析了基因的组织表达以及细菌诱导后的时间表达,以期获得缢蛏的免疫候选基因,为缢蛏抗病新药开发、抗病新品种选育等工作奠定基础。1.采用DNS酶均一化处理技术,构建缢蛏肝胰脏cDNA文库,共获得5296个ESTs序列,经拼接后获得了4013个单一基因(Unigene),其中包括540个重迭群(Contig)和3473个单一序列(Singleton)。通过BLAST分析,79.3%序列为未知基因,20.7%序列为已知功能基因,其中43条序列是免疫相关基因。根据其功能,这些免疫相关基因可被分为5类,即20个蛋白酶和蛋白酶调节子基因、6个粘着蛋白基因、3个压力蛋白基因、3个抗菌肽基因、6个溶酶体酶基因和5个信号转导基因。2.从文库中筛选出2条β-actin同源序列,分别命名为β-ACTIN 1和β-ACTIN 2,cDNA全长分别为1552 bp和1454 bp,均含有1131 bp的开放阅读框,同时通过同源克隆技术获得缢蛏18S rRNA基因。比较分析了18S rRNA,β-ACTIN 1和β-ACTIN 2基因的组织表达(水管、鳃、斧足、外套膜、肝胰脏和性腺)稳定性,发现18S rRNA基因最稳定,适合作为内参基因。以18S rRNA基因为内参基因,组织表达及鳗弧菌诱导后的时间表达分析结果显示,2个β-actin基因的表达出现了显着变化,表明2个β-actin基因不适合作为内参基因。3.从文库中获得2条与C型凝集素同源序列,cDNA全长分别为644 bp和1659 bp,分别命名为ScCTL-1和ScCTL-2。ScCTL-1为标准长型C型凝集素,ScCTL-2为紧凑型C型凝集素,二者均具有1个糖识别结构域(CRD)。荧光定量PCR检测结果显示,经鳗弧菌和副溶血弧菌诱导后,缢蛏ScCTL-1和ScCTL-2 mRNA在不同组织中的时间表达谱变化趋势不同,表明2个C型凝集素具有不同的功能。4.从文库中筛选出一条与半乳糖凝集素(Galectins)同源序列,cDNA全长为1278 bp,具有识别半乳糖凝集素的特异性序列(H-NRP, WG-EE),命名为Sc-Galectin。预测蛋白包含2个串联的CRDs蛋白结构域,是一个串联重复型半乳糖凝集素。组织表达结果表明,Sc-Galectin mRNA在肝胰脏的表达量显着高于其他组织。经鳗弧菌处理8 h和48 h后,在6个组织中,缢蛏Sc-Galectin mRNA的表达均显着上调,经副溶血弧菌和鳗弧菌分别处理72 h和20 h后,在6个组织中,缢蛏Sc-Galectin mRNA的表达均显着下调并达到最大值。5.从文库中筛选出一条补体(Clq)同源序列,cDNA全长为712 bp,命名为ScC1q。预测蛋白包含一个18个氨基酸的信号肽和一个136个氨基酸的C1q结构域。组织表达结果表明,ScC1q mRNA在肝胰脏的表达量显着高于其他组织。经鳗弧菌和副溶血弧菌诱导后,缢蛏ScC1q mRNA在6个组织中的表达水平均出现显着上调和下调,其中在水管、鳃、斧足、外套膜和性腺中的表达变化的趋势比较明显。6.从文库中筛选出一条铁蛋白(ferritin)同源序列,cDNA全长为1106 bp,命名为ScFERs。预测蛋白包含一个高度保守的铁氧化活性中心结构域,该结构域由7个与脊椎动物H型铁蛋白完全一致的氨基酸残基组成,但是在5′非编码区缺失铁调节区域(IRE)。组织表达结果表明,ScFERs mRNA在肝胰脏的表达量显着高于其他组织。经鳗弧菌和副溶血弧菌诱导后,ScFERs mRNA在6个组织中的表达水平均出现显着上调和下调,其中在外套膜、斧足和性腺中的表达变化的趋势比较明显。7.从文库中筛选出一条热休克蛋白70(HSP70)同源序列,cDNA全长为2335 bp,是细胞质中的结构型HSC70亚家族基因成员,被命名为Sc-Hsc70。组织表达分析结果显示,ScHsc70 mRNA在外套膜中的表达量最低,而在水管中的表达量最高。经鳗弧菌和副溶血弧菌诱导后,ScHsc70 mRNA在缢蛏肝胰脏组织的表达水平呈上调趋势,且分别在20 h和30 h后达到最大。结果表明缢蛏ScHsc70基因可能在介导细菌诱导引起的免疫应答中起到重要作用。8.从文库中筛选出一条小热休克蛋白(sHSP)同源序列,cDNA全长为1220 bp,该基因的氨基酸序列具有典型的小热休克蛋白家族的特征结构:α-晶体蛋白(α-crystallin)结构域,被命名为Sc-sHSP。组织表达结果表明,Sc-sHSP mRNA在肝胰脏的表达量显着高于其他组织。经鳗弧菌和副溶血弧菌诱导后,Sc-sHSP mRNA在肝胰脏组织的表达水平呈上调趋势,且均在20 h后达到最大,结果表明Sc-sHSP基因可能在介导细菌诱导引起的免疫应答中起到重要作用。(本文来源于《上海海洋大学》期刊2011-05-01）
表达文库免疫论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为从基因组水平筛选金黄色葡萄球菌疫苗抗原,建立金黄色葡萄球菌基因组表达文库,用患者恢复期血清对表达文库进行血清学筛选,并对获得的阳性克隆进行序列测定及同源性分析。结果显示,构建的金黄色葡萄球菌基因组表达文库共有5×10~4个克隆,片段插入正确率为91.67%。对文库进行初步筛选,共获得6个阳性克隆,经测序鉴定和同源性分析发现6个克隆涉及金黄色葡萄球菌基因组6个开放阅读框(ORF)。结果表明,本研究建立的疫苗抗原筛选方法可用于金黄色葡萄球菌疫苗抗原的系统筛选。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
表达文库免疫论文参考文献
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[10].冯冰冰.缢蛏肝胰脏cDNA文库构建和免疫相关基因的克隆与表达研究[D].上海海洋大学.2011
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