聚乙二醇定点修饰β-乳球蛋白谷氨酰胺残基条件优化及其对蛋白抗原性的影响

聚乙二醇定点修饰β-乳球蛋白谷氨酰胺残基条件优化及其对蛋白抗原性的影响

论文摘要

采用谷氨酰胺转氨酶(TG酶)催化聚乙二醇(PEG)定点修饰技术对β-乳球蛋白(β-LG)的谷氨酰胺残基进行修饰,探究其对蛋白抗原性的影响。通过SDS-PAGE结合凝胶过滤色谱对修饰产物的修饰率进行分析,通过优化得最佳修饰条件为pH 7.0,温度25℃,β-LG与PEG摩尔比1:15,TG酶与β-LG质量比3:1,缓冲液中乙醇添加量25%(体积分数),该条件下修饰率为60.17%。采用阳离子交换色谱对修饰产物进行分离纯化,SDS-PAGE分析显示,纯化得到的修饰产物表观分子量在28kDa左右,为PEG单修饰产物。反相高效液相色谱分析结果表明,修饰产物均一,无其它位置异构体存在。间接竞争ELISA测定结果表明,经PEG修饰后β-LG的抗原性显著降低,降低率为59.04%。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1材料与仪器
  •     1.1.1材料与试剂
  •     1.1.2仪器与设备
  •   1.2方法
  •     1.2.1 mPEG-NH2定点修饰β-LG谷氨酰胺残基
  •     1.2.2单因素试验
  •     1.2.3 SDS-PAGE分析
  •     1.2.4凝胶过滤色谱分析
  •     1.2.5β-LG的PEG修饰产物的纯化
  •     1.2.6反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析
  •     1.2.7抗原性分析
  •   1.3数据处理
  • 2 结果与分析
  •   2.1单因素试验
  •     2.1.1 TG酶与β-LG质量比(E/S)及反应pH值对修饰率的影响
  •     2.1.2β-LG与PEG摩尔比及乙醇添加量对修饰率的影响
  •     2.1.3反应温度对修饰率的影响
  •   2.2β-LG的PEG修饰产物的纯化
  •   2.3反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析
  •   2.4 PEG修饰前后β-LG的抗原性变化
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 罗舜菁,甘克明,陆旭丽,成娜娜,刘成梅

    关键词: 乳球蛋白,聚乙二醇,抗原性,条件优化,谷氨酰胺

    来源: 食品与机械 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室

    基金: 国家自然科学基金(编号:31560435),南昌大学研究生创新专项资金资助项目(编号:cx2016229)

    分类号: TS201.21

    DOI: 10.13652/j.issn.1003-5788.2019.06.002

    页码: 12-17+164

    总页数: 7

    文件大小: 1720K

    下载量: 132

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