水产品中副溶血性弧菌交叉引物恒温扩增检测技术的建立与应用

论文摘要

目的建立水产品中副溶血性弧菌的交叉引物恒温扩增(CPA)检测技术。方法用加热煮沸法提取菌株和增菌液中的DNA,在对副溶血性弧菌基因序列进行分析、对比基础上,选择特异性强且高度保守的目的基因序列,设计合成交叉恒温扩增引物。对CPA技术反应条件优化,建立副溶血性弧菌的的快速检测方法,检测方法的敏感性和特异性,并和荧光定量PCR方法进行比较。同时利用该法对采集的水产品中的副溶血性弧菌进行监测。结果该法60℃、40 min即可完成反应,敏感性和特异性高,最低检测限为14 CFU/mL,与荧光定量PCR法类似。结论建立的副溶血性弧菌交叉引物恒温扩增检测法,不需要昂贵的PCR仪,仅需1台水浴锅或金属浴即可完成细菌DNA的扩增,密闭的核酸检测试纸条使结果判定直观、客观,且可有效避免气溶胶污染,方法的敏感性和特异性高,可用于副溶血性弧菌的现场快速检测。

论文目录

• 1 材 料
•   1.1 样品来源
•   1.2 仪器与试剂
• 2 方法
•   2.1 CPA引物设计与合成
•   2.2 CPA引物的筛选与验证
•   2.3 反应条件的优化
•   2.4 增菌培养
•   2.5 核酸检测前处理 （模板制备）
•   2.6 实时荧光定量PCR检测
•   2.7 恒温扩增反应
•   2.8 敏感性试验
•   2.9 特异性试验
•   2.10 方法应用
• 3 结 果
•   3.1 敏感性试验结果
•   3.2 特异性试验结果
•   3.3 CPA法在水产品中副溶血性弧菌监测中的应用
• 4 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 虞艳,翁永夫,周缀琴,虞其臻,鲍纪明,吴漆波,张森,卢亦愚,徐昌平

关键词: 副溶血性弧菌,交叉引物恒温扩增技术,食品检测

来源: 海峡预防医学杂志 2019年02期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业,预防医学与卫生学

单位: 舟山市定海区疾病预防控制中心,浙江省疾病预防控制中心

基金: 舟山市科技计划项目(No:2017C31133)

分类号: R155.5

页码: 52-54

总页数: 3

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