王涛1王蕾2谢旭善2张伟2
（1青岛市市立医院山东青岛260012；2青岛市海慈医疗集团山东青岛260033）
【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）27-0205-02
五味保肝丸是我院传统中药制剂，丹参为组方主要药物之一。为进一步提高内在质量标准，保证临床疗效，对该复方制剂中丹参的主要药效成分丹参酮ⅡA含量进行测定方法研究。
1仪器、试剂与药材
1.1仪器Agilent1100型高效液相色谱仪(美国);JA2003型电子分析天平（上海）;超声波清洗器:KQ100型(昆山市超声波仪器厂)。
1.2试剂与药材丹参酮ⅡA对照品（中国药品生物制品检定所，批号:110766-200417)，乙腈（上海化学试剂厂，色谱纯），水为超纯水,其余试剂均为分析纯。五味保肝丸和缺丹参的阴性对照样品由本院中药制剂实验室按处方工艺制备；药材取自本院中药库，经鉴定丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥干燥根和根茎。
2试验方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：DOSC18柱(250×4.6mm,5μm)；流动相:乙腈-水（70﹕30）；检测波长:270nm；柱温为30℃；流速为1.0mL·min-1；理论塔板数按丹参酮ⅡA的峰计不低于2000。
2.2对照品溶液制备精密称取丹参酮ⅡA对照品0.4580mg，加甲醇溶解定容至10.0mL，制成浓度为0.0458mg·mL-1的对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备取五味保肝丸样品约5g，碾碎，置硅胶干燥器中干燥24小时后精密称重，置具塞锥形瓶中，甲醇50mL，称定重量；置45℃水浴中超声提取35min，取出放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取滤液2.0mL，用甲醇定容至10.0mL。即得。
2.4阴性对照溶液的制备取不含丹参的五味保肝丸阴性对照品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。
2.5专属性考察分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，观察色谱图。供试品与对照品在17.4min出均出现色谱峰，阴性液在此处无峰出现。表明该复方制剂其他组分对本品中丹参酮ⅡA含量测定无干扰，方法专属性强。
2.6方法学考察
2.6.1线性关系考察精密吸取浓度为0.0458mg·mL-1丹参酮ⅡA对照品溶液1、2、3、4、5、6μL，按照2.1项下的色谱条件进样、测定。以对照品的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归。结果表明，丹参酮ⅡA在0.0458～0.2748μg之间，进样量与峰面积积分值呈良好线性关系。回归方程为:Y=1.5334×106X+2.896×103，r=0.9999,线性关系良好。
2.6.2稳定性试验取对照品溶液，常温放置，按上述色谱条件在0、5、10、16、24h分别进样2μL，测定峰面积积分值。结果平均值为143355（n=5），RSD为1.18%。表明供试品溶液常温放置24h内基本稳定。
2.6.3精密度实验取同一供试品溶液连续5次进样10μL，测定峰面积积分值。结果平均值为134576（n=5），RSD为0.92%(n=5)。表明此方法操作精密度良好。
2.6.4加样回收率实验分别精密量取5.0ml已知浓度的样品液（丹参酮ⅡA浓度为0.00814mg·ml-1六份,置10ml容量瓶中，分别精密加入浓度为0.0458mg·mL-1的对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5、3.0ml，用甲醇定溶至10.0ml。分别进样10μL，测定,并计算回收率。结果平均回收局98.67%，RSD=1.58%。
3讨论
3.1指标成分的选择丹参酮ⅡA为五味保肝丸主要药物丹参的主要有效成分。2010年版《中国药典》将丹参酮ⅡA含量作为丹参药材质量的评价指标[1]。因此，选择该成分含量作为该复方制剂内控质量标准之一是合理的。
3.2样品提取方法丹参酮ⅡA为丹参的脂溶性成分，样品提取多采用甲醇超声提取[2-4]和回流提取[1]等方法。对比试验甲醇及90%、70%、50%%浓度甲醇分别在30、45、50℃的溶剂提取效果，结果45℃甲醇提取效果最好。考察甲醇45℃超声处理30、35、40、45min及水浴加热回流提取0.5、1、1.5、2hr提取效果，结果表明甲醇45℃超声处理35min和回流提取1.5hr后,丹参酮基本提取完全。选择更为简便实用的甲醇45℃超声处理35min为该复方制剂丹参酮ⅡA含量测定的样品提取方法。
3.3流动相的选择五味保肝丸为复方制剂，组方中其它药物成分可能对丹参酮ⅡA分离有影响，而流动相是影响分离效果主要因素。参照有关资料，先后考察了甲醇-水(73﹕27)[4]，甲醇-水(75﹕25)[2,3]，甲醇-水（85﹕15)[3]，乙腈-水（60﹕40）[5]，乙腈-水（70﹕30）[6]等流动相对丹参酮ⅡA基线、分离、峰型及出峰时间的影响。结果表明，乙腈-水（70﹕30）效果最满意。
通过以上实验建立的五味保肝丸中丹参酮ⅡA含量测定方法，专属性强，且简单、稳定、可靠，为提高医院中药制剂内在质量控制，确保用药安全有效，具有实际意义。
参考文献
[1].国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：70.
[2].伍红玲.HPLC法测定健肝宁片中丹参酮ⅡA的含量[J].中医药导报，2011,17（7）：88-89.
[3].汤迎爽，康阿龙，宋红儒.HPLC法测定心脉乐片中丹参酮ⅡA的含量[J].中医药导报，2011,18（9）：97.
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[5].翁庆北，于晓雪，冯发青，等.ＨＰＬＣ法同时测定仙灵骨葆胶囊中丹参酮ⅡＡ和隐丹参酮的含量[J].亚太传统医药，2011,7（8）：5-6.
[6].罗宏丽，肖顺林，冯碧敏.RP-HPLC法测定抑毒调肝合剂中丹参酮ⅡA的含量[J].中国药房，2012，，23（35）.
注：本文为青岛市2009年度中医科研基金项目（课题序号：2009-zyy009）的研究内容.