生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌的鉴定及耐药分子特征研究

论文摘要

为了解生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌（S.aureus）的污染及耐药情况,研究其耐药的分子特征,本研究利用国标法分离了来自浙江杭州市某奶牛场99份生鲜乳中的S.aureus,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）进行鉴定,对其进行质谱聚类分析和16S r DNA系统发育分析,采用微量肉汤稀释法测定其最小抑菌浓度（MIC）,利用Illlumina Hi Seq 4000平台对其进行全基因组测序,通过Res Finder数据库分析其耐药基因,利用EasyFig和BRIG软件进行耐药质粒比对分析。结果显示在99份生鲜牛乳中共分离到5株S.aureus （5.1%）,其质谱聚类和16S r DNA系统发育分析树形具有较高一致性。发现两株耐甲氧西林S.aureus （MRSA） SABHZ053和SABHZ079,且其多位点序列分型（MLST）同为ST965,其中菌株SABHZ079对青霉素、红霉素、克林霉素、头孢西丁、氧氟沙星、替米考星和庆大霉素7种抗生素耐药。全基因组测序分析后显示菌株SABHZ053和SABHZ079的染色体中均含有aph（3’）-III、ant（6）-Ia和mecA耐药基因。菌株SABHZ053存在2个耐药质粒,pSA053-1 （4 439 bp）介导tet（K）对四环素类耐药,pSA053-2 （34 609 bp）介导blaZ对青霉素耐药。菌株SABHZ079有3个耐药质粒,其中pSABHZ079-1 （39 227 bp）与pSA053-2同源,但相对插入了Tn551-erm（B）-aph（2’’）-Ia转座单元,可以介导其对大环内脂类和庆大霉素的耐药,质粒pSABHZ079-2 （2 473 bp）介导erm（C）对大环内脂类耐药,而质粒pSABHZ079-3（4 439 bp）与pSA053-1完全相同。另外,本研究显示耐药质粒pSABHZ079-1可分为骨架I和II两部分,可能分别由来自人源的pNTUH3874与pN315或其相似质粒杂合而来。本研究揭示了该奶牛场生鲜乳中S.aureus耐药性的分子特征,表明耐药质粒和转座元件是其耐药性产生的重要因子,为奶牛场合理用药和控制S.aureus的抗药性提供重要参考。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要实验材料
•   1.2 S.a ure us的分离
•   1.3 菌落的MALDI-TOF MS鉴定分析
•   1.4 S.a ure us 16S r DNA测序分析
•   1.5 S.a ure us的药敏试验
• 2 结果
•   2.1 S.a ure us的分离结果
•   2.2 不同形态葡萄球菌的MALDI-TOF MS鉴定
•   2.3 16S r DNA与MALDI BioType r P CA系统发育树比较
•   2.4 S.a ure us的药敏试验
•   2.5 菌株S ABHZ053和S ABH079的质粒序列比较分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张玲,常江,吴俐勤,裘罕琦,周沁怡,戴贤君,杨华,夏效东,唐标

关键词: 生鲜乳,金黄色葡萄球菌,耐药质粒

来源: 中国预防兽医学报 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 西北农林科技大学食品科学与工程学院,浙江省农业科学院农产品质量标准研究所,中国计量大学现代科技学院,南京农业大学动物医学院

基金: 省部共建农产品质量安全国家重点实验室(筹)(2010DS700124-ZZ1703,ZZ1905),浙江省基础公益研究项目(2017C32021),国家自然科学基金青年项目(31700007),浙江省农业科学院青年人才及国际合作培养项目(2017R19R08E01)

分类号: S852.611

页码: 899-905

总页数: 7

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