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诺如病毒GII.4流行株VP1蛋白的抗原性变异及其与VP2蛋白的相互作用研究

2020-12-08阅读(574)

诺如病毒GII.4流行株VP1蛋白的抗原性变异及其与VP2蛋白的相互作用研究

论文摘要

诺如病毒（norovirus,NOV）是一种引起急性肠胃炎的病原体,其中的GII.4基因型的病毒株在全球性诺如病毒流行中占据着主导地位。近年来的研究表明,诺如病毒GII.4病毒株的主要衣壳蛋白VP1的突变是GII.4病毒株逃避免疫的重要因素。现阶段多数研究均以主要衣壳蛋白VP1为对象,而次要衣壳蛋白VP2的功能与变异机制尚不明确。本课题首先以近期流行株DenHaag2006b、NewOrleans2009及Sydney2012为主要研究对象,系统表达各个时期流行株VP1蛋白,并构建特异性单克隆抗体,确定各个时期流行株实现免疫逃逸的关键氨基酸位点。这些结果进一步阐明GII.4流行株逃避群体免疫而导致周期性大流行的分子机理,为新型疫苗与药物的设计提供重要的理论基础。另一方面,我们通过构建真核细胞的表达体系,对VP1和VP2之间的相互作用进行了研究。结果显示,通过它们之间的相互作用,VP1能显著促进VP2的表达,VP2也能显著促进VP1的表达。进一步的研究发现,单独的VP1蛋白分散在整个细胞中,而VP2蛋白则具有核定位的功能。在VP1和VP2共同存在的情况下,VP1通过VP2的介导,同样也定位在了细胞核上。这些结果提示我们,VP2可能在功能和结构上对VP1的功能和位置变化至关重要,在VP2的协同下,VP1可能通过影响细胞核下游转录信号和染色质重构而在影响细胞功能方面发挥关键作用。然后我们通过生物信息学手段对VP2蛋白序列进行比对和预测,发现VP2蛋白存在核定位序列,并对预测得到的核定位序列进行了验证,确定VP2蛋白的入核依赖核定位序列的作用。这些结果为诺如病毒的防治提供了新的思路,启示我们可以通过阻断VP1和VP2蛋白之间的相互作用或者阻断VP2蛋白的入核过程来治疗诺如病毒感染引起的急性肠胃炎。

论文目录

  • 摘要
  • abstract
  • 第一章 绪论
  •   1 诺如病毒的流行、传播及后果
  •   2 诺如病毒的分类和遗传多样性
  •   3 诺如病毒的组成和结构
  •   4 诺如病毒的生命周期
  •   5 诺如病毒的发病机制
  •   6 诺如病毒疫苗研究现状及本课题的目的和意义
  • 第二章 诺如病毒GII.4 流行株主要衣壳蛋白VP1 抗原性漂变规律的研究
  •   1 实验材料
  •     1.1 试剂和耗材
  •     1.2 仪器和设备
  •   2 实验方法
  •     2.1 GII.4 近期流行株VP1 蛋白的原核表达、纯化及鉴定
  •     2.2 2012 VP1 单克隆抗体的制备、纯化及鉴定
  •     2.3 EIA检测单克隆抗体与不同年份流行株衣壳蛋白的结合
  •     2.4 诺如病毒GII.4 病毒株氨基酸突变位点的筛选
  •   3 实验结果
  •     3.1 GII.4 近期流行株VP1 蛋白的原核表达、纯化和鉴定结果
  •     3.2 2012 VP1 单克隆抗体的制备、纯化及鉴定
  •     3.3 EIA检测单克隆抗体与不同年份流行株衣壳蛋白的结合
  •     3.4 诺如病毒GII.4 病毒株抗原漂变相关的氨基酸突变位点筛选
  •   4 讨论
  • 第三章 诺如病毒衣壳蛋白VP1和VP2 的相互作用
  •   1 实验材料
  •     1.1 试剂和耗材
  •     1.2 仪器和设备
  •   2 实验方法
  •     2.1 重组真核表达质粒的鉴定
  •     2.2 构建293T真核表达体系
  •     2.3 提取293T细胞总蛋白
  •     2.4 Western Blots
  •     2.5 利用激光共聚焦显微镜观察细胞爬片
  •     2.6 生物信息学分析
  •   3 实验结果
  •     3.1 重组真核表达质粒的双酶切鉴定
  •     3.2 诺如病毒衣壳蛋白VP1和VP2在293T细胞中的表达
  •     3.3 诺如病毒主要衣壳蛋白VP1 的亚细胞定位
  •     3.4 诺如病毒次要衣壳蛋白VP2 的亚细胞定位
  •     3.5 VP1 通过与VP2 的相互作用定位在细胞核上
  •     3.6 核定位序列的生物信息学分析
  •   4 讨论
  • 第四章 诺如病毒VP2蛋白核定位序列的确定
  •   1 实验材料
  •     1.1 试剂和耗材
  •     1.2 仪器和设备
  •   2 实验方法
  •     2.1 VP2 亚克隆及其突变体重组质粒的构建和鉴定
  •     2.2 VP2 亚克隆及其突变体重组质粒的表达
  •     2.3 利用激光共聚焦显微镜观察细胞爬片
  •   3 实验结果
  •     3.1 VP2 亚克隆及其突变体重组质粒的双酶切鉴定
  •     3.2 激光共聚焦显微镜观察红色荧光蛋白的定位
  •   4 讨论
  • 第五章 结论
  •   1 诺如病毒GII.4 流行株的抗原漂变的关键位点
  •   2 主要衣壳蛋白VP1 和次要衣壳蛋白VP2 的相互作用促进衣壳蛋白的表达
  •   3 次要衣壳蛋白VP2 具有核定位功能
  •   4 主要衣壳蛋白VP1在VP2 的介导下定位在细胞核上
  •   5 确定了VP2 的核定位序列
  • 参考文献
  • 附录
  •   1 搜集的360 条诺如病毒序列及其基因分型
  •   2 科研成果
  • 致谢

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 刘知理

    导师: 赵政

    关键词: 诺如病毒,免疫逃逸,核定位序列

    来源: 华东师范大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 华东师范大学

    分类号: R373

    总页数: 93

    文件大小: 3809K

    下载量: 141

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