导读:本文包含了肾近端小管上皮细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:肾近端小管上皮细胞,葛根素,镉,细胞自噬
肾近端小管上皮细胞论文文献综述
王丽媛[1]（2019）在《葛根素对镉致大鼠近端小管上皮细胞溶酶体功能损伤的保护作用》一文中研究指出镉(Cd)是环境中一种常见的有毒重金属污染物,被广泛应用于工业生产。Cd是高度累积的毒物,具有很长的生物半衰期,对动物机体损伤严重。Cd一旦被生物体吸收,能够对肾脏,肝脏,睾丸和脾脏等器官产生强烈的毒性作用。其中肾脏是Cd蓄积的主要部位,尤其是肾皮质,Cd主要损伤近端小管上皮细胞,引起肾毒性。前期研究表明葛根素(PU)在重金属铅致大鼠近端小管上皮细胞损伤中有保护效果,但在Cd致肾损伤中的保护作用尚未报道。因此,本试验以PU作为Cd中毒的保护剂,从细胞自噬、溶酶体功能和氧化应激叁个方面对PU的保护效应进行探讨。本试验通过建立原代大鼠近端小管上皮细胞(rPT)体外模型,在Cd染毒期间进行不同浓度的PU共处理12 h,进行以下指标的检测。首先,采用CCK-8法检测细胞存活率及通过相差显微镜观察处理后rPT细胞的形态学变化。结果发现浓度为100μM的PU对2.5μMCd致细胞毒性的保护效果最佳。第二,探讨PU能否恢复Cd所致rPT细胞自噬抑制。免疫印迹技术检测自噬标志蛋白LC3-Ⅱ和p62表达水平的变化,结合瞬时转染RFP-GFP-LC3和GFP-LC3质粒进行激光共聚焦显微镜观察,发现PU处理显着缓解Cd导致的自噬流阻滞,显着减轻了Cd诱导的自噬体累积,表明PU能够缓解Cd致rPT细胞的自噬抑制。第叁,鉴于溶酶体在细胞自噬过程中发挥的关键作用,本研究进一步探讨PU对溶酶体功能的影响。分别通过Lyso-Tracker-Red和AO染色发现PU明显缓解Cd诱导的溶酶体碱化;分别通过DQ-BSA荧光染色和免疫印迹技术检测CTSD蛋白表达水平变化发现PU显着缓解Cd导致的溶酶体降解功能损伤,证实PU可以恢复Cd诱导的溶酶体功能障碍;最后通过免疫荧光染色技术检测溶酶体膜标志性蛋白LAMP-1和溶酶体内标志性水解酶CTSD共定位情况,结合Lyso-Tracker-Red和AO染色结果发现PU有效阻断Cd诱导的溶酶体膜通透化(LMP)的发生。以上结果表明PU可恢复Cd致溶酶体功能异常。第四,本研究探讨了PU对Cd致rPT细胞氧化应激的影响。分别通过流式细胞术和化学比色法及激光共聚焦显微技术检测胞内ROS和MDA的水平和DHE荧光强度变化发现PU处理能显着缓解Cd致细胞内氧化应激;为进一步明确氧化应激在PU拮抗Cd致细胞毒性中的作用,本研究检测了Nrf2-Keap1通路,采用免疫荧光染色法检测Nrf2核转位,免疫印迹法检测Nrf2核蛋白、Nrf2内源性抑制剂Keap1以及Nrf2-Keap1通路下游信号分子(HO-1、NQO1)蛋白表达水平的变化,发现PU显着抑制Cd诱导的Nrf2核转位及Nrf2-Keap1通路的激活。同时,PU处理显着下调了rPT细胞中Cd诱导的抗氧化酶(CAT、SOD、GPx)相关蛋白和GSH合成相关蛋白(GCLM、GCLC、GR)表达水平的升高,进一步表明PU显着缓解Cd致rPT细胞氧化应激。综上所述,PU可通过恢复自噬流阻滞来缓解自噬抑制,通过改善溶酶体内环境,阻断溶酶体膜通透化恢复Cd导致的溶酶体功能损伤;通过抑制Nrf2-Keap1途径的激活缓解氧化应激来减轻rPT细胞中Cd诱导的细胞毒性;PU的抗氧化性能在拮抗Cd致自噬抑制和溶酶体功能损伤中发挥重要作用。本研究为进一步开发PU作为肾脏保护剂提供重要理论依据。(本文来源于《山东农业大学》期刊2019-03-18）
陈燕玲,罗婷,吴秀香,曾洪敏,李海洲[2]（2017）在《丙酮醛对人肾近端小管上皮细胞损伤的作用及机制》一文中研究指出目的探讨丙酮醛对人肾近端小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤的作用及可能机制。方法采用不同浓度的丙酮醛(100、200、400、800、1 600μmol/L)处理HK-2细胞24 h后,应用CCK-8法检测HK-2细胞的存活率;罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位;DAPI染色法观察HK-2细胞凋亡形态学变化。Western blot法检测HK-2细胞内磷酸化ERK1/2(phosphated ERK1/2,p-ERK1/2)、Bax及cleaved-caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组相比,不同的浓度的丙酮醛均能降低HK-2细胞存活率(P<0.01);且HK-2细胞经丙酮醛诱导后cleaved-caspase-3(P<0.01)、Bax及p-ERK1/2蛋白表达水平均明显增高(P<0.05)。结论丙酮醛能诱导HK-2细胞出现明显的损伤及凋亡,其机制可能与其激活ERK1/2信号通路有关。(本文来源于《遵义医学院学报》期刊2017年05期）
杨玲云,郭燕,倪佳佳,王荣,林加娟[3]（2015）在《miR-30e*在顺铂诱导的肾近端小管上皮细胞凋亡和线粒体损伤中的作用》一文中研究指出目的:观察顺铂诱导肾近端小管细胞损伤过程中mi R-30e*的表达变化,并探讨其在顺铂诱导的小管细胞凋亡和线粒体损伤中的作用。方法:实时定量PCR(q RT-PCR)检测顺铂处理后的小管细胞mi R-30e*的表达水平;使用重组慢病毒载体感染细胞,稳定高表达或低表达mi R-30e*;使用流式细胞仪检测细胞凋亡,观察mi R-30e*在顺铂诱导的小管细胞凋亡中的作用;q RT-PCR检测线粒体DNA(mt DNA)拷贝数,JC-1检测线粒体膜电位变化,探究mi R-30e*在顺铂引起的线粒体损伤中的作用。结果:1顺铂处理肾小管上皮细胞后,mi R-30e*的表达呈时间依赖性和剂量依赖性下调;2使用q RT-PCR检测重组慢病毒载体制备的稳定高表达或低表达mi R-30e*的小管细胞株中mi R-30e*的表达,过表达组增高了7倍,敲低表达组降低了近50%;3加入顺铂后,与对照组相比小管细胞凋亡增加,过表达mi R-30e*对凋亡起保护作用,敲低mi R-30e*则加重凋亡;4通过检测mt DNA的拷贝数发现顺铂诱导的线粒体损伤在48 h时有意义,迟于mi R-30e*表达的下调,线粒体膜电位检测JC-1提示过表达mi R-30e*对线粒体有保护作用。结论:顺铂处理小管细胞可降低其mi R-30e*的表达;体外过表达mi R-30e*对顺铂引起的小管细胞的凋亡和线粒体损伤具有保护作用,敲低mi R-30e*会加重顺铂诱导的肾近端小管细胞凋亡和线粒体损伤。(本文来源于《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊2015年08期）
王兴红,郑亚萍,王丽菲[4]（2015）在《利拉鲁肽对高糖诱导大鼠近端小管上皮细胞Toll样受体4表达和钠钾ATP酶活性影响》一文中研究指出目的探讨利拉鲁肽(Li)对高糖诱导大鼠近端小管上皮细胞(PTEC)的保护作用。方法体外原代培养大鼠PTEC。将细胞分为正常对照组、模型对照组、Li小剂量组、Li中剂量组、Li大剂量组,每组设6个复孔,作用72 h后液闪法测定PTEC钠钾ATP酶活性;Western blot测定Toll样受体4(TLR4)蛋白表达;酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞培养上清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的含量。结果与正常对照组比较,高糖培养72 h PTEC钠钾ATP酶活性[(2 737.88±317.22)μmol·g-1·h-1]升高,细胞和培养液中TLR4蛋白表达、IL-6、TNF-α和PAI-1增加,均差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,Li中、大剂量组作用72 h后PTEC钠钾ATP酶活性[(2 487.76±215.54),(2 301.55±207.63)μmol·g-1·h-1]明显降低,细胞和培养液中TLR4蛋白表达、IL-6、TNF-α和PAI-1降低,均差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 Li在一定程度上抑制高糖环境炎症细胞因子表达并能稳定钠钾ATP酶活性,可能对肾脏有一定的保护作用。(本文来源于《医药导报》期刊2015年08期）
汤文洁[5]（2015）在《肾素抑制剂类化合物对人肾近端小管上皮细胞HK-2的毒性研究》一文中研究指出肾素抑制剂是治疗高血压病的一种有效手段,对该类药物/化合物进行肾细胞毒性研究,可以为研制该类药物的安全性评价提供依据。本课题以人肾近端小管上皮细胞(HK-2)作为体外细胞模型,采用多种方法评价阳性对照物阿霉素和包括阿利吉仑在内的24个肾素抑制剂类化合物对该细胞的毒性效应。采用刃天青试验检测化合物对细胞存活率/线粒体代谢活性的影响,测定细胞外乳酸脱氢酶(LDH)含量检测化合物致细胞膜损伤,测定细胞内Caspase-3和Caspase-7蛋白活性检测化合物致细胞凋亡,使用荧光显微镜观察细胞内磷脂质化。阳性对照物阿霉素作用HK-2细胞的结果表明,阿霉素对HK-2细胞有明显的毒性作用,细胞外LDH活性、细胞内Caspase蛋白活性与细胞的存活率/代谢活性负相关(R2=0.9854和R2=0.9904),胞内Caspase蛋白活性和胞外LDH活性正相关(R2=0.9988),表明阿霉素可以诱导细胞内磷脂质蓄积,引起线粒体功能障碍,进而激活细胞凋亡程序,引起细胞坏死,从而表现出对HK-2细胞的细胞毒性作用。研究表明,阿利吉仑对HK-2细胞的存活率/线粒体的代谢功能没有抑制作用,也不引起细胞的凋亡和细胞膜损伤,但可以诱导HK-2细胞发生轻微的磷脂质化；23个肾素抑制剂类化合物中,化合物R397在高剂量下可以致HK-2细胞形态改变,发生严重磷脂质化,对HK-2细胞的存活率/代谢活性有显着抑制作用,但不引起细胞凋亡或细胞膜损伤。高剂量的R407可以抑制HK-2细胞的存活,引起细胞膜结构损伤,致细胞死亡；R404和R438可以抑制细胞线粒体代谢活性；R421、R581和R585可以诱导HK-2细胞发生凋亡并引起细胞膜结构损伤；R423、R425、R484和R522能引起细胞膜结构损伤,但不影响细胞线粒体功能。高剂量的R423、R425和R522能诱导HK-2细胞发生严重磷脂质化。其余化合物12个肾素抑制剂类化合物在HK-2细胞上,未显示出对细胞存活和对细胞线粒体代谢功能的抑制,也不引起细胞的凋亡和细胞膜结构破坏,但在高剂量下都可以诱导HK-2细胞发生和同剂量阿利吉仑相近或稍强于阿利吉仑的磷脂质化。(本文来源于《华东理工大学》期刊2015-05-26）
张一鸣,王琨,冯路路,姚芳,张连珊[6]（2015）在《肝脏型脂肪酸结合蛋白介导脂肪酸通过内质网应激凋亡途径引起人近端小管上皮细胞凋亡》一文中研究指出目的观察HK-2细胞中的L-FABP在脂肪酸和蛋白干预下,对内质网应激相关蛋白和凋亡相关蛋白表达的影响,探讨L-FABP与ERS的关系,进一步阐明游离脂肪酸引起肾小管细胞凋亡的机制。方法首先给予HK-2细胞PA、OA和Alb干预,Western blot测定L-FABP,内质网应激相关蛋白GRP78、PERK和p-PERK,内质网凋亡相关蛋白CHOP、Caspase-3、Cleave Caspase-3的表达变化;然后沉默HK-2细胞的L-FABP,观察沉默前后上述蛋白的表达变化,结果(1)PA和OA干预使HK-2细胞中L-FABP蛋白表达有意义上调;(2)PA和OA干预HK-2细胞中GRP78、CHOP、Caspase-3、Cleave Caspase-3蛋白水平均有意义上调,(3)沉默了HK-2细胞的L-FABP,PA和OA干预上调的GRP78以及ER相关凋亡蛋白CHOP、Caspase3和Cleave Caspase3蛋白有意义降低,;Alb组L—FABP、GRP78、Caspase3、Cleave Caspase3、CHOP蛋白水平无明显增高(p>0.05),沉默L-FABP后GRP78、Caspase3、CHOP蛋白水平也无明显变化(p>0.05)。结论 L-FABP介导脂肪酸通过内质网应激凋亡途径引起人近端小管上皮细胞凋亡;证实导致肾小管上皮细胞损伤和凋亡的主要成份是脂肪酸而不是白蛋白。(本文来源于《中国毒理学会毒性病理学专业委员会第一届会员代表大会会议论文集》期刊2015-04-10）
王兴红,谷存国,王丽菲[7]（2015）在《槲皮素对高糖诱导大鼠近端小管上皮细胞肥大影响》一文中研究指出目的探讨槲皮素对高糖诱导大鼠肾脏近端小管上皮细胞(PTEC)肥大抑制作用及机制。方法采用手工微分离法,获得原代大鼠PTEC,将细胞分为5组:对照组,高糖组,槲皮素低、中、高剂量组,作用72 h后检测细胞体积、3H-亮氨酸掺入量以及蛋白质含量;液闪法测定细胞钠钾ATP酶活性;Western blot测定单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达;酶联免疫吸附法测定细胞培养上清细胞间黏附分子1(ICAM-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、甘露糖结合凝集素(MBL)。结果与高糖组比较,槲皮素中、高剂量组作用72 h后PTEC体积[(113.33±2.44)、(114.71±2.55)FSC]明显减小,细胞内蛋白含量[(5.03±0.21)、(4.35±0.24)cpm/105细胞]明显降低,钠钾ATP酶活性[(2 489.76±218.54)、(2 311.55±209.63)μmol/g·h]明显降低,细胞MCP-1蛋白表达[(0.37+0.02)、(0.39+0.02)]和培养基中ICAM-1、IL-1β、MBL含量[分别为[(11.25±2.71)、(11.12±2.56),(97.21±12.26)、(96.11±10.53)和(16.87±3.79)、(15.63±3.78)μg/g]明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论槲皮素对高糖诱导大鼠PTEC肥大有明显的抑制作用,其机制可能与抑制高糖环境炎症因子表达和稳定钠钾ATP酶活性有关。(本文来源于《中国公共卫生》期刊2015年04期）
张一鸣[8]（2015）在《肝脏型脂肪酸结合蛋白介导脂肪酸通过内质网应激凋亡途径引起人近端小管上皮细胞凋亡》一文中研究指出目的:蛋白尿是慢性肾脏疾病(Chronic kidney disease,CKD)的共同表现,大量蛋白尿可引起肾小管及间质的损伤和炎症。而与白蛋白(albumin,Alb)结合的游离脂肪酸(free fat acids,FFAs)通过脂毒性,引起细胞功能障碍和损伤,参与了肾间质损伤的过程。已有研究表明饱和脂肪酸棕榈酸(Palmitic acids,PA)可诱导非脂肪细胞的损伤和凋亡。脂毒性包含了多种应激反应,如内质网应激和氧化应激等。内质网应激通过未折迭蛋白反应(unfolded protein response,UPR)维持细胞内环境的稳态。但持久强烈的ERS会通过内质网相关性死亡途径(ER-associated death),引起细胞凋亡。肝脏型脂肪酸结合蛋白(liver-type fatty acid binding protein,L-FABP/FABP1)是脂肪酸结合蛋白家族一员,人肾近曲小管上皮细胞表达。尿L-FABP被认为与肾小管间质损伤密切相关,是监测CKD进展的标志物之一。本课题前期研究表明,油酸(Oleic acids,OA)诱导L-FABP表达和ERS,并导致HK-2细胞凋亡。为了进一步探讨L-FABP与ERS之间的关系,本研究比较沉默HK-2细胞L-FABP前后,高PA和OA干预下的HK-2细胞,ERS相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达变化,试图明确L-FABP在FFA通过ERS诱导细胞凋亡中的作用,为临床FFAs引起肾小管细胞凋亡提供实验依据。方法:1实验分组:⑴HK-2细胞随机分为Control,高棕榈酸(PA),高油酸(OA)和高蛋白(Alb)干预组。⑵HK-2细胞分别转染sh NC或sh L-FABP后,分别给予高PA、OA和Alb干预,并设立对照组sh NC、和sh L-FABP。具体实验分组如下。2 MTT法确定HK-2细胞50%生存率的PA浓度;3 Western blot法确定PA、OA干预HK-2细胞时间;4观察PA、OA和Alb干预对L-FABP、HK-2细胞内质网应激相关蛋白及凋亡蛋白表达的影响;5观察转染sh L-FABP质粒后,PA、OA和Alb干预对HK-2细胞中的L-FABP、内质网应激相关蛋白及凋亡蛋白表达的影响。结果:1确定PA对HK-2细胞的干预浓度不同浓度PA干预HK-2细胞24h,发现PA浓度为200μmol/L HK-2细胞生存率为40%,接近50%。故选取PA浓度200μmol/L为干预浓度。2 PA干预HK-2细胞L-FABP的表达变化PA分别干预HK-2细胞3h,6h,12h,24h和48h的结果显示:与干预前比较,3h,6h和12h L-FABP蛋白表达无明显变化,24h表达达到峰值,48h表达减少。3 OA干预HK-2细胞L-FABP的表达变化OA分别干预HK-2细胞3h,6h,12h,24h和48h的结果显示:与干预前比较,12h,24h和48h L-FABP蛋白表达增加,但24h达到峰值。4 PA、OA和Alb干预对HK-2细胞L-FABP蛋白表达的影响OA组和PA组L-FABP表达均高于正常对照组,Alb组与Control组无明显区别。5 PA、OA和Alb干预对HK-2细胞内质网应激相关蛋白及凋亡蛋白表达的影响OA组和PA组内质网应激相关蛋白和凋亡相关GRP78、CHOP、Caspase3和Cleave Caspase3的表达均高于Control组;Alb组与Control组无明显区别。6 sh L-FABP质粒下调HK-2细胞中的L-FABP蛋白表达水平。荧光结果显示,sh NC组和sh L-FABP组均可捕获质粒所携带的绿色荧光。与Control组相比,sh L-FABP组HK-2细胞的L-FABP蛋白的表达水平明显降低。7 sh L-FABP质粒下调PA和OA诱导的HK-2细胞内质网应激相关蛋白的高表达。⑴PA+sh NC组与sh NC组相比较,GRP78、PERK和p-PERK蛋白的表达水平明显增高。敲低L-FABP后,PA+sh L-FABP组与PA+sh NC组相比较,GRP78、PERK、p-PERK蛋白的表达水平明显降低。⑵OA+sh NC组与sh NC组相比较,GRP78、PERK和p-PERK蛋白的表达水平明显增高。敲低L-FABP后,OA+sh L-FABP组与OA+sh NC组相比较,GRP78、PERK、p-PERK蛋白的表达水平明显降低。⑶Alb+sh NC组与sh NC组相比较,PERK蛋白的表达水平有所增高,GRP78和p-PERK蛋白的表达水平无明显变化。敲低L-FABP后,Alb+sh L-FABP组与Alb+sh NC组相比较,PERK和p-PERK蛋白的表达水平有所下降,GRP78蛋白的表达水平无明显变化。8 sh L-FABP质粒下调PA和OA诱导HK-2细胞内质网相关凋亡蛋白的高表达。⑴PA+sh NC组与sh NC组相比较,CHOP、Caspase3和Cleave Caspase3蛋白的表达水平明显增高。敲低L-FABP后,PA+sh L-FABP组与PA+sh NC组相比较,CHOP、Caspase3和Cleave Caspase3蛋白的表达水平明显下调。⑵OA+sh NC组与sh NC组相比较,CHOP、Caspase3和Cleave Caspase3蛋白的表达水平明显增高。敲低L-FABP后,OA+sh L-FABP组与OA+sh NC组相比较,CHOP、Caspase3和Cleave Caspase3蛋白的表达水平明显下调。⑶Alb+sh NC组与sh NC组相比较CHOP、Caspase3和CleaveCaspase3蛋白的表达水平无明显增高。敲低L-FABP后,Alb+sh L-FABP组与Alb+sh NC组相比较,CHOP、Caspase3蛋白的表达水平无明显下调,Cleave Caspase3蛋白表达水平有所下调。结论:1 PA和OA上调HK-2细胞L-FABP蛋白,ERS相关蛋白以及ER相关凋亡蛋白表达,这一结果证实OA和PA可诱导L-FABP蛋白表达,ERS和ER相关的凋亡的发生。2沉默HK-2细胞的L-FABP,PA和OA干预上调的ERS相关蛋白以及ER相关凋亡蛋白有意义降低,证实L-FABP参与了FFAs诱导的ERS,并最终激活细胞ERS相关凋亡的发生。3高蛋白干预不能上调HK-2细胞L-FABP的表达;无论L-FABP沉默与否,与对照组比较,高蛋白干预也不上调ERS相关蛋白以及ER相关凋亡蛋白的表达,在细胞学水平证实蛋白尿中导致肾小管上皮细胞损伤和凋亡的主要成份是FFAs而不是白蛋白。(本文来源于《河北医科大学》期刊2015-03-01）
冯路路[9]（2013）在《油酸通过内质网应激介导人近端小管上皮细胞凋亡和转分化的实验研究》一文中研究指出目的：脂质在肾脏细胞内沉积，是许多肾脏疾病的常见病理变化，脂质沉积造成细胞功能受损即所谓的“脂毒性（lipotoxicity）”。在蛋白尿（proteinuria)肾病中，脂毒性在肾小管间质损伤过程中发挥重要作用，且与肾病预后相关。游离脂肪酸（free fatty acids，FFAs），在血液中与白蛋白结合，通过肾小球滤过膜被近端小管重吸收，FFAs是蛋白尿性肾病小管损伤的一种重要介质。肝型脂肪酸结合蛋白（liver-type fatty acidbinding protein， L-FABP/FABP1)是脂肪酸结合蛋白(fatty acid-bindingprotein，FABP)家族的成员之一，主要在人肝脏、小肠、肾脏及胰腺组织中表达，参与胞内脂肪酸的摄取、转运和代谢调节。在慢性肾脏疾病的研究中发现，尿中L-FABP水平与肾小管间质损伤的严重程度密切相关，已证实当大量蛋白尿时，是FFAs而不是白蛋白引起肾小管损伤。但FFAs对肾小管损伤的具体机制尚不清楚。内质网（endoplasmic reticulum,ER)是蛋白质合成、折迭和转运的重要细胞器，是细胞应对各种应激进行信息整合的中心。ER为了适应正在改变的环境而形成了一个未折迭蛋白反应（unfolded protein response，UPR）的信号途径，通过增强内质网的降解功能使蛋白质生物合成减少，来减轻内质网负担，维持细胞内稳态，增强细胞适应性，及时有效的逆转内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS），但持续或过强的UPR将最终导致细胞凋亡。FFAs可通过ERS引起胰岛β细胞和肝细胞凋亡；大量蛋白尿时白蛋白可引起肾小管上皮细胞ERS。但有关FFAs是否通过ERS导致肾脏固有细胞凋亡的研究尚不多见。L-FABP作为FFAs的一个转运体，并与其进行可逆性结合完成跨膜转运至内质网、线粒体等细胞器。我们推测过多的FFAs转运至内质网引起ERS及小管细胞凋亡和转分化。本文将试图通过对培养的人近端小管细胞系（HK-2cells）的研究，用人体血液含量最高的FFAs—油酸（oleicacids，OA），一种18碳单不饱和脂肪酸作为FFAs的代表，探讨FFAs对肾小管损伤的机制。方法：人近端小管上皮细胞(HK-2)购自中国科学院上海细胞所。用含有10%胎牛血清，2mmol/l-谷氨酰胺，100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM-F12培养基培养细胞，用5%CO2，37℃的培养箱常规培养。待HK-2达80%~90%融合后，用无血清培养基同步细胞24h。细胞分组如下：正常对照组，油酸组和无游离脂肪酸白蛋白组（以下简称为白蛋白组）。1MTT法检测不同浓度、不同时间点油酸和白蛋白的生长曲线，确定HK-250%生存率时的浓度及时间点；2细胞常规爬片，扫描电镜观察干预12h时HK-2细胞超微形态改变；收集干预12h HK-2细胞，透射电镜观察细胞超微结构改变；3细胞常规爬片，原位末端转移酶标记技术（terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay，TUNEL）检测干预12h时HK-2细胞凋亡率；4提取6h、12h、24h不同干预条件下HK-2细胞蛋白，Western Blot检测L-FABP、GRP78、GADD153/CHOP、α-SMA、Bcl-2、Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3的蛋白表达情况。结果：1干预12h, HK-2细胞的50%生存率的油酸浓度是100μmol/l，而无游离脂肪酸的白蛋白浓度是10mg/ml。2不同干预条件下12h时HK-2细胞超微结构改变⑴扫描电镜观察，正常对照组HK-2细胞间连接紧密，细胞膜菲薄细胞核位于中央，核仁明显，细胞器围绕细胞核周围；与正常对照组相比无游离脂肪酸白蛋白组细胞皱缩，但细胞膜完好，细胞外形呈荷叶状或轮辐状；而油酸组细胞体积缩小胞膜皱缩，细胞连接松散，细胞膜有破损，成筛孔状，出现核裂孔，胞质内容物明显增多，有的细胞器裸露。⑵透射电镜观察，正常对照组HK-2细胞发育良好，与正常对照组相比无游离脂肪酸白蛋白组细胞细胞器丰富；油酸组细胞膜破坏崩解，细胞微绒毛脱落，线粒体、内质网肿胀，胞浆中可见脂滴和糖原颗粒，并有散在的微丝存在。染色质浓染、边集化，细胞核呈锐角突起出现了凋亡的早期表现。3不同时间点油酸干预下HK-2细胞L-FABP蛋白的表达油酸干预HK-2细胞1h、3h、6h、12h和24h后，细胞总蛋白WesternBlot结果显示:6h开始表达上调，12h达到峰值，24h表达有所减低。4不同干预条件下内质网应激相关蛋白的表达细胞总蛋白Western Blot结果显示：细胞干预6h、12h和24h，叁个时间点高油酸组和高白蛋白组GRP78和GADD/CHOP表达均高于正常对照组；而高油酸组表达又高于高白蛋白组。5油酸对HK-2细胞凋亡的影响⑴TUNEL检测表明12h时油酸组凋亡细胞率显着高于正常对照组和白蛋白组，正常对照组与白蛋白组间没有差别；⑵Western Blot结果：干预6h、12h和24h的HK-2细胞，油酸组Caspase-3和Cleaved Caspase-3比正常对照组和白蛋白组表达增加，且油酸组Bax/Bcl-2比率较其他两组高，正常对照组与白蛋白组相比差异无统计学意义。6油酸对HK-2细胞转分化的影响干预12h的HK-2细胞，油酸组α-SMA表达较正常对照组和白蛋白组表达增加，而正常对照组与白蛋白组间无差别。结论：1油酸可以上调HK-2细胞L-FABP蛋白和ERS相关蛋白GRP78、GADD/CHOP的表达，L-FABP的上调先于ERS相关蛋白的上调。我们推测油酸通过L-FABP诱发ERS，并激活ERS相关的凋亡通路。2油酸还可以上调Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白，使Bax/Bcl-2比值增加。荧光TUNEL染色证实OA干预引起细胞凋亡。这两部分结果说明油酸引起的细胞凋亡至少部分是通过ERS途径来完成的。3HK-2细胞在油酸干预下无论在形态还是功能上均表现出肌纤维母细胞的特性，说明OA干预导致HK-2细胞发生转分化。综合上述，本实验证实油酸既可以诱导细胞凋亡，又可以使其发生转分化，说明油酸在肾小管间质纤维化发生发展过程中起着十分重要的作用。(本文来源于《河北医科大学》期刊2013-03-01）
王俊然,郑素琴,邢红英[10]（2012）在《川芎嗪对TGF-β_1诱导人胚肾近端小管上皮细胞转分化影响的实验研究》一文中研究指出目的利用原代培养的人胚肾近端小管上皮细胞作为研究对象,探讨川芎嗪(TMP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肾近端小管上皮细胞转分化的影响。方法采用胶原酶消化后系列网筛过滤,再用密度梯度离心分离纯化细胞的方法,进行人胚肾近端小管上皮细胞的原代培养。原代培养的人胚肾近端小管上皮细胞传至第2代后分为5组,空白对照组、10ng/mL TGF-β1刺激组、5ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组、10ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组及20ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组。刺激48h后,采用倒置相差显微镜、透射电子显微镜、酶化学染色和免疫细胞化学方法检测细胞的转分化情况。结果 TGF-β1刺激人胚肾近端小管上皮细胞后细胞拉长呈梭形,细胞间隙加大;电子显微镜下细胞失去极性,微绒毛减少直至消失;碱性磷酸酶染色阴性;细胞角蛋白18(CK-18)表达减弱,波形蛋白(Vimentin)表达增强,并表达α平滑肌肌动蛋白抗体(α-SMA)。各浓度TMP+10ng/mL TGF-β1刺激组细胞的上述变化均有不同程度的减弱,减弱程度与TMP浓度呈正比。结论 TMP能以浓度依赖方式阻止TGF-β1诱导的人胚肾近端小管上皮细胞的转分化。(本文来源于《重庆医学》期刊2012年06期）
肾近端小管上皮细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨丙酮醛对人肾近端小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤的作用及可能机制。方法采用不同浓度的丙酮醛(100、200、400、800、1 600μmol/L)处理HK-2细胞24 h后,应用CCK-8法检测HK-2细胞的存活率;罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位;DAPI染色法观察HK-2细胞凋亡形态学变化。Western blot法检测HK-2细胞内磷酸化ERK1/2(phosphated ERK1/2,p-ERK1/2)、Bax及cleaved-caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组相比,不同的浓度的丙酮醛均能降低HK-2细胞存活率(P<0.01);且HK-2细胞经丙酮醛诱导后cleaved-caspase-3(P<0.01)、Bax及p-ERK1/2蛋白表达水平均明显增高(P<0.05)。结论丙酮醛能诱导HK-2细胞出现明显的损伤及凋亡,其机制可能与其激活ERK1/2信号通路有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肾近端小管上皮细胞论文参考文献
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[3].杨玲云,郭燕,倪佳佳,王荣,林加娟.miR-30e*在顺铂诱导的肾近端小管上皮细胞凋亡和线粒体损伤中的作用[J].南京医科大学学报(自然科学版).2015
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[8].张一鸣.肝脏型脂肪酸结合蛋白介导脂肪酸通过内质网应激凋亡途径引起人近端小管上皮细胞凋亡[D].河北医科大学.2015
[9].冯路路.油酸通过内质网应激介导人近端小管上皮细胞凋亡和转分化的实验研究[D].河北医科大学.2013
[10].王俊然,郑素琴,邢红英.川芎嗪对TGF-β_1诱导人胚肾近端小管上皮细胞转分化影响的实验研究[J].重庆医学.2012