双酚A诱导下双齿围沙蚕实时荧光定量PCR内参基因的筛选

论文摘要

为了筛选出在双酚A诱导下双齿围沙蚕（Perinereis aibuhitensis）体壁组织中最适内参基因,以不同浓度双酚A诱导下双齿围沙蚕互补脱氧核糖核酸（cDNA）为模板进行实时荧光定量PCR,利用Ge Norm、Norm Finder和Bestkeeper三个软件对肌动蛋白（beta-actin, Actin）、核糖体蛋白5（ribosomal protein L5, RPL5）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH）、微管蛋白（β-tubulin, Tub）、琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase complex flavoprotein subunit A, SDHA）和组蛋白（Histone Cluster 1 H2A Family Member A, HH2A）这6个备选内参基因的表达量进行分析,筛选出稳定表达的内参基因。结果表明6个内参基因的基因表达量由大到小为Actin>GAPDH>SDHA>HH2A>Tub>RPL5,Bestkeeper软件分析得到6种内参基因稳定性排名为Actin>RPL5>SDHA>Tub>HH2A>GAPDH,Ge Norm软件分析得出6种内参基因的稳定性排名为SDHA>RPL5>Actin>Tub>HH2A>GAPDH,Normfinder分析的结果为Actin>SDHA>RPL5>Tub>HH2A>GAPDH。综合以上结果确定双酚A诱导下双齿围沙蚕最优内参基因为Actin,不推荐GAPDH作为内参基因使用。推荐同时选取多对内参基因进行实验,可以进一步减少误差。

论文目录

• 1 材料与方法 （Materials and methods）
•   1.1 实验材料
•   1.2 毒性实验
•   1.3 RNA提取及c DNA合成
•   1.4 引物设计
•   1.5 实时荧光定量PCR
•   1.6 数据分析
• 2 结果 （Results）
•   2.1 RNA质量检测
•   2.2 内参基因的表达水平分析
•   2.3 内参基因的稳定性分析
•     2.3.1 Bestkeeper软件分析结果
•     2.3.2 Ge Norm软件分析结果
•     2.3.3 Normfinder软件分析
•     2.3.4 综合分析
• 3 讨论 （Discussion）

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 薛圣伦,黄艺,孙嘉,杨大佐,周一兵,赵欢

关键词: 双酚,双齿围沙蚕,内参基因

来源: 生态毒理学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,环境科学与资源利用

单位: 大连海洋大学辽宁省海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室,大连海洋大学农业农村部北方海水增养殖重点实验室

基金: 辽宁省大型仪器设备共享服务平台能力建设基金,农业农村部北方海水增养殖重点实验室开放课题(2018-KF-15)

分类号: X174

页码: 144-152

总页数: 9

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