蓝藻附生真菌Aspergillus flavipes 164013的次生代谢产物研究

论文摘要

海洋是一个巨大的天然产物资源宝库,大量具有丰富生物活性的化合物从海绵、珊瑚等海洋生物体中分离获得,其中部分化合物已经作为药物成功上市。但是海洋生物资源是有限的,而且大量采集海绵珊瑚等海洋生物容易破坏海洋生态环境,影响生态平衡;随着科学技术的进一步发展,发现海绵、海鞘等低等动物中获得的次生代谢产物部分由其共附生微生物产生或协作产生。因此,从海洋低等生物分离获得其共附生微生物,并对其次生代谢产物进行化学成分系统研究,这对海洋来源活性次生代谢产物结构多样性和活性多样性提供了新思路。南海共附生真菌的分离、纯化和目标菌株筛选。对南海采集的海绵和蓝藻样品中可培养的共生真菌进行分离纯化,共得到83株真菌,通过DNA扩增技术和基因序列比对分析技术鉴定真菌种属并分类保藏;利用HPLC、LC-MS等仪器分析方法对粗提物中化合物的结构类型丰富程度、分子量大小范围以及紫外吸收情况进行分析优先选择紫外吸收特殊、分子量范围400-1000道尔顿的菌株作为目标菌株。最终,选择真菌Aspergillus flavipes 164013为目标菌株,对进行大米固体发酵并对其次生代谢产物进行化学成分系统研究。真菌Aspergillus flavipes 164013大米发酵产物经甲醇渗漉提取,并用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯层浸膏,通过常压凝胶色谱、硅胶色谱、反相色谱等以及高压液相色谱等现代分离技术方法进行分离纯化,共得到单体化合物19个;综合运用NMR、紫外、红外、圆二色谱等光谱分析技术鉴定化合物的平面结构和相对构型。最终共鉴定化合物19个,其中新骨架化合物4个,含氯二苯醚类化合物6个,二苯甲酮类化合物1个,环肽类化合物2个,醌类化合物1个,生物碱类化合物5个。通抗肿瘤和心肌细胞保护等活性模型筛选,发现新骨架化合物A1、A2在安全浓度10 μmol/L浓度时对大鼠心肌细胞H9c2有保护作用。综上所述,通过对A.flavipes 164013大米发酵次生代谢产物的系统研究,共分离得到了4个新骨架化合物,5个首次在该菌属中分离得到生物碱类化合物,丰富了该菌属的化学结构多样性,同时新骨架化合物A1、A2具有心肌保护活性,为心肌保护类创新药物的研发提供新的药物模板、物质基础和科学依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 化合物结构
• 第一章 绪论
•   1.1 引言
•   1.2 海洋来源真菌的次生代谢产物的概述
•     1.2.1 抗炎活性的次级代谢产物
•     1.2.2 抗菌活性的次级代谢产物
•     1.2.3 抗肿瘤活性的次级代谢产物
•     1.2.4 抗病毒活性的次级代谢产物
•     1.2.5 其他活性的次级代谢产物
•   1.3 黄炳曲霉次生代谢产物的研究概况
•   1.4 研究目标和意义
• 第二章 共附生真菌的分离以及目标菌株的确定
•   2.1 实验材料及设备
•     2.1.1 实验仪器
•     2.1.2 培养基及显色剂
•   2.2 样品来源
•   2.3 样品处理
•   2.4 菌株的纯化、菌种鉴定及保藏
•     2.4.1 菌株的纯化
•     2.4.2 菌株的鉴定
•     2.4.3 菌株保藏
•   2.5 样品浸膏制备
•   2.6 化学筛选
•     2.6.1 高效液相色谱（HPLC-DAD）法
•     2.6.2 高效液相-质谱连用（LC-MS）法
•   2.7 目标菌株的获得
•     2.7.1 菌株164013的形态、HPLC、LC-MS图谱
•     2.7.2 菌株162105的形态、HPLC、LC-MS图谱
•     2.7.3 菌株161105的形态、HPLC、LC-MS图谱
•     2.7.4 菌株162105的形态、HPLC、LC-MS图谱
•     2.7.5 菌株164117的形态、HPLC、LC-MS图谱
•   2.8 菌株Aspergillus flavipes164013发酵条件筛选
•   2.9 本章小结
• 第三章 真菌Aspergillus flavipes164013次生代谢产物研究
•   3.1 化合物结构鉴定
•     3.1.1 新化合物结构鉴定
•     3.1.2 已知化合物的结构鉴定
•   3.2 实验部分
•     3.2.1 实验材料及设备
•     3.2.2 菌株来源
•     3.2.3 菌株发酵
•     3.2.4 提取与分离
•     3.2.5 化合物的理化常数和波谱数据
•   3.3 本章小结
• 第四章 化合物生物活性筛选
•   4.1 对Th17细胞分化的活性
•     4.1.1 实验材料
•     4.1.2 实验方法
• +T细胞加药处理'>    4.1.3 对naive CD4⁺T细胞加药处理
•     4.1.4 Th细胞分化结果的鉴定
•     4.1.5 实验结果
•   4.2 细胞毒活性测试
•     4.2.1 实验材料及设备
•     4.2.2 实验方法
•     4.2.3 实验结果
•   4.3 对心肌细胞氧化损伤的保护作用
•     4.3.1 实验材料及设备
•     4.3.2 实验方法
•     4.3.3 实验结果
•   4.4 本章小结
• 第五章 结论与展望
•   5.1 主要结论
•   5.2 主要创新点
•   5.3 展望
• 参考文献
• 附录Ⅰ新化合物图谱
• 致谢
• 攻读硕士期间成果

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 徐启航

导师: 卢艳花,安法梁

关键词: 黄炳曲霉,次生代谢产物,共生真菌,新骨架

来源: 华东理工大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 华东理工大学

分类号: Q936

DOI: 10.27148/d.cnki.ghagu.2019.000208

总页数: 115

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