枯草芽孢杆菌壳聚糖酶在毕赤酵母中的高效表达及其酶解特性

论文摘要

研究枯草芽孢杆菌壳聚糖酶基因(Bs Csn46)在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中的高效表达、重组酶性质及其酶解特性。重组菌在5 L发酵罐高密度发酵后胞外酶活力高达50 370 U/mL,蛋白质量浓度15.7 mg/mL。粗酶经强阴离子交换层析纯化,纯酶比活力为4 065.7 U/mg,最适pH 6.0,最适温度55℃,在45℃以下保持稳定。该酶水解3 g/100 mL壳聚糖得到主产物为二糖、三糖和四糖的壳寡糖,水解率为92.8%,壳寡糖得率为90.9%。本研究的重组壳聚糖酶产酶水平和水解效率高,为工业化制备壳聚糖酶及大规模制备壳寡糖的应用提供了理论支持。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 壳聚糖酶基因密码子优化及其在毕赤酵母中的表达
•     1.3.2 BsCsn46高密度发酵
•     1.3.3 壳聚糖酶活力及蛋白含量的测定
•     1.3.4 BsCsn46的纯化
•     1.3.5 SDS-PAGE、去糖基化及壳聚糖酶酶谱分析
•     1.3.6 BsCsn46的酶学性质分析
•     1.3.7 BsCsn46底物特异性及水解特性
•     1.3.8 BsCsn46水解壳聚糖制备壳寡糖
•     1.3.9 水解产物成分分析及定量
•   1.4 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 壳聚糖酶基因密码子优化及其在毕赤酵母中的高效表达
•   2.2 BsCsn46的纯化
•   2.3 BsCsn46的酶学性质分析
•   2.4 BsCsn46的底物特异性及水解特性
•   2.5 水解壳聚糖制备壳寡糖
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 马帅,杨绍青,刘翊昊,闫巧娟,江正强

关键词: 枯草芽孢杆菌,壳聚糖酶,高效表达,酶学性质,壳寡糖

来源: 食品科学 2019年14期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 北京食品营养与人类健康高精尖创新中心中国农业大学食品科学与营养工程学院,中国农业大学工学院

基金: 国家自然科学基金面上项目(21576283),“十三五”国家重点研发计划重点专项(2017YFD0400204)

分类号: TQ920.1

页码: 99-106

总页数: 8

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