导读:本文包含了裂解型腺病毒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:禽流感病毒,HA2蛋白,延迟裂解,沙门菌
裂解型腺病毒论文文献综述
王占楠,刘晶,王棋,姚心茹,王成宇[1]（2017）在《表达H9N2亚型禽流感病毒HA2蛋白的延迟裂解型沙门菌DNA疫苗载体的构建》一文中研究指出为了构建表达禽流感病毒H9N2亚型血凝素HA2蛋白的延迟裂解型沙门氏菌载体,本试验首先将绿色荧光片段EGFP插入到真核表达载体p YA4545中,构建重组质粒p YA4545-EGFP,并转染巨噬细胞系RAW264.7,共聚焦显微镜下观察其表达情况;再通过PCR技术扩增HA2基因,将其克隆到沙门菌载体p YA4545中,构建重组质粒p YA4545-HA2,继而转染HEK-293T细胞,收集细胞总蛋白,通过Western-blot检测HA2蛋白的表达情况;最后将重组质粒电转到沙门菌宿主χ11218中,检测重组菌对阿拉伯糖的依赖性。结果,p YA4545真核表达体系能够有效表达;重组质粒p YA4545-HA2的HA2蛋白成功表达;重组菌对阿拉伯糖具有明显依赖性。本试验成功获得了以延迟裂解型沙门氏菌为载体表达禽流感病毒HA2蛋白的菌株,为后续开发以HA2为目标抗原的新型口服疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2017年07期）
张文峰,李壮华,陈镜塘,邵红伟,陈业诚[2]（2016）在《基于pH值敏感的荧光染料分析腺病毒诱导T淋巴细胞胞内体膜的裂解》一文中研究指出【目的】探索基于pH值敏感的荧光染料分析腺病毒裂解T淋巴细胞胞内体膜的实验方法。【方法】本文以Jurkat细胞(T淋巴瘤细胞)为靶细胞,将pH值敏感的荧光染料pHrodo dextran与5型腺病毒(Ad5)共同孵育Jurkat细胞,对pHrodo dextran孵育的浓度与时间进行了优化,利用激光共聚焦显微镜分析胞内相对平均荧光强度百分比随时间的变化情况,反映Ad5诱导胞内体膜裂解情况。【结果】研究结果表明,在pHrodo dextran终浓度为80μg/m L,孵育时间为10 min条件下,在病毒感染后的30 min,相对平均荧光强度百分比出现显着下降;利用巴佛洛酶素A1抑制胞内体膜质子泵活性后,相对平均荧光强度百分比出现轻微下降。【结论】建立了基于pHrodo dextran分析腺病毒诱导T细胞胞内体膜裂解的新方法。(本文来源于《微生物学报》期刊2016年11期）
周忆新,谢宇锋,叶震敏,盛伟华,杨吉成[3]（2010）在《裂解型腺病毒Ad-E1A的构建以及体外对肝癌细胞的作用》一文中研究指出目的构建Ad-E1A裂解型腺病毒载体,研究其对肝癌细胞的裂解作用。方法以QBI-293A细胞基因组DNA为模板,用特异性引物PCR法扩增E1A基因,酶切后连接到pAdTrack-CMV转移质粒上,用PmeI酶对pAdTrack-CMV-E1A线性化后,与pAdEasy-1共转化在BJ5183大肠杆菌中进行同源重组,筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-E1A;再用PacI酶切对重组腺病毒质粒线性化,脂质体转染QBI-293A细胞,收获Ad-E1A腺病毒子。在QBI-293A细胞中多轮感染后获得高效价的病毒。将Ad-E1A腺病毒感染SMMC-7721,并用MTT和流式细胞仪检测Ad-E1A对人肝癌细胞生长和细胞周期的影响。结果获得高滴度的重组裂解型腺病毒Ad-E1A。Ad-E1A感染SMMC-7721后,出现明显的细胞病变。Ad-E1A对人肝癌细胞SMMC-7721的生长有明显抑制,48 h后效果明显。Ad-E1A可直接诱导SMMC-7721细胞的凋亡。结论裂解型腺病毒Ad-E1A构建成功并可以显着抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长,并在肝癌细胞中复制造成细胞裂解,诱导肝癌细胞的凋亡。(本文来源于《江苏医药》期刊2010年03期）
周忆新[4]（2007）在《裂解型基因重组腺病毒对人黑色素瘤细胞及小鼠肝癌抑瘤作用的实验研究》一文中研究指出目的:构建裂解型腺病毒载体,研究其体外对黑色素瘤细胞及小鼠腹水型肝癌的抑制作用。方法:利用本室已构建的pUCm-T-E1A质粒为模板进行PCR,将目的片段用HindⅢ、EcoRV双酶切后连接到带有GFP标记的pAdTrack-CMV质粒上,PmeI线性化重组质粒pAdTrack-CMV-E1A与腺病毒质粒pAdeasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒表达载体pAdeasy-1-pAdTradck-CMV-E1A经pacI线性化后转染QBI-293A细胞;收获病毒重组子。将获得的重组病毒子感染A375黑色素瘤细胞。然后分别用RT-PCR、流式细胞仪及MTT法等方法鉴定E1A基因的表达并且研究其对小白鼠腹水型肝癌的抑制及其免疫功能的影响。结果:成功构建了裂解型腺病毒Ad-E1A,可显着裂解A375黑色素瘤细胞,抑制细胞生长。Ad-E1A可体内抑制小鼠腹水型肝癌的生长,且对小鼠的免疫器官没有抑制,同时可提高中性粒细胞和单核细胞的数目。结论:裂解型腺病毒Ad-E1A可在体外裂解黑色素瘤细胞,抑制人黑色素瘤细胞生长。体内抑制小鼠腹水型肝癌H22的生长,并可以提高小白鼠免疫功能。(本文来源于《苏州大学》期刊2007-10-01）
叶震敏,汪小华,钟江,缪竞诚,盛伟华[5]（2006）在《裂解型腺病毒Ad-E1A对人脐静脉内皮细胞的影响》一文中研究指出以QBI-293A细胞基因组DNA为模板,PCR扩增E1A基因,酶切连接到pAdTrack-CMV转移质粒上,pAdTrack-CMV-E1A经PmeI线性化后,与pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-E1A,经PacI线性化,脂质体转染QBI-293A细胞,获得裂解型腺病毒Ad-E1A。裂解型腺病毒Ad-E1A在ECV304细胞内复制裂解,抑制细胞的生长,并可以降低VEGF的表达,探讨了Ad-E1A可能通过抑制ECV304细胞NF-κB的激活而引起细胞生长抑制的机制,说明Ad-E1A具有抑制肿瘤转移的功能。(本文来源于《生物工程学报》期刊2006年03期）
叶震敏[6]（2006）在《裂解型腺病毒基因治疗人肝癌细胞及其转移瘤的体内外实验研究》一文中研究指出目的:构建裂解型腺病毒载体,研究其体内外治疗人肝癌细胞及其转移瘤的效果和机理。方法:抽提QBI-293A细胞的基因组DNA,根据Genebank公布的第5血清型腺病毒(Ad5)的E1A基因序列设计并合成一对引物,采用PCR技术克隆人E1A基因,将其亚克隆到pUCm-T载体并鉴定。以测序正确的pUCm-T-E1A为模板,酶切目的基因片段,连接到转移载体pAdTrack-CMV上,形成重组载体pAdTrack-CMV-E1A。重组载体经PmeI酶切后与pAdEasy-1腺病毒载体在BJ5183大肠杆菌中同源重组,得到的重组腺病毒载体pAdeasy-1-pAdTrack-CMV-E1A经PacI酶切后脂质体转染QBI-293A细胞,获得重组裂解型腺病毒rAd-E1A。rAd-E1A感染人肝癌细胞HepG2, SMMC-7721和人正常肝细胞HL-7702,显微镜下观察rAd-E1A对细胞的裂解效果,MTT法和流式细胞仪检测rAd-E1A对细胞生长抑制和诱导凋亡作用。RT-PCR和Western-blotting鉴定rAd-E1A的作用机理。在nu/nu裸鼠皮下建立SMMC-7721人肝癌的动物模型,观察rAd-E1A基因治疗肝癌的效果,并进一步研究其机理。在小白鼠腹水型肝癌H22基因治疗模型中,检测rAd-E1A对小白鼠免疫器官(胸腺,脾脏)和免疫细胞(白细胞,淋巴细胞,单核细胞,中性粒细胞)的影响。MTT法检测rAd-E1A对人脐静脉内皮细胞ECV304生长的影响,ELISA检测对ECV304细胞分泌血管内皮生长因子VEGF的影响,Western-blotting鉴定rAd-E1A对ECV304细胞的NF-κB。结果:成功获得1194bp的E1A基因及其上游开放可译框架(ORF),序列测定结果与GenBank报道的完全一致。并成功构建了裂解型腺病毒rAd-E1A,可显着裂解人肝癌细胞HepG2, SMMC-7721,诱导细胞的凋亡,抑制细胞生长,而对人正常肝细胞HL-7702作用较弱。rAd-E1A可体内抑制人肝癌和小鼠腹水型肝癌的生长,且对小白鼠的免疫器官没有抑制,同时可提高中性粒细胞和单核细胞的数目。rAd-E1A在人肝癌细胞中上调Fas,Bax,下调survivin和Bcl-2的表达,另外在人肝癌组织中上调凋亡相关因子p53,p27,caspase-3,下调血管生成相关因子VEGF和CD34的表达。rAd-E1A明显抑制ECV304内皮细胞增殖和下调VEGF和NF-κB的表达。(本文来源于《苏州大学》期刊2006-04-01）
裂解型腺病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】探索基于pH值敏感的荧光染料分析腺病毒裂解T淋巴细胞胞内体膜的实验方法。【方法】本文以Jurkat细胞(T淋巴瘤细胞)为靶细胞,将pH值敏感的荧光染料pHrodo dextran与5型腺病毒(Ad5)共同孵育Jurkat细胞,对pHrodo dextran孵育的浓度与时间进行了优化,利用激光共聚焦显微镜分析胞内相对平均荧光强度百分比随时间的变化情况,反映Ad5诱导胞内体膜裂解情况。【结果】研究结果表明,在pHrodo dextran终浓度为80μg/m L,孵育时间为10 min条件下,在病毒感染后的30 min,相对平均荧光强度百分比出现显着下降;利用巴佛洛酶素A1抑制胞内体膜质子泵活性后,相对平均荧光强度百分比出现轻微下降。【结论】建立了基于pHrodo dextran分析腺病毒诱导T细胞胞内体膜裂解的新方法。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
裂解型腺病毒论文参考文献
[1].王占楠,刘晶,王棋,姚心茹,王成宇.表达H9N2亚型禽流感病毒HA2蛋白的延迟裂解型沙门菌DNA疫苗载体的构建[J].中国兽医科学.2017
[2].张文峰,李壮华,陈镜塘,邵红伟,陈业诚.基于pH值敏感的荧光染料分析腺病毒诱导T淋巴细胞胞内体膜的裂解[J].微生物学报.2016
[3].周忆新,谢宇锋,叶震敏,盛伟华,杨吉成.裂解型腺病毒Ad-E1A的构建以及体外对肝癌细胞的作用[J].江苏医药.2010
[4].周忆新.裂解型基因重组腺病毒对人黑色素瘤细胞及小鼠肝癌抑瘤作用的实验研究[D].苏州大学.2007
[5].叶震敏,汪小华,钟江,缪竞诚,盛伟华.裂解型腺病毒Ad-E1A对人脐静脉内皮细胞的影响[J].生物工程学报.2006
[6].叶震敏.裂解型腺病毒基因治疗人肝癌细胞及其转移瘤的体内外实验研究[D].苏州大学.2006