导读:本文包含了电穿孔法论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:转染,细胞,家蚕,树突,存活率,仔猪,脐带。
电穿孔法论文文献综述
王泽,李春花,张宁坤,高连如,陈宇[1]（2018）在《电穿孔法转染脐带华通胶间充质干细胞的最佳条件》一文中研究指出背景:脐带华通胶间充质干细胞是目前较为原始的干细胞,为当前干细胞的研究热点之一,是基因治疗的理想载体。然而,目前尚未有对脐带华通胶间充质干细胞电转染条件的研究,因此探索脐带华通胶间充质干细胞的电转染最佳条件占据重要地位。目的:探讨不同电穿孔条件对脐带华通胶间充质干细胞转染率的影响,以确定最佳电转染条件。方法:通过控制电压、脉冲时长及细胞状态等转染条件,采用不同条件组合后用电穿孔法将质粒EEV-EGFP转入脐带华通胶间充质干细胞,流式细胞仪检测转染率。结果与结论:(1)电压自125 V至150 V,转染率呈现递增趋势,150 V时获得最大转染率,但将电压进一步调高至170 V,转染率开始显着降低;(2)脉冲时长为5.0 ms时获得最大转染率;脉冲时长为2.5 ms和7.5 ms时转染效率均有所降低;(3)与低氧培养比较,正常培养的细胞转染率更高;(4)结果表明,正常培养的脐带华通胶间充质干细胞在电压150 V、脉冲时长5.0 ms、脉冲间隔时间50 ms、脉冲数2次时可达到较高的电转染率。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年17期）
周文林,上村望,藤原晴彦,叶爱红,曹锦如[2]（2017）在《基于电穿孔法的快速家蚕基因功能分析技术体系》一文中研究指出目前基于蚕卵显微注射的转基因技术难度较大,且对基因功能分析的周期较长,耗费更多人力。在家蚕等多数鳞翅目昆虫中,dsRNA不能高效地进入细胞内,单纯地注射dsRNA很难引发RNAi功效。为了克服这些技术上的困难,本研究首先以同时带有EGFP和DsRed2表达框的转基因载体p PIGA3GFP导入2龄幼虫,实现了外源基因自幼虫、蛹直至成虫期全龄表达稳定性,阳性率达到55.88%。进而,利用该技术体系将Wnt1-siRNAs导入家蚕幼虫体内,明显抑制了Wnt1的表达(P<0.01),并阻碍幼虫体表斑纹的形成。结果表明,该技术体系不仅稳定可靠,而且快捷高效。(本文来源于《中国蚕学会第九届青年学术研讨会论文集（摘要汇编）》期刊2017-10-26）
陈凤,石德顺,黄贵婷,陈自洪,杨素芳[3]（2016）在《电穿孔法转染水牛脂肪干细胞与成纤维细胞的研究》一文中研究指出本研究以不同培养代数(P)水牛脂肪干细胞(buffalo adipose-derived stem cells,BASC)和成纤维细胞(buffalo fetal fibroblasts,BFFs)为研究对象,采用电穿孔法对其进行转染,比较转染后细胞的相对存活率和转染效率,为生产高效转基因供体细胞奠定基础。以绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,电转染48 h后观察荧光表达,收集细胞采用血细胞计数法和流式细胞仪分析细胞相对存活率和转染效率。结果表明:电转后的BASC和BFF表达EGFP,BASC相对存活率低于BFF,P10之前BFF存活率更稳定;BASC和BFF转染效率随培养代数增加出现不同程度的降低,P10之前BFF转染效率更稳定。电转技术可用于转染BASC和BFF,并获得较高的转染效率;使用体外培养早期代数的BASC(P8之前)和BFF(P10之前)可以获得更稳定转染效率的转基因细胞。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2016年11期）
鲁世绒[4]（2016）在《树突状细胞电穿孔法转染条件的优化》一文中研究指出目的将带有EGFP的质粒电转入树突状细胞,探讨不同电转条件对树突状细胞的电转率和存活率影响。方法分离人外周血单核细胞加入刺激因子将其诱导为成熟DC,设置不同电转参数将质粒转入树突状细胞,荧光显微镜检测转染效率及细胞存活率。结果电转48小时后,镜下观察在电转条件为300V,20ms时,细胞存活率及表达率最高,结论选择适当的电转参数及细胞浓度,可明显提高转染效率同时降低细胞死亡率。(本文来源于《生物技术世界》期刊2016年04期）
牛丽丽,王秀娟,张传领,温建勋,姜丽丽[5]（2016）在《电穿孔法高效转染脑胶质瘤细胞U251的条件优化研究》一文中研究指出目的探讨不同电穿孔条件对脑胶质瘤细胞U251电转染率的影响,旨在优化脑胶质瘤细胞U251的电穿孔转染条件以获得较高转染效率。方法以脑胶质瘤细胞系U251为研究对象,在300μl电转体系中,选择不同的电压、脉冲时间、细胞浓度、DNA剂量,将pEGFP-C1质粒导入U251,计算转染效率。结果在110V、脉冲250μs、细胞浓度1×106/ml、质粒2μg,转染效果最佳,转染后48 h阳性率约为69%。结论优化条件后的电穿孔法操作简单,经济省时,可用于脂质体等方法较难转染细胞(如脑胶质瘤细胞)的外源基因导入。该实验也为进一步研究其他基因转移到胶质瘤细胞的应用提供可靠的试验参数基础。(本文来源于《内蒙古医学杂志》期刊2016年01期）
王雅珍,杨舟鑫,徐伟红,吕远栋,毛根祥[6]（2015）在《电穿孔法介导转染老年人成纤维细胞参数的优化》一文中研究指出目的探究采用电穿孔法将质粒pGenesil-1(简称p G)转染老年人成纤维细胞,从中寻找最佳的参数。方法采用电穿孔法将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒p G转染老年人成纤维细胞。荧光显微镜下观察EGFP表达并测定转染效率、细胞存活率;通过G418筛选得到稳定转染的细胞。结果本实验室电穿孔法介导的老年人成纤维细胞转染的最佳电转条件:电压:240 V;电容:750μF;DNA剂量:8μg。48 h后电穿孔法的转染率接近30%。结论用电穿孔法将质粒pG稳定转染老年人成纤维细胞耗时短,有利于在体外对老年人成纤维细胞进行后续实验。(本文来源于《中国卫生检验杂志》期刊2015年23期）
杨蔚,张毅,钟玲,吴边,杨金伟[7]（2015）在《电穿孔法和化学法在多药耐药胃癌细胞转染中的效果比较》一文中研究指出目的:比较电穿孔法和化学法在多药耐药(MDR)胃癌细胞中转染效果。方法:将表达抑癌基因WTX的质粒分别用电穿孔法和两种化学法(Lipofectamine2000、Attractene)转染MDR胃癌SGC7901/VCR细胞,观察转染后细胞中增强型绿色荧光蛋白(e GFP)和目的基因WTX m RNA的表达情况。结果:e GFP分析结果显示,与无耐药的亲代SGC7901细胞比较,两种化学转染法对SGC7901/VCR细胞的转染效率明显降低(均P<0.05),而电穿孔转染法未见明显降低(P>0.05),且明显高于两种化学转染法对SGC7901/VCR细胞的转染效率(均P<0.05)。RT-PCR结果显示,电穿孔转染的SGC7901/VCR细胞中WTX m RNA表达量明显高于两种化学法转染的SGC7901/VCR细胞中的WTX m RNA表达量(均P<0.05)。结论:对于MDR胃癌细胞,电穿孔转染法不易受其细胞膜成分的影响,可以保持较好的转染效率。(本文来源于《中国普通外科杂志》期刊2015年08期）
杨哲,陈克平,姚勤,高路[8]（2015）在《利用电穿孔法构建含有桑天牛纤维素酶(Ag-Egasel)基因的转基因家蚕》一文中研究指出在这个实验过程中,我们尝试利用电击法将构建的携带有桑天牛纤维素酶基因的PiggyBac质粒转入家蚕秋枫品系卵中,并在其G0和G1代基因组中检测到纤维素酶基因的存在。桑天牛纤维素酶(Ag-EgaseI)属于GHF45家族,有较高的β-1,4内切糖苷水解酶活性,其开放阅读框大小为711bp,编码237个氨基酸。利用较成熟的PiggyBac转基因技术,以家蚕肌动蛋白(Actin3)启动子,SV40的多聚腺苷酸识别序列为终止子,启动和终止纤维素酶基因的表达,采用3×P3启动子系统启动的绿色荧光蛋白作为报告基因对家蚕生产品种秋枫进行转基因操作,利用电穿孔法,快速大量的处理采集到的产后4h内的蚕卵,在28度,环境湿度80%的条件下培养,并在G0和G1代基因组中检测到外源桑天牛纤维素酶基因存在。(本文来源于《遗传多样性：前沿与挑战——中国的遗传学研究（2013-2015）——2015中国遗传学会大会论文摘要汇编》期刊2015-08-14）
刘安军,麻献华,杨瑞,高琳,陈李斌佶[9]（2015）在《电穿孔法介导siRNA高效转染小鼠原代软骨细胞》一文中研究指出目的建立小鼠原代软骨细胞高效电转si RNA的方法。方法常规分离得到的小鼠原代软骨细胞继续用链丝菌蛋白酶消化3h,然后应用高效电转缓冲液和优化的电转参数转染p CMV-EGFP表达质粒或si RNA,用台盼蓝检测细胞存活率;转染后48h分析转染效率和si RNA靶分子的m RNA和蛋白表达水平。结果电穿孔后原代软骨细胞的存活率>80%,质粒的转染效率达到37.3%±5.2%;si RNA靶分子的m RNA和蛋白表达水平分别下调了75%和66%。结论成功建立了通过电穿孔介导si RNA转染小鼠原代软骨细胞的方法,达到了很好的基因沉默效果且保持了较高的细胞存活率。(本文来源于《医学研究杂志》期刊2015年07期）
汪飞,尹云厚,习欠云,董涛,蒋勇[10]（2015）在《电穿孔法转移GHRH(1-32)质粒在仔猪肌肉中表达对生产性能的影响》一文中研究指出采用pcDNA3.0-GHRH(1-32)质粒,对断奶仔猪肌肉单次注射后电穿孔处理,观察对猪生产性能的影响。采用碱变性法提取pcDNA3.0-GHRH(1-32)质粒并定量。选取32日龄仔猪60头,公母各半,分别注射0(生理盐水)、1.0mg GHRH表达质粒,然后用电穿孔仪电击处理。结果表明,与对照组相比,试验组猪32日龄初始平均体质量无差异(P>0.05),公猪67和98日龄平均体质量分别显着增加26.71%(P<0.05)和21.31%(P<0.05),而母猪呈增加趋势但差异不显着(P>0.05);公猪32~67日龄日增重显着增加47.93%(P<0.05),而母猪呈增加趋势但差异不显着(P>0.05);试验组淘汰率降低20.04%,其中公猪淘汰率降低33.50%;试验组猪80、150和180日龄血清GHRH浓度分别显着增加13.64%(P<0.05)、15.82%(P<0.05)和11.36%(P<0.05),血清中IGF-1浓度分别增加26.70%(P<0.05)、4.31%(P>0.05)和6.04%(P>0.05),且母猪血清浓度增幅高于公猪;血清中其余激素(T3、T4、IL-2、IL-6)和IgG浓度也呈上升趋势等。本试验表明GHRH(1-32)表达质粒可提高猪生产性能。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2015年04期）
电穿孔法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目前基于蚕卵显微注射的转基因技术难度较大,且对基因功能分析的周期较长,耗费更多人力。在家蚕等多数鳞翅目昆虫中,dsRNA不能高效地进入细胞内,单纯地注射dsRNA很难引发RNAi功效。为了克服这些技术上的困难,本研究首先以同时带有EGFP和DsRed2表达框的转基因载体p PIGA3GFP导入2龄幼虫,实现了外源基因自幼虫、蛹直至成虫期全龄表达稳定性,阳性率达到55.88%。进而,利用该技术体系将Wnt1-siRNAs导入家蚕幼虫体内,明显抑制了Wnt1的表达(P<0.01),并阻碍幼虫体表斑纹的形成。结果表明,该技术体系不仅稳定可靠,而且快捷高效。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
电穿孔法论文参考文献
[1].王泽,李春花,张宁坤,高连如,陈宇.电穿孔法转染脐带华通胶间充质干细胞的最佳条件[J].中国组织工程研究.2018
[2].周文林,上村望,藤原晴彦,叶爱红,曹锦如.基于电穿孔法的快速家蚕基因功能分析技术体系[C].中国蚕学会第九届青年学术研讨会论文集（摘要汇编）.2017
[3].陈凤,石德顺,黄贵婷,陈自洪,杨素芳.电穿孔法转染水牛脂肪干细胞与成纤维细胞的研究[J].中国畜牧杂志.2016
[4].鲁世绒.树突状细胞电穿孔法转染条件的优化[J].生物技术世界.2016
[5].牛丽丽,王秀娟,张传领,温建勋,姜丽丽.电穿孔法高效转染脑胶质瘤细胞U251的条件优化研究[J].内蒙古医学杂志.2016
[6].王雅珍,杨舟鑫,徐伟红,吕远栋,毛根祥.电穿孔法介导转染老年人成纤维细胞参数的优化[J].中国卫生检验杂志.2015
[7].杨蔚,张毅,钟玲,吴边,杨金伟.电穿孔法和化学法在多药耐药胃癌细胞转染中的效果比较[J].中国普通外科杂志.2015
[8].杨哲,陈克平,姚勤,高路.利用电穿孔法构建含有桑天牛纤维素酶(Ag-Egasel)基因的转基因家蚕[C].遗传多样性：前沿与挑战——中国的遗传学研究（2013-2015）——2015中国遗传学会大会论文摘要汇编.2015
[9].刘安军,麻献华,杨瑞,高琳,陈李斌佶.电穿孔法介导siRNA高效转染小鼠原代软骨细胞[J].医学研究杂志.2015
[10].汪飞,尹云厚,习欠云,董涛,蒋勇.电穿孔法转移GHRH(1-32)质粒在仔猪肌肉中表达对生产性能的影响[J].中国兽医学报.2015
论文知识图
