导读:本文包含了暂态表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人生长激素,暂态表达,细胞融合
暂态表达论文文献综述
刘渤,赵瑾瑶,丁艳芳,杨佩满[1]（2010）在《转人生长激素鼠胚成纤维细胞的暂态表达方法的初步确立》一文中研究指出探讨作为转基因克隆动物核供体的、不具备分泌人生长激素(hGH)功能的转hGH鼠胚胎成纤维细胞(tEF)体外表达人生长激素的简便的暂态表达方法。首先,转染,3d后筛选出G418,与无hGH分泌的人乳腺癌细胞株(MCF-7)在聚乙二醇(PEG)作用下融合,培养1～2d,放射免疫分析方法检测相同数量的MCF-7组、转染MCF-7组、tEF组以及融合细胞共4组培养液中hGH的表达。结果显示tEF组和MCF-7组均无hGH表达;二者的融合细胞组培养液中hGH表达量可高达0.84mIU/L。可见,不表达hGH的tEF与MCF-7融合形成的杂种细胞,可作为暂态表达系统检测转基因细胞的表达。(本文来源于《生物学杂志》期刊2010年03期）
王铁东,李小平,逄大欣,欧阳红生[2]（2009）在《抗菌肽天蚕素B基因的克隆及其在山羊乳腺中的暂态表达》一文中研究指出根据已发表的天蚕素B的cDNA序列化学合成4条引物,以重迭延伸PCR的方法合成了真核细胞偏爱密码子编码的抗菌肽天蚕素B基因,将其克隆于pMD18-T载体,DNA序列分析证实合成的抗菌肽基因的碱基序列与设计的序列完全一致。利用山羊-β酪蛋白基因5′侧翼调控序列和真核基因表达载体pIRES1-neo,构建抗菌肽天蚕素B的乳腺组织特异性表达载体pbCP-cpin,将该载体溶于生理盐水,注入处于泌乳期的成年母山羊乳腺组织进行暂时表达。通过对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌试验确定了抗菌肽天蚕素B基因在山羊乳腺中的表达和抗菌活性。本试验建立了抗菌肽天蚕素B的乳腺瞬时表达系统,为验证各调控元件以及抗菌肽基因在转基因动物乳汁中分泌表达的有效性和可行性提供了一个快速检测系统。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2009年08期）
严正杰,杨欢利,孙雪萍,赵西彪,丁家桐[3]（2008）在《山羊FSH及其长效类似物基因在小鼠乳腺中的暂态表达》一文中研究指出应用山羊促卵泡素长效类似物基因构建其乳腺暂态表达载体pcDNAFSH-βCTP、pcDNAFSH-βCTP-α及构建报告基因pcDNAEGFP,测序后通过脂质体转染至怀孕末期的小鼠乳腺组织。结果表明,构建的乳腺暂态表达载体在小鼠乳腺中获得了表达,表达量分别为pcDNAFSHα,β(7.933±2.074)IU/L,pcDNAFSHα,-βCTP(9.311±2.995)IU/L,pcDNAFSH-βCTP-α(11.059±4.107)IU/L。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2008年07期）
施勇[4]（2007）在《人NR2B基因脑部特异性暂态表达大鼠模型的建立》一文中研究指出N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体是一种配体门控型离子通道,主要分布在突触后膜,被认为是神经元突触可塑性及长时增强效的主要调控者。NR2B是该受体的主要调节亚单位,M2亚基上天冬氨酸残基形成的Asn环是NMDA受体的中心部分,决定该离子通道的通透性及电导性。血脑屏障是由毛细血管内皮细胞和神经胶质细胞的紧密连接构成的,一般物质不容易通过。在脑部靶向性运载中可以通过血脑屏障上高表达的转铁蛋白受体进行转运,所以带有小鼠抗大鼠转铁蛋白受体单抗(OX26)的免疫脂质体使药物或外源基因到达大鼠脑部是一个较好的方法。本研究通过RT-PCR的方法成功地克隆了NR2B基因,并构建了真核表达载体pcDNA3.1-NR2B(PN),转染CHO、未分化PC12细胞,经RT-PCR、Western blot及间接免疫荧光(IFA)实验证明了构建的重组质粒可在细胞中表达NR2B基因;流式细胞仪检测到转染的未分化PC12细胞在受体激动剂诱导下能发生部分凋亡,CHO细胞未发生凋亡。用PCR方法扩增增强型绿色荧光蛋白基因EGFP,构建得到pcDNA3.1-EGFP (PE)载体;用PCR方法克隆人突触素蛋白SynI的启动子,插入到去除CMV启动子的PE载体,得到SynI-pcDNA3.1(-CMV)-EGFP(SPE)载体,将该载体转染CHO,COS,PC12细胞系,通过荧光显微镜观察和流式细胞仪检测,发现前两种细胞中SynI启动子几乎不能启动EGFP的表达,而在神经样PC12细胞中启动效率较高,说明其更倾向于在神经类细胞中发挥作用。再将NR2B基因插入到SynI-pcDNA3.1(-CMV)载体,得到SynI-pcDNA3.1(-CMV)-NR2B(SPN)重组质粒。用逆相蒸发法将NR2B重组质粒制备成脂质体,将OX26巯基化后与脂质体连接成免疫脂质体,获得的脂质体包封率达30.4%,呈粒径均匀的近球状小囊泡、平均粒径低于100 nm,OX26较为均匀的附着在脂质体周围,免疫脂质体直接ELISA反应呈阳性,SDS能够释放其包裹的DNA,说明成功制备了免疫脂质体。将大鼠分成叁组,第一组为正常对照组,第二、叁组分别尾静脉注射包裹PN,SPN质粒的免疫脂质体,48h取大脑皮层、海马、肝、脾经RT-PCR、定量PCR、Western blot、免疫组织化学方法(IHC)检测NR2B的表达,在第二组的大脑、肝、脾;第叁组的大脑都能检测到NR2B的表达,CMV启动子下的NR2B表达量明显高于SynI启动子,但是后者能够特异性的表达于大脑,而前者则是广泛性表达。本研究使用组织特异性启动子和免疫脂质体技术而不使用病毒类载体使基因在脑内特异性的表达,在非靶向组织沉默;建立NR2B基因脑部特异性暂态表达大鼠模型,为与NR2B相关的学习、记忆、神经疾病的治疗寻找一种有效的方法,也为脑部靶向性的基因药物和基因治疗寻找一种有效的DNA投递系统。(本文来源于《扬州大学》期刊2007-05-01）
朱秋菊,孙怀昌,王劲松,高波,王志跃[5]（2006）在《鸡输卵管暂态表达人溶菌酶的研究》一文中研究指出目的:建立暂态表达人溶菌酶(hLYZ)的鸡输卵管生物反应器,以寻求一种生产药用hLYZ的有效方法。方法:将hLYZcDNA克隆入鸡输卵管特异表达载体pOV1和pOV2,将获得的重组表达载体pOV1LYZ和pOV2LYZ与一定比例的聚乙烯亚胺混合,经翅静脉注射产蛋鸡,用微球菌平板溶菌试验检测蛋清中的溶菌酶活性。结果:2个重组载体注射鸡的蛋清中均有rhLYZ的表达,pOV2LYZ的表达水平及维持时间优于pOV1LYZ。设立4个试验组,分别以不同剂量或注射次数的pOV2LYZ注射产蛋鸡,蛋清中重组酶的定量测定结果表明,1mg/2次注射组的表达效果较好,最高表达量达750μg/mL蛋清,有效表达维持7d左右,载体注射对鸡的产蛋等生理指标无明显影响。当初次载体注射鸡蛋清中的rhLYZ含量下降到注射前水平时,用同样的方法和剂量进行再次注射。结论:蛋清中的rhLYZ表达水平较初次载体注射有所提高,表达维持时间有所延长。用hLYZ特异抗体进行的Western印迹结果显示,表达在蛋清中的rhLYZ相对分子质量与天然hLYZ相同。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2006年04期）
房浩霞[6]（2006）在《暂态表达重组蛋白鸡输卵管生物反应器的优化》一文中研究指出随着重组DNA技术的飞速发展,已经出现了多种生产重组蛋白的表达系统,其中以转基因动物生物反应器,尤其是转基因哺乳动物的乳腺生物反应器和转基因家禽的输卵管生物反应器的优点最为突出,能在不损伤机体正常生理功能的条件下源源不断地获得表达产品。家禽具有繁殖周期短、生产性能高、研究成本较低等优点,其输卵管是生产蛋白质的天然“发酵罐”,更加适合作为生产重组蛋白的生物反应器。但由于家禽特殊的生殖生理特点,其转基因技术一直落后于其它动物。虽然近几年来相关技术有所突破,但家禽转基因研究仍有许多理论和技术难题有待突破,距离产业化开发仍有很远的路要走。为此,寻求禽类的转基因技术的突破和开辟新的研究方法已成为当前研究工作的重点。本课题组用自行克隆的鸡卵清蛋白(OV)基因表达调控序列构建成鸡输卵管定位表达载体,以人溶菌酶和组织激肽释放酶(hK1)基因为目的基因的鸡输卵管暂态表达试验结果表明,通过翅静脉注射一定剂量的重组载体后,能表达一定水平的重组酶并分泌到试验鸡的蛋清中,具有一定的开发利用价值。本研究在前期研究的基础上,以hK1基因为目的基因,通过对先前构建的鸡输卵管特异表达载体进行优化改造,旨在获得结构更为合理、表达水平更高、维持时间更长的表达载体。在先前构建的pOV3K载体的基础上,分别通过酶切消化或PCR扩增等方法,将其中3.0 kb的OV基因5′-调控序列的长度分步缩减,获得叁个新的重组载体分别命名为pOV4K、pOV5K和pOV6K。将此重组载体与25 kDa聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)混合,经翅静脉注射产蛋鸡,用标准方法检测蛋清中的重组酶活性,结果表明,含1.1 kb OV基因5′-调控序列的pOV6K表达水平和表达时间均不如含3.0 kb OV基因5′-调控序列的pOV3K,含2.1 kb OV基因5′-调控序列的pOV4K和含1.7 kb OV基因5′-调控序列的pOV5K与含3.0 kb OV基因5′-调控序列的pOV3K表达水平相当,说明1.7 kb OV基因5′-调控序列足以指导外源基因(本文来源于《扬州大学》期刊2006-05-01）
孙雪萍[7]（2006）在《山羊促卵泡素及其长效类似物乳腺暂态表达研究》一文中研究指出FSH在动物生殖过程中起重要作用,FSH药物制剂已广泛应用于提高家畜的繁殖力。目前FSH制品大多是从牲畜的垂体提取,混有LH且易造成病原感染。国内外学者已经克隆出多种动物的FSH基因,并在哺乳动物细胞表达系统中进行了体外表达,但表达量很低。采用哺乳动物的乳腺作为反应器,可有效提高外源目的基因的表达量。本研究就是在此基础上,构建以山羊FSH及其长效类似物乳腺暂态表达载体,通过乳腺暂态表达,检测载体构建的合理性和有效性,为一步研究转基因动物打下基础,促进转基因动物技术的应用和发展。设计含相应酶切位点的特异性引物,以pVITRO-FSHβ-CTP-α为模板,通过两次PCR扩增反应分别获得含特异性酶切位点的FSHβ-CTP、FSHβ-CTP-α;将FSHβ-CTP、FSHβ-CTP-α和载体pcDNA经限制性内切酶酶切,再进行连接和转化,从而成功构建了乳腺暂态表达载体pcDNA-FSHβ-CTP以及pcDNA- FSHβ-CTP-α。通过酶切鉴定FSHβ-CTP、FSHβ-CTP-α序列正确。对载体pEGFP-N1进行双酶切,获得荧光蛋白基因EGFP作为报告基因,再将EGFP亚克隆至pcDNA,获得pcDNA-EGFP。将载体pcDNA-FSHα,β、pcDNA-FSHα,β-CTP、pcDNA -FSHβ-CTP-α以及pcDNA-EGFP采用两种不同的转染试剂转染至怀孕末期小鼠乳腺组织,小鼠分娩后12天内收集乳汁。放免检测乳汁当中FSH的表达量,以及表达持续的时间,同时制作乳腺组织细胞涂片,观察表达载体的转染效果。综合比较采用不同的转染试剂、不同的转染途径所获得的乳腺暂态表达效果。结果表明脂质体的转染效果优于阳离子聚合物,单链长效pcDNA- FSHβ-CTP-α表达效果优于共转染的pcDNA-FSHα,β、pcDNA-FSHα,β-CTP,整个暂态表达周期中,在第6～9天出现峰值。本次实验为优化乳腺表达系统提供参考,也为转基因动物的生产以及FSH制剂的人工合成奠定了分子基础。(本文来源于《扬州大学》期刊2006-05-01）
李国才,张泉,黄永生,薛方明,陈兵[8]（2005）在《人溶菌酶cDNA在COS-1细胞及小鼠乳腺的暂态表达》一文中研究指出目的研究自行克隆的1.5kb hLYZ双链cDNA的表达特性。方法将此cDNA亚克隆入真核表达载体pcDNA3及乳腺特异表达载体p205C3,重组载体pcDNA3LYZ转染COS-1细胞,用间接免疫荧光法检测转染细胞中hLYZcDNA的表达;重组载体p205C3LYZ注射哺乳期小鼠,用微球菌溶解试验和斑点杂交试验检测hLYZ cDNA在小鼠体内的表达。结果hLYZ cDNA在转染的COS-1细胞中得到了正确表达;小鼠体内表达并分泌到乳汁中的hLYZ达87μg/ml,且目的基因的表达具有较好的组织特异性。结论hLYZ cDNA可在COS-1细胞中有效表达,基因构件p205C3LYZ可以用于动物乳腺生物反应器研制。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2005年05期）
王铁东[9]（2005）在《抗菌肽乳腺组织特异性暂态表达及特性研究》一文中研究指出抗菌肽广泛存在于自然界生物体内,具有抗细菌、抗真菌、抗原生生物、抗病毒、抗肿瘤细胞等生物活性。由于天然抗菌肽的获取比较困难,且抗菌肽对细菌具有杀伤作用,采用常规的大肠杆菌表达体系很难实现表达。本研究根据抗菌肽的生物学特性和乳腺表达的特异性,通过建立乳腺表达系统,探索抗菌肽在反刍动物乳腺组织中的表达,明确其在乳汁中的抗菌活性,为下一步实现其在乳腺中的稳定表达及反刍动物细菌性乳腺炎的预防奠定基础。本试验首先根据已发表的天蚕素B 和牛气管抗菌肽的cDNA 序列和氨基酸序列,依据真核细胞偏爱的密码子对抗菌肽编码序列进行优化,在序列两端引入适当的酶切位点,通过重迭延伸PCR 法扩增获得这两种抗菌肽的全基因,分别将它们连接在pMD18-T 载体上,测序证明了合成的正确性。利用山羊β-酪蛋白基因5ˊ侧翼调控序列和真核基因表达载体pIRESneo,分别构建了天蚕素B 和牛气管抗菌肽的乳腺组织特异性表达载体及二者的双表达载体,将所构建的抗菌肽表达载体以生理盐水溶液形式,直接注射处于泌乳期的健康山羊乳腺小叶,注射后不同时间收集乳汁,通过Tricine-SDS-PAGE 电泳鉴定其表达,以薄层琼脂板孔穴扩散法检测表达产物抗菌活性。结果显示,乳腺组织特异性表达载体能够有效地指导天蚕素B 和牛气管抗菌肽在乳腺中的表达,表达产物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有明显的抑制作用,对链球菌的抑制效果不明显,表达呈暂态性,可持续3-5 天,乳汁中抗菌肽对高温具有一定耐受性,对酸碱具有较强的抗性,反复冻融可降低抗菌肽的活性。(本文来源于《吉林大学》期刊2005-04-01）
李伟,张新梅,张曼夫,王树惠[10]（1999）在《狂犬病病毒3aG株核蛋白基因cDNA的克隆、序列分析及在COS细胞中的暂态表达》一文中研究指出从狂犬病病毒 ３ａ Ｇ 株感染的 Ｂ Ｈ Ｋ 细胞裂解上清液中快速提取病毒 Ｒ Ｎ Ａ，用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 得到编码核蛋白完整结构基因的 ｃ Ｄ Ｎ Ａ。进一步将此基因克隆入 ｐ Ｕ Ｃ １８中，进行核苷酸序列分析，并与国外狂犬病病毒 Ｐ Ｖ、 Ｃ Ｖ Ｓ、 Ｓ Ａ Ｄ Ｂ１ ９ 株以及国内另一狂犬病病毒 ５ａ Ｇ 株的 Ｎ 基因序列进行了同源性比较。然后将 Ｎ 基因正向插入真核表达质粒中，转染 Ｃ Ｏ Ｓ７ 细胞，用免疫组化方法证明所克隆基因可在细胞中正确表达出 Ｎ 蛋白。(本文来源于《中国兽医学报》期刊1999年04期）
暂态表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
根据已发表的天蚕素B的cDNA序列化学合成4条引物,以重迭延伸PCR的方法合成了真核细胞偏爱密码子编码的抗菌肽天蚕素B基因,将其克隆于pMD18-T载体,DNA序列分析证实合成的抗菌肽基因的碱基序列与设计的序列完全一致。利用山羊-β酪蛋白基因5′侧翼调控序列和真核基因表达载体pIRES1-neo,构建抗菌肽天蚕素B的乳腺组织特异性表达载体pbCP-cpin,将该载体溶于生理盐水,注入处于泌乳期的成年母山羊乳腺组织进行暂时表达。通过对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌试验确定了抗菌肽天蚕素B基因在山羊乳腺中的表达和抗菌活性。本试验建立了抗菌肽天蚕素B的乳腺瞬时表达系统,为验证各调控元件以及抗菌肽基因在转基因动物乳汁中分泌表达的有效性和可行性提供了一个快速检测系统。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
暂态表达论文参考文献
[1].刘渤,赵瑾瑶,丁艳芳,杨佩满.转人生长激素鼠胚成纤维细胞的暂态表达方法的初步确立[J].生物学杂志.2010
[2].王铁东,李小平,逄大欣,欧阳红生.抗菌肽天蚕素B基因的克隆及其在山羊乳腺中的暂态表达[J].中国兽医学报.2009
[3].严正杰,杨欢利,孙雪萍,赵西彪,丁家桐.山羊FSH及其长效类似物基因在小鼠乳腺中的暂态表达[J].中国兽医学报.2008
[4].施勇.人NR2B基因脑部特异性暂态表达大鼠模型的建立[D].扬州大学.2007
[5].朱秋菊,孙怀昌,王劲松,高波,王志跃.鸡输卵管暂态表达人溶菌酶的研究[J].生物技术通讯.2006
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[9].王铁东.抗菌肽乳腺组织特异性暂态表达及特性研究[D].吉林大学.2005
[10].李伟,张新梅,张曼夫,王树惠.狂犬病病毒3aG株核蛋白基因cDNA的克隆、序列分析及在COS细胞中的暂态表达[J].中国兽医学报.1999