导读:本文包含了胰岛素受体亚基论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:胰岛素,受体,基因,核糖体,甲状腺素,细胞,激酶。
胰岛素受体亚基论文文献综述
张永芳,王蒙蒙,李昕,王永峰,裴秀英[1]（2015）在《二甲双胍通过抑制核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6)调节体外人颗粒细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达》一文中研究指出目的:探讨二甲双胍对核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6k)及胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白及其ser307位点磷酸化表达的影响。方法:利用0.1 mmol/L二甲双胍体外连续作用多囊卵巢综合症(PCOS)患者黄素化颗粒细胞24 h为实验组,设未加二甲双胍培养的颗粒细胞为对照组。通过RT-PCR和Real-time PCR检测P70S6k和IRS-1的表达,细胞免疫荧光化学和Western blotting的方法检测P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白的表达。结果:Real-time PCR结果显示实验组P70S6k和IRS-1m RNA水平显着低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫荧光化学检测IRS-1和p-ser307-IRS-1蛋白在颗粒细胞胞质表达,P70S6k和p-thr389-P70S6k蛋白在细胞核表达。Western blotting法结果显示二甲双胍作用24 h前、后卵巢颗粒细胞P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达有统计学差异(P<0.05),灰度值分析显示添加二甲双胍组P70S6k、p-thr389-P70S6k蛋白表达显着升高,IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达显着下降(P<0.05)。结论:二甲双胍可抑制人颗粒细胞P70S6k的表达,并通过Akt/P70S6k/IRS途径调节IRS-1的表达,从而增加颗粒细胞胰岛素的敏感性。(本文来源于《生殖与避孕》期刊2015年03期）
刘俊茹[2]（2011）在《胰高血糖素对新生大鼠心肌细胞的胰岛素受体α、β亚基及葡萄糖转运体-4表达的影响》一文中研究指出目的:糖尿病心肌病是糖尿病的主要并发症之一,是导致糖尿病患者死亡的主要原因,临床表现为心脏舒张和(或)收缩功能障碍,可诱发心力衰竭、心律失常、心绞痛、心源性休克和猝死。糖尿病心肌病的特征性病变是心肌细胞代谢紊乱、心肌细胞肥大增生、心肌纤维化、心肌细胞凋亡、心肌细胞功能下降、细胞水平钙转运缺陷等。其中心肌细胞代谢紊乱包括心肌细胞葡萄糖利用障碍,脂肪酸利用增多,是糖尿病心肌病最早发生的功能改变。胰岛素受体及其信号转导障碍在糖尿病心肌病的心肌细胞代谢紊乱中发挥了重要作用。胰高血糖素是由胰岛α细胞分泌的激素,其主要生物学作用是促进肝糖原分解,抑制肝糖原合成,增强糖异生,升高血糖。大量研究显示,糖尿病患者体内存在高胰高血糖素血症,并与胰岛素的敏感性呈负相关,已经证实胰高血糖素为2型糖尿病发病的另一重要机制。但关于胰高血糖素的研究主要集中在其升高血糖的作用上,对其在糖尿病发病中的具体机制及其对糖尿病并发症尤其是糖尿病心肌病变的作用尚不明确。本研究拟探讨胰高血糖素对新生大鼠心肌细胞的胰岛素受体α、β亚基及葡萄糖转运体-4(glucose transporter-4,GLUT-4)表达的影响,是否对心肌细胞的糖代谢产生影响,并进一步探讨胰高血糖素在糖尿病及其心肌病变中的作用及发病机制,为研发新的治疗策略提供理论依据。方法:采用胶原酶消化和差速贴壁法分离新生大鼠心肌细胞并做原代培养。常规培养心肌细胞72小时后,更换为有血清的DMEM(Dulbecco modified Eagle medium)培养液。选取27孔细胞进行试验,细胞每9个孔分为一组,共分3组,换培养基的同时给药,第1组为正常对照组,不给予药物刺激;第2组给予胰高血糖素浓度100ng/L;第3组给予胰高血糖素浓度1000ng/L。给药后每天在倒置相差显微镜下进行细胞形态学的观察。给药48小时后进行各项指标的测定,再将每组平均分为A、B及C 3个小组,每3个孔分为1小组,即共分为9个小组:1A组、1B组、1C组、2A组、2B组、2C组、3A组、3B组、3C组,各组中的A小组用于检测胰岛素受体α亚基,B小组用于检测胰岛素受体β亚基,C小组用于检测葡萄糖转运体-4。(1)倒置相差显微镜下观察处理前后心肌细胞的形态学变化。(2)应用免疫组织化学染色方法检测心肌细胞膜上的胰岛素受体α亚基、胰岛素受体β亚基及葡萄糖转运体-4的表达量。(3)应用Image-Pro-Plus 6.0软件处理免疫组织化学染色图片,进行半定量分析后对所采集的数据用SPSS 13.0软件进行统计。结果:(1)新生大鼠心肌细胞原代培养成功。(2)分组给药后检测心肌细胞膜上胰岛素受体α、β亚基及GLUT-4表达情况,用平均光密度(mean desity)表示,1组(对照组)、2组(胰高血糖素浓度为100ng/L组)和3组(胰高血糖素浓度为1000ng/L组)叁组的胰岛素受体α亚基(F=78.504,P=0.000)、胰岛素受体β亚基(F=42.700,P=0.000)及GLUT-4(F=39.449,P=0.000)表达均有显着统计学差异。应用LSD-t检验进行两两比较,2组(胰高血糖素浓度为1000ng/L组)心肌细胞上胰岛素受体α亚基表达(P=0.000)、胰岛素受体β亚基表达(P=0.000)、GLUT-4表达(P=0.000)较1组(对照组)明显减少,有统计学意义。3组(胰高血糖素浓度为100ng/l组)心肌细胞上胰岛素受体α亚基表达(P=0.000)、胰岛素受体β亚基表达(P=0.000)、GLUT-4表达(P=0.000)较1组(对照组)明显减少,有统计学意义。3组(胰高血糖素浓度为1000ng/L组)心肌细胞上胰岛素受体α亚基表达(P=0.020)、胰岛素受体β亚基表达(P=0.027)、GLUT-4表达(P=0.010)较2组(胰高血糖素浓度为100ng/L组)明显减少,有统计学意义。结论:高胰高血糖素可导致新生大鼠心肌细胞的胰岛素受体α、β亚基及GLUT-4表达减少,且随胰高血糖素浓度升高减少更明显,胰高血糖素可能影响心肌细胞上的胰岛素受体信号转导及葡萄糖转运,引起心肌细胞糖代谢障碍,导致心肌细胞代谢紊乱,在糖尿病心肌病的发生发展过程中起了重要作用。(本文来源于《河北医科大学》期刊2011-03-01）
田利民[3]（2010）在《1：TSH上调肝脏HMG-CoA还原酶的研究 2：乙醇对大鼠心肌胰岛素受体β亚基、胰岛素受体底物及葡萄糖转运体4的影响》一文中研究指出研究背景：甲状腺疾病时机体常伴有血脂异常,如甲状腺功能减退时常合并有高胆固醇血症,而甲状腺功能亢进时则常伴有血胆固醇水平降低。以往认为甲状腺功能减退患者血胆固醇水平升高的主要机制是：甲状腺激素(TH)水平降低,导致肝脏低密度脂蛋白受体(LDL-R)表达减少、活性降低,血浆低密度脂蛋白(LDL)清除减少,因而引起血浆中的总胆固醇(TC)水平升高。然而,临床上出现的一些特点往往无法用这种传统理论去解释。例如,亚临床甲状腺功能减退时,促甲状腺素(TSH)水平升高,TH水平正常,但血清TC水平升高。另外在继发性甲减时,TSH、TH均降低,TC也随之降低。从以上现象我们可以看到在甲状腺功能减退时血清TC的变化除与TH有关外,也与TSH有某种不曾被人们认识的关系。而近几年,不断出现的一些大型流调研究也发现在亚临床甲减时TSH与TC相关。例如,最近Turha报道在亚临床甲状腺功能减退时血清TSH与TC有明显相关性(r=0.52；p=0.001)。另一项研究发现亚临床甲减患者经过L-T4治疗后血清TSH水平下降至0.2-2mU／L,TC也明显下降。亦有报道在妇女中TSH每升高1mU／L则伴有0.09mmol／L血胆固醇的升高。而在老年人群中,当TSH>5.5mU／L时血胆固醇较正常时有0.23mmol／l(9mg/dl)的升高,进一步的计算得出TSH水平每升高1mU／L,就伴随有0.09mmol／l(3.5mg／dl)血浆胆固醇浓度的提高。这些临床现象均无法通过传统理论中关于TH对胆固醇代谢调节的理论得到完全解释。在这之前,有研究发现另外一个垂体激素.促性腺释放激素(FSH)对骨吸收和骨形成有直接的调节作用。这一研究结果表明垂体激素可能参与周围组织器官生理调节作用。因此我们有信心也有必要对TSH在胆固醇合成过程中的作用及机制进行研究。一般情况下内源性合成是机体胆固醇最主要的来源。其中肝脏是机体胆固醇合成最旺盛的器官。3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A (3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A, HMG-CoA)还原酶(HMGCR)位于细胞内质网内,由它催化的由HMG-CoA还原成甲羟戊酸(Mevalonate, MVA)的反应是整个胆固醇合成途径中的限速反应,HMGCR则是合成反应的限速酶。通过调节该酶可维持体内胆固醇的稳定。现今,人们已公认肝脏在调节机体胆固醇代谢方面发挥中心作用。HMGCR也被发现存在于机体其它器官,但在肝脏却有更高水平的表达,在一些动物,肝脏具有最高的HMGCR活性和胆固醇生物合成能力。促甲状腺素受体(thyrotropin receptor, TSHR)是人体内介导TSH甲状腺调控功能的重要的蛋白分子。大量研究表明,TSHR不仅表达于甲状腺细胞表面,而且广泛表达于如脂肪细胞、成纤维细胞、淋巴细胞、骨细胞及神经细胞等在内的非甲状腺组织细胞内,且在这些组织细胞内发挥重要的病理生理作用。肝脏作为机体内最重要的组织器官之一,在肝细胞表面是否亦有TSHR的表达,进而介导TSH起调控作用的作用呢?我们前期的研究已证明人体正常肝组织、体外培养的人正常肝细胞株L-02细胞以及正常Wistar与Sprague Dawley (SD)大鼠肝组织有TSHR的表达,并且TSH可剂量依赖性地增加L-02细胞内cAMP的含量,说明肝细胞表面表达有功能性的TSH受体。本研究拟通过体外和体内实验研究TSH对肝细胞HMGCR表达的影响及相关机制,以探讨TSH在胆固醇合成中可能存在的调节作用。研究目的：1.前期研究已证明肝细胞膜上表达功能性TSH受体(TSHR),本课题拟通过研究TSHR介导的TSH作用,上调肝细胞HMGCR表达,增加肝细胞内总胆固醇(TC)含量,引起高胆固醇血症,从而揭示TSH在胆固醇合成中的可能机理。2、通过TSH刺激肝细胞cAMP/PKA/CREB信号途径的实验研究,揭示TSH增加肝细胞HMGCR的表达的作用机制。研究方法：1、为了研究肝细胞表达功能性TSHR,实验用牛TSH、胰高血糖素或福斯考林刺激L-02、培养的人原代肝细胞和小鼠胚胎肝细胞系BNL细胞,检测cAMP释放。福斯考林作为阳性对照。2、在体外实验,用牛TSH处理肝细胞,检测细胞HMGCR表达。在刺激实验中,用无血清培养基培养人正常肝细胞系L-02、人原代肝细胞和BNL细胞,用不同浓度的TSH作用一定时间,检测TSH对HMGCR剂效性和时效性关系。3、为表明TSH影响肝细胞HMGCR的表达是通过TSHR作用的,实验用人单克隆抗体CS-17与TSH竞争结合TSHR。L-02细胞和人原代肝细胞用CS-17预培养60分钟,然后用TSH继续作用60分钟,检测cAMP释放。另外,我们采用慢病毒介导的RNA干扰病毒感染培养的肝细胞,敲除肝细胞TSHR表达,检测TSH刺激后cAMP的释放和HMGCR的表达的变化。4、为了探讨TSH诱导上调肝细胞HMGCR表达是通过cAMP信号系统,用腺苷酸环化酶抑制剂SQ22536预孵肝细胞,再用TSH刺激肝细胞,检测cAMP和HMGCR变化。5、为了证实TSH刺激增加肝细胞HMGCR mRNA水平是通过增加HMGCR启动子的活性作用实现的,本研究设计相应HMGCR启动子的一个DNA片段,与荧光素酶基因融合,构建荧光素酶报告基因,然后转染到L-02细胞。在不同处理条件下,测定荧光素酶活性。实验选择福斯克林为阳性对照,用0.4和4μMTSH刺激L-02细胞8小时。6、通过ChIP实验定量分析TSH刺激L-02细胞激活HMGCR转录活性。将L-02细胞分为四组：福斯克林(0.5μM)组,TSH(4μM)组,H89(PKA阻断剂,20μM)组,RNA干扰组。7、为进一步明确TSH是否对CREB/DNA结合活性有影响,从L-02细胞提取核蛋白进行了EMSA实验研究。从未加处理的细胞,加了4μMTSH和20μMH89的细胞中提取等量的核蛋白,探针用生物素标记。8、为了进一步研究TSH增加肝细胞HMGCR表达,增加胆固醇水平,我们通过手术切除大鼠甲状腺建立了甲减大鼠模型。切除了大鼠甲状腺,就失去了对TSH的刺激反应,血中甲状腺素水平降低甚至消失,这样就可以通过注射外源性T4或TSH人为的控制大鼠体内TSH水平,达到实验目的。术后30天检测,血清TT4≤1.41ng/ml认为甲状腺已完全摘除,为实验组大鼠(48只),未达到要求的切除甲状腺大鼠排除实验外。同时设假手术组(30只)。研究结果：1、肝细胞膜表达具有功能活性的TSH受体与对照组比较,福斯考林显着增加L-02细胞内cAMP水平(约2.8倍,p<0.001),同样,bTSH刺激也明显增加了细胞内cAMP水平(约为福斯考林组的叁分之二,p<0.05)。实验中以CHO细胞为阴性对照,因为在其细胞表面不存在TSH受体,本实验发现福斯考林显着增加CHO细胞内cAMP水平(p<0.05),但是bTSH刺激CHO细胞后细胞内cAMP水平无明显变化(p>0.05)。同样,我们用bTSH、福斯考林和胰高血糖素刺激原代培养的人肝细胞和BNL细胞均显着增加了细胞内cAMP水平。并且,与L-02细胞比较,人原代肝细胞对bTSH反应更明显(p<0.05)。表明新鲜分离的人肝细胞具有更好的肝细胞活性。2、TSH增加肝细胞HMG-CoA还原酶(HMGCR)的表达和活性(1)不同浓度bTSH对HMGCR蛋白的影响与对照组相比,0.1μM、1μM、4μM bTSH处理后L-02细胞内HMGCR蛋白均有明显增加,分别增加了30％、58％与110％,差异有统计学意义p<0.05或p<0.01)。说明bTSH可剂量依赖性地上调HMGCR蛋白水平。(2)不同浓度bTSH刺激对HMGCR mRNA水平的影响与正常对照组相比,bTSH刺激组HMGCR mRNA表达增强,2μM (p<0.05)与4μM (p<0.01)bTSH干预组与对照组相比分别提高了92％与150％,差异均有统计学意义,且4μM bTSH刺激作用强于0.2μM作用(p<0.01)。说明bTSH可剂量依赖性地上调HMGCR mRNA水平。(3)不同浓度bTSH对人原代肝细胞和小鼠肝细胞系HMGCR蛋白的影响：与L-02细胞相似,0.1μM、1μM、4μM bTSH刺激人原代肝细胞和NBL细胞48小时后,Wester blot示细胞内HMGCR蛋白水平均呈剂量依赖性增加。(4)不同浓度bTSH对HMGCR活性的影响：分别用0.1μM、1μM、4μM bTSH处理L-02细胞48h后发现,随bTSH剂量的增加L-02细胞HMGCR活性水平也呈增加趋势。与对照组比较,0.1μM bTSH和4μM bTSH增加HMGCR活性分别为2和4倍(p=0.013和p<0.001)。3、TSH刺激增加L-02细胞内总胆固醇(TC)含量随着bTSH浓度的增加,细胞内TC含量逐渐增加,与对照组比较,1μM和4μM bTSH刺激增加TC含量分别为2.2和3倍(p=0.032和p=0.004)。同时,刺激48h后TC含量明显高于24h(p<0.01)。TSH对肝细胞内TC水平影响的这种剂效和时效关系与对HMGCR刺激效应一致,表明TSH作用肝细胞后通过上调HMGCR表达,增加细胞内总胆固醇含量。4.TSH诱导肝细胞HMGCR表达依赖于TSHR(1)L-02细胞和人原代肝细胞在bTSH刺激下,细胞内cAMP水平分别增加了约2.8和3.5倍(p<0.001),在CS-17预处理后,bTSH刺激下细胞内cAMP水平均无明显增加(p>0.05)。表明CS-17抑制了bTSH诱导的细胞内cAMP水平的增加。同样,与对照组比较,TSH刺激可显着增加HMGCR蛋白表达,但是在CS-17处理L-02细胞后,TSH作用后细胞HMGCR蛋白表达无明显变化。表明CS-17抑制了bTSH诱导的肝细胞HMGCR蛋白的增加。(2)慢病毒介导的TSH受体RNA干扰：TSHR-RNAi-lentivirus显着降低TSH诱导的L-02细胞cAMP释放和HMGCR表达,以及TC含量的增加。(3)RNAi干扰TSHR基因表达后TSH对BNL CL.2细胞HMG-CoA还原酶含量的影响：siRNA干扰处理细胞HMG-CoA还原酶含量与正常对照组比较无明显变化,TSH明显提高未加siRNA干扰的细胞HMG-CoA还原酶含量,TSHR-siRNA干扰TSHR基因表达后,TSH不能引起细胞HMG-CoA还原酶含量的明显升高,而错配的non-targeting siRNA处理后TSH仍可明显增高细胞HMG-CoA还原酶含量,增高程度与未加siRNA干扰的正常细胞TSH处理后基本相同。5、TSH通过cAMP/PKA/CREB信号通路上调肝细胞HMGCR表达(1)用SQ22536预孵L-02细胞和人原代肝细胞1小时,继续TSH刺激细胞1小时。我们发现,无论是L-02细胞,还是人原代肝细胞,SQ22536均能显着降低TSH诱导的细胞内cAMP水平(P<0.01)。无SQ22536预处理的L-02细胞,在TSH刺激48小时后HMGCR蛋白表达明显增加,但是SQ22536处理后的细胞,在TSH刺激后,HMGCR蛋白表达无明显增加。(2)实验选择福斯克林为阳性对照,用0.4和4μM TSH刺激L-02细胞8小时。结果表明,福斯克林增加荧光素酶活性2.4倍,0.4和4μM TSH刺激L-02细胞增加荧光素酶活性分别为1.5和2.2倍。进而将HMGCR启动子上的CRE结合位点突变,突变序列为：TGACGTAG to TAAAAGGG。我们发现无论是TSH,还是福斯克林刺激均不能增加荧光素酶活性。这一实验表明TSH调控HMGCR基因转录是通过CRE结合位点实现的。(3)与对照组比较,福斯克林刺激L-02细胞显着增加磷酸化CREB(Ser133 pCREB)的结合能力(P<0.001),而TSH刺激L-02细胞增加pCREB结合能力约2.3倍(P<0.001)。H89可明显抑制TSH诱导的pCREB结合能力(P=0.019与对照组比较)。同样,RNA干扰也显着抑制TSH诱导的pCREB结合能力(P=0.002与TSH组比较)。(4) ESMA实验结果表明TSH可以增加CREB/DNA结合活性,在凝胶电泳图上可看到较强的CREB/DNA混合物条带。当加入H89后这个条带明显减弱,表明TSH增加CREB/DNA结合活性是通过PKA通路实现的。6、TSH增加甲状腺切除(Tx)鼠肝脏HMGCR表达,增加血清TC水平(1)Tx和(假手术)Sh组大鼠血清TT4分别为0.55±0.32(ng／ml)和7.60±2.15(ng／ml),血清TSH分别为41.9～6.20(uIU／mL)和0.63±0.23(uIU／mL)。T4和TSH的差异均具有统计学意义。Tx和Sh组大鼠血清总胆固醇水平分别为2.33±0.34mmol／l和1.46±0.0.32mmol／l,Tx大鼠血清胆固醇水平明显升高,差异具有统计学意义。Western blot分析HMGCR和LDLR蛋白表达。目的条带在90KD和160KD左右,以β-actin为参照。结果发现,与Sh组大鼠比较,Tx大鼠肝组织HMGCR蛋白明显升高(P<0.05),而LDLR明显降低(P<0.05)。(2)TSH对血浆TC水平的影响：将Tx大鼠分成4组,每组12只大鼠：①Tx；②Tx+T4；③Tx+T4+小剂量TSH；④Tx+T4+中剂量TSH；⑤Tx+T4+大剂量TSH。结果发现①组Tx大鼠TC水平较假手术组显着升高,当给予恒定量T4后,血浆中T4水平升高,而TSH水平下降,与假手术组大鼠相当,也就是说T4处理后恢复了甲减大鼠血浆T4和TSH水平。同样,TC水平也明显下降。当血中T4值达到恒定水平后,给外源性TSH注射,我们发现,与未注射TSH组的大鼠(即②)比较,注射TSH组大鼠(即③④⑤组)血浆TC水平剂量依赖性升高,但差异无统计学意义。进一步分析发现,在同一只大鼠,注射TSH前后血清胆固醇水平有变化,注射TSH后TC水平较注射前升高,且有统计学意义。(3)TSH对肝组织HMGCR和LDLR表达的影响：同时,上述前4组大鼠肝组织做HMGCR和LDLR检测,结果显示,与Tx大鼠比较,注射T4后HMGCR蛋白表达降低,而LDLR表达增加。与Tx+T4组比较,注射TSH后HMGCR升高,且大剂量TSH升高更明显,而LDLR无明显变化。表明TSH注射增加肝脏HMGCR的表达,但对LDLR无明显影响。结论：1、本研究通过体外细胞实验和建立甲减模型的体内实验研究,证明了TSH可以增加肝脏胆固醇合成的关键酶HMGCR的表达,通过体外研究发现TSH的这种作用主要是通过cAMP/PKA/CREB信号通路实现的,且依赖于肝细胞膜上的TSHR。与体外实验研究一致,目前的研究发现切除了甲状腺的甲减大鼠肝脏HMGCR表达升高,血清胆固醇水平相应升高,通过体内实验研究发现这种升高是由于血清TSH水平升高造成的,也就是说TSH促进肝脏HMGCR表达,增加了肝脏胆固醇的合成。2、我们的研究揭示了高胆固醇血症一个新的发病机理,尤其是甲减相关的高胆固醇血症。因此,本研究对于理解和处理甲减相关的高胆固醇血症有重要的病理生理意义和临床应用价值。研究背景：在人类,饮酒与血糖升高、葡萄糖耐受不良和和葡萄糖体内稳态相关。已有报告短期饮酒可引起大鼠糖耐量异常。而对于周围组织来说,长期饮酒可降低肝脏和骨骼肌葡萄糖的利用。而且,长期饮酒损伤胰岛素受体信号。前期的研究通过葡萄糖钳夹实验已证明饮酒可降低心脏和骨骼肌胰岛素刺激的葡萄糖吸收。总之,饮酒不仅导致肝脏和骨骼肌的葡萄糖耐受,而且可引起酒精性心肌病。然而,心肌胰岛素信号的损伤和酒精性心肌病之间的关系至今不明确。尽管已有研究报道酒精损伤胰岛素信号和葡萄糖转运是由于降低了葡萄糖的氧化和利用,但是潜在的分子机制仍然不清楚。胰岛素在心肌代谢功能方面起着重要作用。胰岛素通过受体发挥各种生理作用,例如增加葡萄糖吸收,诱导基因表达和细胞增殖。胰岛素结合到受体,可激活胰岛素B受体酪氨酸激酶,进而激活胰岛素信号通路的下游分子,包括胰岛素受体底物家族。然而,有关酒精对胰岛素信号损伤的研究主要集中宅骨骼肌和脂肪组织,在心肌上几乎没有研究。组织对葡萄糖的摄取主要依赖于质膜上的葡萄糖转运体,心脏主要表达葡萄糖转运体1和4,而胰岛素依赖的葡萄糖吸收主要依赖于葡萄糖转运体4。本研究拟建立饮酒大鼠模型,观察长期饮酒对大鼠心肌胰岛素受体B亚基,胰岛素受体底物和葡萄糖转运体4表达的影响。研究目的：拟通过建立饮酒大鼠模型,观察长期饮酒对大鼠心肌胰岛素受体β亚基,胰岛素受体底物和葡萄糖转运体4表达的影响。研究方法：1、动物分组及喂养：雄性Wistar大鼠72只,按体重随机分为6组,每组12只,即对照组(蒸馏水：5g·kg-1·d-1)；大剂量饮酒组(酒精量5g·kg-1·d-1)；中剂量饮酒组(酒精量2.5g·kg-1·d-1)；小剂量饮酒组：(酒精量0.5g·kg-1·d-1)；酒精由胃管灌入,每天早9点定时灌胃,喂养时间22周。2、机体水平胰岛素敏感性评价：喂养期间监测大鼠体重和血糖水平；大鼠处死前,测空腹血糖、空腹血胰岛素和血脂水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),同时进行口服葡萄糖耐量试验。3、长期饮酒对经典的胰岛素信号传导通路的影响：RT-PCR检测心肌IR、IRS1、IRS2及GLUT4的mRNA水平；Western blot检测IR、IRS1、IRS2及其磷酸化和GLUT4的蛋白水平。研究结果：1、机体水平胰岛素敏感性评价：大鼠喂养22周后,各组大鼠口服葡萄糖耐量试验0、30、60、120分钟血糖无显着性差异,糖耐量曲线下面积亦无明显差别。2、与对照组比较,中等剂量和高剂量饮酒组大鼠心肌胰岛素受体B亚基,胰岛素受体底物1和葡萄糖转运蛋白体1的mRNA水平明显降低；相应地,心肌胰岛素受体B亚基,胰岛素受体底物1和葡萄糖转运蛋白体4的蛋白水平也明显降低,尤其是高剂量饮酒组大鼠。3、长期饮酒大鼠心肌磷酸化胰岛素受体β亚基和磷酸化胰岛素受体底物1的水平降低,这与心肌胰岛素受体β亚基、胰岛素受体底物1和葡萄糖转运体4蛋白水平的变化一致。结论：本研究表明长期饮酒可下调大鼠心肌胰岛素受体β亚基,胰岛素受体底物1和葡萄糖转运蛋白体1的表达。(本文来源于《山东大学》期刊2010-05-15）
金丽[4]（2003）在《多囊卵巢综合征患者胰岛素受体β-亚基表达及胰岛素受体基因外显子17多态性研究》一文中研究指出背景 多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是育龄妇女最常见的内分泌疾患，其发生率占绝经前妇女的5％～10％，表现为雄激素过多(hyperandrogenism，HA)、慢性不排卵和多囊卵巢的全部综合病症。近年来，在PCOS的进一步研究中发现许多临床和实验现象单用性腺轴功能异常无法解释，如：1．大多数患者存在糖代谢异常，主要表现为胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)及高胰岛素血症(hyperinsulinemia，HI)，PCOS患者糖尿病的发生串较正常高7倍，发病时间也提前近30年；2．不同种族患者临床表现有差异，但IR表现却是共同的；3．青春期患者常先有IR及HI，后表现出雄激素过多及排卵障碍；4．单用LH或HCG能诱导动物多囊卵巢，但并不出现PCOS一系列的生化表现，加用胰岛素后则可诱导出典型的PCOS动物模型；5．用胰岛素增效剂可改善PCOS特征性的高雄激素血症及高黄体生成素血症，促进卵泡成熟、排卵及怀孕。基于这些现象，国内外学者对PCOS的本质及其发病机理逐步有了新的认识，越来越多的学者认为：IR及HI不仅是PCOS的另一重要生化特征，而且可能是PCOS发生的主要病理基础，在PCOS的发病中起着早期和中心的作用。 PCOS患者的胰岛素抵抗及高胰岛素血症会加重PCOS患者的雄激素过多、无排卵 浙江大学2003届颀士学位论文等生殖功能障碍，以及增加2 型糖尿病、高血脂、高血压、动脉粥样硬化、子宫内膜癌等远期并发症发生率。对其发生机制的研究，可分为叁类：胰岛素受体前因素；受体缺陷；受体后因素。近年来，受体因素吸引了越来越多的关注，因为受体在整个胰岛素信号传导中起到了从细胞外过渡到细胞内的作用，它的自主磷酸化启动了胰岛素受体（insulin receptor，INSR）在细胞水平的作用，在 INS 的信号传导中发挥着重要作用。胰岛素与受体结合，实现了信号的跨膜传递。胰岛素受体是糖蛋白，有两个口亚基和两个B一亚基，通过二硫键相连，Q－亚基位于胞外，与胰岛素结合，p－亚基由胞外延伸到胞内，受体的自身磷酸化作用就发生在p－亚基，并由p亚基开始激活细胞内的一系列信号传导，因此，在受体后的信号传导中起关键作用的是受体的p－亚基，它的异常可能会引起胰岛素受体传导胰岛素信号异常，导致PCOS患者胰岛素抵抗的发生。 胰岛素受体p－亚基的损害，主要表现在两方面：Ins靶细胞膜上B－亚基数量减少和受体的功能——一自主磷酸化作用异常，主要是酪氨酸激酶活性异常。国外也曾有这方面的研究，结果发现与正常对照比较，PCOS 患者红细胞膜上胰岛素最大特异性结合明显下降，但是，研究并没有具体到6－亚基；另外有研究证实，胰岛素受体基因的多态性可以导致受体功能的改变，尤其是酪氢酸激酶片段基因的多态性，可直接影响酪氨酸激酶活性，使胰岛素受体p一亚基的自主磷酸化功能受损，从而导致之后一系列的信号传导异常。胰岛素受体基因蛋白激酶活性区有9 个绝对保守的氨基酸序列，这9 个位点及与此相邻的一些同源性保守序列在酪氢酸激酶活性的发挥中起关键作用，在17外显子里有3个这样的保守区，即－Tyr965一、－Tyr972一、和1003—1030的ATP结合区。它的多态性将对胰岛素受体D一亚基的自主磷酸化功能产生影响。国外曾有研究发现 PCOS患者中存在 17外显于多态性。遗憾的是国内目前为止，在心血管及内分泌已开始这方面的研究，但在PCOS患者中，对这个基因的研究还是空白。 本研究通过 Sestern Blot的方法，测定 PCOS患者红细胞膜上胰岛素受体 8一亚基的表达量，通过PCR－SSCP（单链构象多态性分析），检测PCOS患者胰岛素受体基因exon 17多态性，旨在从胰岛素受体p一亚基的表达量和其基因exon 二7多态性 二 浙江大学2003届硕士学位论文两方面结合，来解释PCOS患者易发生IR及HI的机制。同时，为筛选PCOS患者中易发生IR者奠定方法学的基础。材料和方珐 以2002年7月～2003年1月来本院不孕不育门诊就诊的PCOS患者为研究对象，其中又根据体重指数 BMI是否大于 25kg砌’分为 PCOS合并肥胖组和非肥胖组；根据空腹血糖／空腹血胰岛素是否小于1：3分为PCOS合并IR组和无IR组，对照为同期因单纯男性不育或管性不孕来本院不孕不育门诊就诊的，月经规则，基础内分泌正常，临床表现和B超均不提示PCOS的病人。取其静脉血，分离出红细胞和淋巴细胞。红细胞提取膜蛋白，采用 Western Blot的方法进行胰岛素受体 p一亚基的蛋白检测，对 Western Blot 结果进行半定量分析，淋巴细胞提取 DNA，进行胰岛素受体 exon17PCR扩增，PCR产物进行 SSCP分析，对检出的各种基因型进行 TA克隆和测序 在PCOS患者和对照之间，PCOS合并和不合并肥胖患者之间，及PCOS合并和不合并IR患者之间进行统计学分析，胰岛素受体p一亚基的表达量采用独立样本t检(本文来源于《浙江大学》期刊2003-05-01）
胰岛素受体亚基论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:糖尿病心肌病是糖尿病的主要并发症之一,是导致糖尿病患者死亡的主要原因,临床表现为心脏舒张和(或)收缩功能障碍,可诱发心力衰竭、心律失常、心绞痛、心源性休克和猝死。糖尿病心肌病的特征性病变是心肌细胞代谢紊乱、心肌细胞肥大增生、心肌纤维化、心肌细胞凋亡、心肌细胞功能下降、细胞水平钙转运缺陷等。其中心肌细胞代谢紊乱包括心肌细胞葡萄糖利用障碍,脂肪酸利用增多,是糖尿病心肌病最早发生的功能改变。胰岛素受体及其信号转导障碍在糖尿病心肌病的心肌细胞代谢紊乱中发挥了重要作用。胰高血糖素是由胰岛α细胞分泌的激素,其主要生物学作用是促进肝糖原分解,抑制肝糖原合成,增强糖异生,升高血糖。大量研究显示,糖尿病患者体内存在高胰高血糖素血症,并与胰岛素的敏感性呈负相关,已经证实胰高血糖素为2型糖尿病发病的另一重要机制。但关于胰高血糖素的研究主要集中在其升高血糖的作用上,对其在糖尿病发病中的具体机制及其对糖尿病并发症尤其是糖尿病心肌病变的作用尚不明确。本研究拟探讨胰高血糖素对新生大鼠心肌细胞的胰岛素受体α、β亚基及葡萄糖转运体-4(glucose transporter-4,GLUT-4)表达的影响,是否对心肌细胞的糖代谢产生影响,并进一步探讨胰高血糖素在糖尿病及其心肌病变中的作用及发病机制,为研发新的治疗策略提供理论依据。方法:采用胶原酶消化和差速贴壁法分离新生大鼠心肌细胞并做原代培养。常规培养心肌细胞72小时后,更换为有血清的DMEM(Dulbecco modified Eagle medium)培养液。选取27孔细胞进行试验,细胞每9个孔分为一组,共分3组,换培养基的同时给药,第1组为正常对照组,不给予药物刺激;第2组给予胰高血糖素浓度100ng/L;第3组给予胰高血糖素浓度1000ng/L。给药后每天在倒置相差显微镜下进行细胞形态学的观察。给药48小时后进行各项指标的测定,再将每组平均分为A、B及C 3个小组,每3个孔分为1小组,即共分为9个小组:1A组、1B组、1C组、2A组、2B组、2C组、3A组、3B组、3C组,各组中的A小组用于检测胰岛素受体α亚基,B小组用于检测胰岛素受体β亚基,C小组用于检测葡萄糖转运体-4。(1)倒置相差显微镜下观察处理前后心肌细胞的形态学变化。(2)应用免疫组织化学染色方法检测心肌细胞膜上的胰岛素受体α亚基、胰岛素受体β亚基及葡萄糖转运体-4的表达量。(3)应用Image-Pro-Plus 6.0软件处理免疫组织化学染色图片,进行半定量分析后对所采集的数据用SPSS 13.0软件进行统计。结果:(1)新生大鼠心肌细胞原代培养成功。(2)分组给药后检测心肌细胞膜上胰岛素受体α、β亚基及GLUT-4表达情况,用平均光密度(mean desity)表示,1组(对照组)、2组(胰高血糖素浓度为100ng/L组)和3组(胰高血糖素浓度为1000ng/L组)叁组的胰岛素受体α亚基(F=78.504,P=0.000)、胰岛素受体β亚基(F=42.700,P=0.000)及GLUT-4(F=39.449,P=0.000)表达均有显着统计学差异。应用LSD-t检验进行两两比较,2组(胰高血糖素浓度为1000ng/L组)心肌细胞上胰岛素受体α亚基表达(P=0.000)、胰岛素受体β亚基表达(P=0.000)、GLUT-4表达(P=0.000)较1组(对照组)明显减少,有统计学意义。3组(胰高血糖素浓度为100ng/l组)心肌细胞上胰岛素受体α亚基表达(P=0.000)、胰岛素受体β亚基表达(P=0.000)、GLUT-4表达(P=0.000)较1组(对照组)明显减少,有统计学意义。3组(胰高血糖素浓度为1000ng/L组)心肌细胞上胰岛素受体α亚基表达(P=0.020)、胰岛素受体β亚基表达(P=0.027)、GLUT-4表达(P=0.010)较2组(胰高血糖素浓度为100ng/L组)明显减少,有统计学意义。结论:高胰高血糖素可导致新生大鼠心肌细胞的胰岛素受体α、β亚基及GLUT-4表达减少,且随胰高血糖素浓度升高减少更明显,胰高血糖素可能影响心肌细胞上的胰岛素受体信号转导及葡萄糖转运,引起心肌细胞糖代谢障碍,导致心肌细胞代谢紊乱,在糖尿病心肌病的发生发展过程中起了重要作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胰岛素受体亚基论文参考文献
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