以Delta样蛋白3为靶点的抗体偶联药物质量研究

论文摘要

目的建立一种基于半胱氨酸偶联方式的抗体偶联药物抗Delta样蛋白3 （DLL3）单抗-MPVP-PBD的质控方法。方法本实验利用转基因细胞法,以转染了DLL3的HEK 293T细胞系为靶细胞测定抗DLL3单抗-MPVP-PBD的生物学活性;利用ELISA法测定结合活性;利用CE-SDS和SEC-UPLC测定大小异质性;利用i CIEF分析电荷异质性;分别利用HIC-HPLC和LC-MS对药物抗体偶联比（drug-to-antibody ratio,DAR）进行测定;利用RP-HPLC测定游离小分子药物含量。结果抗DLL3单抗-MPVP-PBD的生物学活性EC50平均值为（4. 02±0. 22） ng·m L-1,RSD为5. 47%;结合活性EC50平均值为（12. 67±1. 09） ng·m L-1,RSD为8. 60%;非还原CE-SDS完整Ig G峰面积百分比为（25. 58±0. 15）%、HHL为（36. 56±0. 24）%、轻链为（14. 61±0. 13）%等,RSD均小于2%;还原CE-SDS重链和轻链峰面积之和为（96. 97±0. 31）%,RSD为0. 32%; SEC-UPLC主峰面积为（98. 68±0. 05）%,多聚体（1. 32±0. 05）%,RSD均小于5%; i CIEF主峰面积为（68. 19±0. 68）%,主峰等电点（8. 28±0. 01）,RSD均小于2%; LC-MS测定DAR为2. 08（完整相对分子质量水平）和1. 73（轻重链水平）; HIC-HPLC测定DAR为（1. 86±0. 03）,0-药物为（19. 49±0. 28）%,1-药物为（11. 21±0. 20）%,2-药物为（48. 64±0. 68）%,3-药物为（5. 21±0. 40）%,4-药物为（15. 44±1. 19）%,RSD均小于10%; LC-MS测定了偶联位点占有率;RP-HPLC测定游离小分子药物为（23. 20±0. 82）%,RSD为3. 53%。结论本实验初步建立了抗体偶联药物抗DLL3单抗-MPVP-PBD的质控方法,该质控方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可作为其常规检测方法,为我国相关抗体偶联药物的质量检测提供了参考依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 样品
•   1.2 细胞
•   1.3 主要仪器及试剂
•   1.4 方法
•     1.4.1 生物学活性
•     1.4.2 结合活性
•     1.4.3 SEC-UPLC纯度分析
•     1.4.4 CE-SDS纯度分析
•     1.4.5 i CIEF电荷异质性分析
•     1.4.6 药物抗体偶联比测定
•     1.4.7 LC-MS肽图分析
•     1.4.8 RP-HPLC测定游离小分子药物
• 2 结果
•   2.1 生物学活性
•   2.2 结合活性
•   2.3 SEC-UPLC分析大小异质性
•   2.4 CE-SDS分析大小异质性
•   2.5 i CIEF分析电荷异质性
•   2.6 DAR测定
•     2.6.1 LC-MS完整蛋白水平
•     2.6.2 LC-MS亚单位水平
•     2.6.3 HIC-HPLC测定DAR
•   2.7 LC-MS肽图分析偶联位点占有率
•   2.8 RP-HPLC测定游离小分子药物
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李萌,孙亮,朱磊,于传飞,王文波,武刚,张荣建,崔永霏,王兰

关键词: 抗体偶联药物,质量控制,生物学活性,药物抗体偶联比,游离小分子药物

来源: 中国药学杂志 2019年24期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 药学

单位: 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室,中国人民解放军火箭军特色医学中心

基金: 国家“重大新药创制”科技重大专项项目资助(2018ZX09736016-007)

分类号: R917

页码: 2018-2027

总页数: 10

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