猪瘟病毒实时荧光LAMP检测方法的建立

论文摘要

为做好猪瘟的早期诊断和及时预防,建立一种快速检测猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的实时荧光环介导等温扩增方法。试验利用Primer Explorer version 4针对CSFV的5`UTR非编码区设计4组引物,筛选出最佳引物后建立CSFV的实时荧光环介导等温扩增检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度以及适用性进行验证。结果显示,本试验建立的实时荧光环介导等温扩增方法对128份临床样本和22份猪瘟活疫苗人工干扰样本的检测结果与实时荧光聚合酶链式反应检测方法一致。该方法仅对猪瘟病毒有扩增反应,且最低检测浓度为10 fg/μL,对猪伪狂犬病毒、高致病性高致病型猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型等8种病原无扩增反应。本试验建立的实时荧光环介导等温扩增方法特异性强、灵敏度高,检测效果好,操作简单,适用于CSFV临床样本的快速检测。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 病毒核酸及被检样品
•     1.1.2 主要试剂和耗材
•     1.1.3 主要仪器设备
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 引物设计
•     1.2.2 病毒DNA/RNA的提取
•     1.2.3 含CSFV靶基因的阳性质粒的构建
•     1.2.4 引物的筛选及反应体系的建立
•     1.2.5 特异性实验
•     1.2.6 灵敏度实验
•     1.2.7 适用性评价实验
•     1.2.8 临床样本实际应用
• 2 结果与讨论
•   2.1 结果
•     2.1.1 引物筛选与反应体系的建立
•     2.1.2 CSFV实时荧光LAMP检测方法的特异性分析
•     2.1.3 CSFV实时荧光LAMP检测方法的灵敏度分析
•     2.1.4 CSFV实时荧光LAMP检测方法的临床适用性
•     2.1.5 临床样本实际应用
•   2.2 讨论
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 龚晗悦,曹炜伟,石磊,陈洵,宋安华,叶蕾

关键词: 猪瘟病毒,实时荧光环介导等温扩增,特异性检测

来源: 现代食品科技 2019年10期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,农业科技

专业: 化学,畜牧与动物医学

单位: 暨南大学食品安全与营养研究院

基金: 广东省自然科学基金项目(2017A030310175),国家重点研发计划畜禽养殖专项(2016YFD0500600),广东省科技计划项目(2017B020207004)

分类号: S858.28;O657.3

DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2019.10.035

页码: 261-267

总页数: 7

文件大小: 1984K

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