水稻粉质皱缩胚乳突变体fse4的表型分析与基因克隆

论文摘要

【目的】水稻种子主要以淀粉形式储藏能量。淀粉合成需要多种酶类和调控因子参与,机制较为复杂。本研究利用水稻胚乳发育缺陷突变体,克隆和鉴定新的调控淀粉合成相关基因,旨在为研究淀粉合成及其调控提供理论依据。【方法】从化学诱变剂甲基亚硝基脲（1-methyl-1-nitroso-urea, MNU）处理的宁粳3号（Ningjing 3, WT）突变体库中筛选到一个能稳定遗传的胚乳粉质皱缩突变体,命名为fse4 （floury and shrunken 4）。与籼稻品种Dular杂交获得F1种子（F2）,通过图位克隆的策略确定FSE4候选基因。利用杂合植株（FSE4fse4）分离出的粉质种子,观察形态学特征,分析其理化性质。使用扫描电镜和半薄切片技术观察胚乳结构。使用q RT-PCR和免疫印迹分析淀粉合成相关基因表达模式和淀粉合成相关酶类的蛋白积累量。利用全自动氨基酸分析仪测定成熟胚乳各氨基酸含量。【结果】突变体fse4籽粒宽度、厚度以及千粒重显著下降,同时胚乳中总淀粉、总蛋白、直链淀粉含量亦显著下降,而脂肪含量显著上升;淀粉黏度、崩解值和消减值显著低于野生型。突变体fse4中多为单粒型淀粉颗粒,且排列分散。FSE4定位于第5染色体长臂约252kb的区间内,测序发现编码Δ1-吡咯啉-5-羧酸合成酶基因（Delta 1-pyrroline-5-carboxylate synthetase, P5CS）第1外显子上发生单碱基替换,导致一保守的氨基酸发生变异。突变体fse4中大部分淀粉合成相关基因表达量下调,多种淀粉合成相关蛋白积累量减少。突变体fse4米粉中多种氨基酸含量发生显著变化,游离氨基酸含量是其野生型的3.6倍。此外,外源喷施脯氨酸能部分恢复突变体fse4种子萌发缺陷表型。【结论】FSE4编码脯氨酸合成关键限速酶P5CS,该基因对胚乳中氨基酸的合成及代谢起重要的调控作用,并影响淀粉的合成与积累。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料种植
•   1.2 成熟种子理化性状测定
•   1.3 成熟种子扫描电镜观察
•   1.4 TTC染色
•   1.5 胚乳半薄切片观察
•   1.6 基因的图位克隆
•   1.7 淀粉合成相关基因的表达分析
•   1.8 蛋白免疫印迹分析
•   1.9 氨基酸序列比对
•   1.1 0 候选基因Os P5CS的亚细胞定位
•   1.1 1 氨基酸含量的分析
• 2 结果与分析
•   2.1 突变体fse4的表型分析
•   2.2 突变体fse4胚萌发观察
•   2.3 突变体fse4成熟籽粒的理化性状分析
•   2.4 FSE4突变影响发育胚乳中淀粉合成相关基因的表达和蛋白积累
•   2.5 FSE4的遗传分析和图位克隆
•   2.6 OsP5CS及其同源蛋白序列分析
•   2.7 组织表达分析与亚细胞定位
•   2.8 成熟种子中氨基酸含量分析
•   2.9 施加外源脯氨酸后突变体fse4萌发缺陷表型得到部分恢复
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杜溢墨,潘天,田云录,刘世家,刘喜,江玲,张文伟,王益华,万建民

关键词: 粉质胚乳,淀粉合成,基因克隆,吡咯啉羧酸合成酶,氨基酸合成与代谢

来源: 中国水稻科学 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,农作物

单位: 南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业部长江中下游粳稻生物学与遗传育种重点实验室/江苏省现代作物生产中心/江苏省植物基因工程技术研究中心

基金: 国家转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08001006),国家重点研发计划资助项目(2016YFD0100101-08),江苏省重点研发项目(BE2018388,BE2017368)

分类号: S511;Q943.2

DOI: 10.16819/j.1001-7216.2019.9058

页码: 499-512

总页数: 14

文件大小: 4147K

下载量: 148