氯丙嗪抗体制备与酶联免疫吸附测定方法的建立

论文摘要

本研究针对动物性食品中违禁药物氯丙嗪残留问题,建立了针对氯丙嗪的酶联免疫吸附测定方法。首次通过以氯丙嗪为原料,先去甲基化合成N-甲基氯丙嗪,再与丙烯酸叔丁酯反应及水解等步骤成功合成了氯丙嗪半抗原（CPZ-H）。半抗原CPZ-H分别与OVA和BSA通过活泼酯法偶联合成包被原与免疫原,采用免疫原CPZ-H-BSA免疫新西兰大白兔成功制备了特异性的抗氯丙嗪的多克隆抗体。基于该抗体建立了快速测定氯丙嗪的间接竞争酶联免疫吸附测定方法（ic-ELISA）。通过优化ic-ELISA方法的最佳工作条件,确定包被原和抗体稀释倍数均为1:8000时效果最好,此时标准曲线的IC50为1.1 ng/mL,线性范围为:0.13 ng/mL～8.8 ng/mL。制备的抗氯丙嗪的多克隆抗体与其它氯丙嗪类似物无交叉反应,特异性好。本研究为今后高特异性氯丙嗪快速检测试剂盒的制备提供依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验动物
•   1.2 试剂与药品
•   1.3 主要仪器与设备
•   1.4 半抗原的合成
•   1.5 抗原的合成
•     1.5.1 混合酸酐法制备包被原
•     1.5.2 活性酯法制备免疫原
•   1.6 抗体的制备
•   1.7 ic-ELISA操作步骤
•   1.8 ic-ELISA条件优化
•     1.8.1 包被抗原最佳包被浓度和单抗稀释度的选择
•     1.8.2 包被抗原的包被条件及封闭条件的选择
•     1.8.3 竞争性ELISA标准曲线的建立
•   1.9 抗体的特异性分析
• 2 结果与分析
•   2.1 半抗原设计合成和鉴定
•   2.2 人工抗原原的鉴定
•   2.3 ic-ELISA检测方法的建立
•     2.3.1 检测条件的优化
•     2.3.2 竞争性ELISA标准曲线的建立
•   2.4 抗血清特异性分析
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 袁利鹏,刘波,尹凯丹

关键词: 氯丙嗪,半抗原,酶联免疫吸附分析方法

来源: 现代食品科技 2019年08期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 广东农工商职业技术学院热带农林学院

基金: 广东省自然科学基金项目(2015A030313793),国家级星火计划项目(2015GA780082),广东省教育厅高职食品加工技术专业领军人才项目,广东农工商职业技术学院重点课题(xyzd1606)

分类号: TS207.5

DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2019.8.045

页码: 325-330

总页数: 6

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