枯草杆菌芽孢皮层裂解酶的分离纯化以及酶学结构分析

论文摘要

本文采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和凝胶过滤的方法对皮层裂解酶粗酶液进行分离纯化。结果表明:当硫酸铵的饱和度为60%时,大部分皮层裂解酶被聚集沉淀下来,总蛋白及皮层裂解酶活力较高,酶的比活力为158.22 U/mg,回收率为84.17%,进一步经SP-sephadex C-25离子交换层析法纯化后该酶的比活力为218.31 U/mg,回收率为68.43%,最后使用Superdex 75凝胶过滤进行分离纯化,得到了电泳纯的皮层裂解酶,并且酶的比活力为1690.75 U/mg,回收率为19.45%。纯度为粗酶液的14.98倍,纯化出的皮层裂解酶分子量为61.1 kDa。运用傅里叶光谱（FTIR）对枯草杆菌芽孢皮层裂解酶酶学结构分析,枯草杆菌皮层裂解酶在3415、1665、1080、528 cm-1波数处均有吸收峰,其中在1665 cm-1处有明显的酰胺I带,应用二阶导数和曲线拟合的方法研究枯草杆菌芽孢皮层裂解酶的二级结构,发现枯草杆菌皮层裂解酶中含12.80%的α-螺旋、31.56%的β-折叠、44.97%的β-转角、以及10.68%的无规卷曲。本文为研究HPTS杀灭芽孢的机理提供了实验材料。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与仪器
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 芽孢悬浮液的制备
•     1.2.2 枯草杆菌芽孢萌发处理
•     1.2.3 芽孢皮层裂解酶粗酶液的提取
•     1.2.4 芽孢皮层裂解酶粗酶液DPA测定
•     1.2.5 脱芽孢衣芽孢的制备
•     1.2.6 芽孢皮层裂解酶活性测定
•     1.2.7 蛋白质浓度的测定
•     1.2.8 芽孢皮层裂解酶粗酶液的分离纯化
•       1.2.8.1 硫酸铵分级沉淀
•       1.2.8.2 SP-sephadex C-25离子交换层析
•       1.2.8.3 Superdex 75凝胶过滤洗脱
•     1.2.9 芽孢皮层裂解酶SDS-PAGE凝胶电泳
•     1.2.10 枯草杆菌皮层裂解酶的结构分析
•       1.2.10.1 样品制备
•       1.2.10.2 枯草杆菌皮层裂解酶的傅里叶红外光谱扫描及图谱分析
•   1.3 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 芽孢皮层裂解酶粗酶液DPA测定
•   2.2 芽孢皮层裂解酶粗酶液硫酸铵分级沉淀试验
•   2.3 枯草杆菌芽孢皮层裂解酶粗酶液SP-sephadex C-25离子交换层析
•   2.4 枯草杆菌芽孢皮层裂解酶粗酶液Superdex 75凝胶过滤
•   2.5 皮层裂解酶结构的傅里叶红外光谱分析
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 曾朝玮,孙静,马慧娇,郭家俊,郭洪伟,章中

关键词: 枯草芽孢杆菌,芽孢,皮层裂解酶,分离纯化,二级结构

来源: 食品工业科技 2019年09期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 宁夏大学农学院

基金: 国家自然科学基金项目(31460410),国家自然科学基金项目(31760474)

分类号: TS201.3

DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.09.028

页码: 160-165+223

总页数: 7

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