导读:本文包含了蚓激酶逆转录病毒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:蚓激酶,重组逆转录病毒,包装,转染
蚓激酶逆转录病毒论文文献综述
刘殿峰,张嘉保,张守峰,任文陟,姚伟[1]（2007）在《重组逆转录病毒介导的转蚓激酶基因兔》一文中研究指出目的通过重组逆转录病毒介导获得转蚓激酶基因家兔。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清直接注射雄性兔的睾丸组织转染精原干细胞。结果病毒上清经NIH3T3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×104CFU/mL。病毒注射3月龄兔睾丸组织,过1.5个月取其睾丸、肾、脾、肝、肺进行组织切片观察,结果正常。提取交配所得F0、F1代仔兔基因组,经PCR、Southern检测,转基因阳性率F0代为6.3%(2/32)、F1代为15.3%(2/13)。结论通过重组逆转录病毒直接注射3月龄兔睾丸组织可获得转基因兔,病毒对兔的脏器无损害。(本文来源于《中国实验动物学报》期刊2007年06期）
周兴,张居农[2]（2007）在《蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在奶牛乳腺组织中的表达》一文中研究指出构建含有蚓激酶基因(Lumbrokinase,LK)cDNA 的重组逆转录病毒栽体 pLN-BCP-LK~R,以200μg、500μg、1000μg、 2000μg 的剂量梯度注入泌乳期黑白花奶牛乳腺,转染泌乳期奶牛乳腺组织获得暂时表达,并以500μg 为最佳表达剂量。利用脂质体转染 PA317包装细胞,通过 G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后收集病毒上清感染 NIH_3T_3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×10~4CFU/mL。再用收获的病毒上清转染妊娠期奶牛乳腺组织,产后奶样经 FAPA 法检测蚓激酶活性,结果表明牛奶具有明显的纤溶活性,即蚓激酶基因已经整合到奶牛乳腺组织并能实现相对稳定的表达。(本文来源于《中国奶牛协会2007年会论文集（上册）》期刊2007-06-30）
周兴,张居农[3]（2007）在《蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在奶牛乳腺组织中的表达》一文中研究指出构建含有蚓激酶基因(Lumbrokinase,LK)cDNA的重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R,以200μg、500μg、1000μg、2 000μg的剂量梯度注入泌乳期黑白花奶牛乳腺,转染泌乳期奶牛乳腺组织获得暂时表达,并以500μg为最佳表达剂量。利用脂质体转染PA317包装细胞,通过G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后收集病毒上清感染NIH_3T_3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×10~4CFU/mL。再用收获的病毒上清转染妊娠期奶牛乳腺组织,产后奶样经FAPA法检测蚓激酶活性,结果表明牛奶具有明显的纤溶活性,即蚓激酶基因已经整合到奶牛乳腺组织并能实现相对稳定的表达。(本文来源于《中国奶牛》期刊2007年S1期）
周兴[4]（2007）在《蚓激酶重组逆转录病毒载体的构建》一文中研究指出蚓激酶(lumbrokinase,LK)作为一种新型的溶栓药物,正在广泛应用于心脑血管疾病的预防和治疗。目前临床应用的LK均是从蚯蚓体内直接提取,其制备工艺繁杂,产量较低,因而通过基因工程手段生产大量高纯度的LK已成为一种极有前景的途径。本试验在之前工作基础上构建了含有蚓激酶基因的重组逆转录病毒载体,然后以牛体做为生物反应器,在牛奶中瞬时表达蚓激酶,以期验证载体构建的合理性,为最终获得转基因奶牛等乳腺生物反应器提供一定的理论和实验依据。首先将含有山羊β-酪蛋白基因(β-casein)5’区调控序列(BCP)、蚓激酶基因(lumbrokinase)以及牛生长激素基因polyA(BGHpolyA)序列的表达盒克隆到骨架为Moloney小鼠白血病病毒(缺失基因组)、含有标记基因Neo~R的逆转录病毒载体pLNCL中,构建了蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R。以生理盐水为溶剂,将质粒转染泌乳期奶牛乳腺小叶,收集不同时段奶样,采用纤维蛋白平板溶圈法(Fibrin Agarose Plate Assay,FAPA)检测其纤溶活性,结果显示,BCP作为乳腺特异性启动子能指导目的基因即蚓激酶基因在奶牛乳腺组织实现有效瞬时表达,并且根据FAPA法检测结果表明奶牛乳腺组织在注射重组质粒转染3h后,奶样即出现明显纤溶,6～16h纤溶活性达到最高,持续时间40～60h,有的甚至可达78h,以尿激酶标准品制作标准曲线计算出最高表达量约为40000UK/L牛奶。将表达目的蛋白的奶样经SDS-PAGE凝胶电泳检测,结果显示:表达的蚓激酶分子量约为40kDa。表明牛奶中有蚓激酶的瞬时表达,分子量比理论计算值稍大,可能是其经糖基化等修饰的结果。由于现在没有获得针对蚓激酶的特异性抗体,所以未能进行Western blot检测。(本文来源于《石河子大学》期刊2007-06-01）
周兴,张居农[5]（2007）在《蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在奶牛乳腺组织中的表达》一文中研究指出构建含有蚓激酶基因(Lumbrokinase,LK)cDNA的重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LKR,以200μg、500μg、1000μg、2000μg的剂量梯度注入泌乳期黑白花奶牛乳腺,转染泌乳期奶牛乳腺组织获得暂时表达,并以500μg为最佳表达剂量。利用脂质体转染PA317包装细胞,通过G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清感染NIH3T3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×104CFU/ml。再用收获的病毒上清转染妊娠期奶牛乳腺组织,产后奶样经FAPA法检测蚓激酶活性,结果表明牛奶具有明显的纤溶活性,也就是说蚓激酶基因已经整合到奶牛乳腺组织并能实现相对稳定的表达。(本文来源于《草食家畜》期刊2007年01期）
刘殿峰,张嘉保,张守峰,姚伟,李雪[6]（2006）在《蚓激酶重组逆转录病毒载体的构建及其在牛乳腺中的表达》一文中研究指出将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,转染泌乳期奶牛乳腺小叶并获得暂时表达。利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清感染NIH3T3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×104CFU/mL。进而用病毒上清转染妊娠期奶牛乳腺小叶组织,产后奶样经FAPA法检测表明蚓激酶基因已经整合到奶牛乳腺组织,并能实现相对稳定的表达。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2006年05期）
姚伟,任文陟,张守峰,范志强,扈荣良[7]（2005）在《蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在山羊乳腺组织中的表达》一文中研究指出目的在山羊奶中表达蚓激酶。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,转染泌乳期奶山羊乳腺小叶并获得暂时表达。利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清感染妊娠期奶山羊乳腺小叶组织,山羊产后采奶纤维蛋白平板溶圈法检测蚓激酶活性。结果产后奶样经纤维蛋白平板溶圈法检测羊奶具有明显纤溶活性。结论蚓激酶基因已经整合到奶山羊乳腺组织并能实现相对稳定的表达。(本文来源于《中国生化药物杂志》期刊2005年03期）
王方,王红卫,卢大儒,薛京伦,张皙[8]（2003）在《疱疹性口腔炎病毒G蛋白/胸苷激酶逆转录病毒载体转移人视网膜色素上皮细胞及其表达》一文中研究指出目的 应用新型逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶 (herpessimplexvirus thymidinekinase ,HSV TK)基因转移 ,探讨丙氧鸟苷 (ganciclovir,GCV)对HSV TK基因修饰人视网膜色素上皮细胞 (retinalpigmentepithelialcells,RPE)的杀伤抑制作用。方法 生产制备高滴度疱疹性口腔炎病毒G蛋白 (vesicularstomatitisvirus Gprotein ,VSV G) /胸苷激酶 (thymidinekinase ,TK)和VSV G/LacZ病毒 ,对NIH3T3细胞进行VSV G/TK滴度测定 ;VSV G/LacZ感染CRL2 30 2细胞后 ,以X gal染色估计感染率 ;对CRL2 30 2细胞、分离培养的RPE细胞及NIH3T3细胞感染不同病毒滴度的VSV G/TK ,结合GCV作用 ,观察 3种细胞生长抑制率。结果 VSV G/TK滴度为 1 2× 10 8克隆形成单位 /ml;VSV G/LacZ感染CRL2 30 2细胞的X gal染色蓝染细胞率为 5 8% ;当感染复数为 2 0 0时可最大的抑制细胞生长 ,抑制率为 4 5 %。结论 VSV G逆转录病毒可以介导LacZ、HSV TK基因在离体NIH3T3细胞和人RPE细胞中高效转移和表达。被HSV TK基因修饰的细胞对GCV作用敏感 ,其生长受到抑制。(本文来源于《中华眼科杂志》期刊2003年04期）
蚓激酶逆转录病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
构建含有蚓激酶基因(Lumbrokinase,LK)cDNA 的重组逆转录病毒栽体 pLN-BCP-LK~R,以200μg、500μg、1000μg、 2000μg 的剂量梯度注入泌乳期黑白花奶牛乳腺,转染泌乳期奶牛乳腺组织获得暂时表达,并以500μg 为最佳表达剂量。利用脂质体转染 PA317包装细胞,通过 G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后收集病毒上清感染 NIH_3T_3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×10~4CFU/mL。再用收获的病毒上清转染妊娠期奶牛乳腺组织,产后奶样经 FAPA 法检测蚓激酶活性,结果表明牛奶具有明显的纤溶活性,即蚓激酶基因已经整合到奶牛乳腺组织并能实现相对稳定的表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
蚓激酶逆转录病毒论文参考文献
[1].刘殿峰,张嘉保,张守峰,任文陟,姚伟.重组逆转录病毒介导的转蚓激酶基因兔[J].中国实验动物学报.2007
[2].周兴,张居农.蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在奶牛乳腺组织中的表达[C].中国奶牛协会2007年会论文集（上册）.2007
[3].周兴,张居农.蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在奶牛乳腺组织中的表达[J].中国奶牛.2007
[4].周兴.蚓激酶重组逆转录病毒载体的构建[D].石河子大学.2007
[5].周兴,张居农.蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在奶牛乳腺组织中的表达[J].草食家畜.2007
[6].刘殿峰,张嘉保,张守峰,姚伟,李雪.蚓激酶重组逆转录病毒载体的构建及其在牛乳腺中的表达[J].中国兽医学报.2006
[7].姚伟,任文陟,张守峰,范志强,扈荣良.蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在山羊乳腺组织中的表达[J].中国生化药物杂志.2005
[8].王方,王红卫,卢大儒,薛京伦,张皙.疱疹性口腔炎病毒G蛋白/胸苷激酶逆转录病毒载体转移人视网膜色素上皮细胞及其表达[J].中华眼科杂志.2003