禽腺病毒4型中国流行株Fiber2蛋白的原核表达与间接ELISA抗体检测方法的建立

论文摘要

为建立禽腺病毒4型（FAdV-4）特异性抗体检测方法,将密码子优化合成的FAdV-4中国流行株Fiber2蛋白的编码基因克隆于pET-32a（+）载体,在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达。用纯化的Fiber2蛋白作为包被抗原,通过一系列条件的优化,建立了一种检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法。结果:该方法可以特异地检测抗FAdV-4抗体,与新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、H5和H9亚型禽流感病毒等常见禽病毒的抗血清均无交叉反应,表明所建立ELISA具有较好的特异性;FAdV-4阳性血清经1?3 200稀释后检测结果仍为阳性,表明所建立ELISA方法具有较高的敏感性;所建立ELISA的批内和批间重复试验的变异系数分别为1.5%～5.2%和1.1%～5.6%,表明其重复性良好。应用建立的ELISA方法对河南省及周边部分地区养禽场内FAdV-4的感染情况进行了血清流行病学调查,结果显示被检地区养禽场均存在不同程度的FAdV-4型抗体阳性,平均阳性率为59.53%。由此表明本研究所建立的ELISA方法可以用于FAdV-4感染的监测和流行病学调查。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 质粒和菌种
•   1.2 主要试剂和材料
•   1.3 Fiber2蛋白表达与纯化
•   1.4 纯化产物的Western blot 鉴定
•   1.5 Fiber2蛋白间接ELISA方法的建立
•   1.6 血清阴阳性临界值的确定
•   1.7 特异性和敏感性试验
•   1.8 重复性试验
•   1.9 准确性试验
•   1.10 临床血清样品检测
• 2 结果
•   2.1 Fiber2蛋白的制备
•   2.2 纯化产物的Western blot 鉴定
•   2.3 间接ELISA最佳反应条件的确定
•   2.4 间接ELISA方法判定标准的确定
•   2.5 特异性和敏感性
•   2.6 重复性试验
•   2.7 准确性试验
•   2.8 临床血清样品检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 田开月,张玉菡,郭慧芳,李宁,杨霞,王增,赵军

关键词: 禽腺病毒型,蛋白,间接,流行病学调查

来源: 畜牧与兽医 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南农业大学牧医工程学院

基金: 国家重点研发计划(2016YFD0500800,2016YFD0501100)

分类号: S852.65

页码: 76-80

总页数: 5

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