spoIIE基因缺失对克劳氏芽孢杆菌淀粉酶酶活的影响

论文摘要

通过对克劳氏芽孢杆菌（Bacillus clausii） QL-1spoIIE基因敲除,研究了其对菌体芽孢形成、生物量以及淀粉酶酶活的影响。将重叠的spoIIE-Cmr片段电转化至B.clausii QL-1感受态细胞,仅通过一次同源单交换实现对spoIIE基因快速敲除,成功获得spoIIE基因缺失菌株B.clausii QL-1ΔspoIIE。发酵培养B.clausii QL-1ΔspoIIE与出发菌株相比,B.clausii QL-1ΔspoIIE芽孢生成率28 h降低为0.48%,20 h生物量提高了20%,84 h淀粉酶酶活是出发菌株的5.58倍,通过补料发酵B.clausii QL-1ΔspoIIE菌株80 h最大生物量达到7.2 mg·m L-1,84 h淀粉酶酶活达到690 U·m L-1,较未补料前提高了33.30%。经验证spoIIE基因为B.clausii QL-1芽孢形成关键基因,同时它的缺失有利于淀粉酶酶活的提高,这对后续构建芽孢杆菌类高产淀粉酶工业生产菌株具有重要意义。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与仪器
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 引物设计
•     1.2.2 同源重组片段spoIIE-Cmr的制备
•     1.2.3 同源重组片段spoIIE-Cmr回收产物的酶切及浓缩
•     1.2.4 克劳氏芽孢杆菌B.clausii QL-1感受态的制备
•     1.2.5 同源重组片段spoIIE-Cmr的电转化、阳性重组菌株的鉴定及遗传稳定性验证
•     1.2.6 B.clausii QL-1ΔspoIIE重组菌芽孢形成检测
•     1.2.7 B.clausii QL-1与B.clausii QL-1ΔspoIIE生长周期及菌体干重的测定
•     1.2.8 B.clausii QL-1与B.clausii QL-1ΔspoIIEα-淀粉酶酶活测定
•     1.2.9 B.clausii QL-1ΔspoIIE补料与未补料发酵对比
•   1.3 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 spo IIE-Cmr重组片段的构建
•   2.2 重组菌株的筛选及遗传稳定性验证
•   2.3 spo IIE基因对芽孢萌发及菌体干重的影响
•   2.4 spo IIE基因对淀粉酶的影响
•   2.5 补料与未补料发酵对比
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张虎,肖静,原梨萍,汪俊卿,王瑞明

关键词: 克劳氏芽孢杆菌,基因,基因敲除,芽孢生成率,生物量,淀粉酶

来源: 食品工业科技 2019年01期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 齐鲁工业大学(山东省科学院)生物工程学院生物基材料与绿色造纸国家重点实验室

基金: 山东省科技重大专项(2015ZDXX0403B03),国家重点研发项目(2017YFB0308402)

分类号: Q78

DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.01.025

页码: 131-135+268

总页数: 6

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