非洲猪瘟病毒荧光RPA快速检测方法的建立及初步应用

论文摘要

本研究根据非洲猪瘟病毒(ASFV)基因组中序列保守稳定的B646L基因设计特异性引物和探针,建立了敏感、特异、高效的ASFV核酸RPA快速检测法。结果显示,该方法特异性强,能准确检测ASFV核酸,与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪A型塞内卡病毒(SVA)等灭活病毒核酸无交叉反应;敏感性高,本试验中最低可检测到2×101copies/uL;检测时间短,15 min即可完成反应;重复性好。采用ASFV灭活抗原和猪血液制备模拟临床猪血样品,能检出灭活抗原的稀释度为1∶12 800,应用该方法对200份进口冻猪产品及供港猪场420份猪抗凝血进行检测,结果均为阴性,与OIE推荐的实时荧光PCR法检测结果相同。本研究建立的RPA快速检测法操作简便,尤其适合ASFV现场快速检测。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验用质粒及核酸样品
•   1.2 主要试剂和仪器
•   1.3 引物和探针的设计筛选
•   1.4 荧光RPA反应体系和反应条件
•   1.5 特异性试验
•   1.6 灵敏度试验
•   1.7 重复性试验
•   1.8 模拟样品及临床样品的检测
• 2 结果
•   2.1 引物探针的筛选及最佳反应条件的确定
•   2.2 荧光RPA特异性试验
•   2.3 灵敏度试验
•   2.4 重复性试验
•   2.5 模拟样品及临床样品的检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 林彦星,曹琛福,曾少灵,花群俊,杨俊兴,黄超华,史卫军,花群义

关键词: 非洲猪瘟病毒,快速检测

来源: 中国兽医科学 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 深圳海关动植物检验检疫技术中心,云南省武定县动物疫病预防控制中心

基金: 国家重点研发计划项目（2018YFC0840401,2016YFD0500708）,海关总署科研项目（2019HK019）

分类号: S852.651

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0138

页码: 1090-1095

总页数: 6

文件大小: 1196K

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