张克英
（新疆阿勒泰地区卫校836500）
【摘要】革兰染色法是最常用的细菌鉴别染色法。细菌染色后，不仅可以观察其形态，而且可根据染色结果将细菌分为两大类，即革兰阳性菌和革兰阴性菌。这样有助于对细菌的鉴别，同时还可分析细菌的致病性和临床选用抗菌药物提供依据。[1]但在长期革兰染色教学中，特别是学生在初学时往往会出现一些错误，使染色结果与实际结果不一致。
【关键词】革兰染色实验教学结果分析
【中图分类号】R3【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）03-0217-01
实验准备方面，培养基的成分，如果缺乏核蛋白质镁盐就不能合成菌体成分的核蛋白质镁盐，细菌与碘和结晶紫的复合物结合就不牢固，容易脱色，可能会使革兰阳性菌染成革兰阴性菌。细菌培养的时间，要求细菌处于对数生长期，如果时间太长，变成了老龄菌，可能会使革兰阳性菌染成革兰阴性菌。染液的因素，碘液放置时间太长失效，失去媒染剂的作用，就可能使结晶紫与细菌结合不牢固，容易被脱色，使革兰阳性菌染成革兰阴性菌。结晶紫浓度太高，就会使染上的颜色不容易被酒精脱色，可能会使革兰阴性菌染成革兰阳性菌。酒精为95%，在此浓度下革兰阳性菌染上的结晶紫不易被脱去，保留紫色，革兰阴性菌易脱色，最后呈红色。若酒精为70%时，脱色能力最强，可能使革兰阳性菌染上的结晶紫也被脱去，使革兰阳性菌染成革兰阴性菌。[2]学生在革兰染色的操作中，如涂片厚度、媒染的时间、酒精脱色等方面，也常出现完全相反的结果。
1.涂片的厚度对染色结果的影响
用直径3㎜的接种环分别挑起培养24小时的大肠杆菌和培养18小时的表皮葡萄球菌满环、半环、更少量涂片，涂成直径12～15㎜的片状。各涂片30张。（见表1）
表1涂片厚度对染色结果的影响
由表1结果显示在涂片时满环，细菌没法分开，在脱色时就不能将初染的结晶紫的颜色脱出。可能就会出现革兰阴性菌也出现脱色，误认为是革兰阳性菌。而表皮葡萄球菌涂片浓厚时，以至残留大量结晶紫，经番红复染后观察不到典型的蓝紫色，而常呈现紫色。因而在涂片时应均匀分散才能得到实验的正确结果。
2.媒染时间对染色结果的影响
将培养24小时的大肠杆菌和培养18小时的表皮葡萄球菌初染，用碘液作媒染、覆盖时间为30s、60s、90s、120s，各涂片30张。（见表2）
表2媒染时间对革兰染色结果的影响
由表2可以看出，媒染时间过短，不利于初染液结晶紫与细胞之间的结合，因而可能造成革兰阳性菌染成革兰阴性菌结果。反之，媒染时间过长，容易使革兰阴性菌染成革兰阳性菌。因此，媒染时间在60s左右为宜。
3.酒精脱色时间对染色结果的影响
革兰阳性菌透性小，不易被脱色，革兰阴性菌透性大，易脱色。但这是固定的时间条件下的结果，如果脱色不够革兰阴性菌则染成革兰阳性菌，如果延长脱色时间，也会使脱色剂渗透进阳性菌的细胞壁中，使染上的结晶紫脱去颜色，经复染变成革兰阴性菌，而脱色时间太短，又会使革兰阴性菌染上的结晶紫不能完全脱色，出现紫色，误认为是革兰阳性菌。（见表3）
表3酒精脱色时间对染色结果的影响
由表3结果显示，酒精脱色时间不够，革兰阴性菌可能染成革兰阳性菌。虽然时间差5s、10s，但染色结果相差较大。革兰阳性菌为初染着色，但脱色时间过长，也可能被染成革兰阴性菌。因此，一般以30s为最佳。
4.结果分析
通过实验结果分析，可以看出学生在实际操作中可因涂片厚度、媒染时间、酒精脱色不一均会影响革兰染色的正确性。除此之外，学生在固定菌膜时也不一致，也是影响革兰染色结果的因素。对同学来讲重点强调操作因素的影响，使他们在一开始学习革兰染色，就认真对待，养成良好的学习态度，严格按照操作规程来做，提高实验结果的准确性。
参考文献
[1].张子康.何光泽主编医学微生物与免疫学实验教程1989年成都四川科学技术出版社.
[2].革兰染色影响因素探讨检验世界网引用时间：2013年12月29日.