Lg-Flo1蛋白N端的诱导表达及活性研究

论文摘要

研究了Lg-Flo1蛋白N端的诱导表达条件及与甘露糖的结合活性。将构建的巴氏酵母Lg-FLO1基因N端序列的重组表达载体p ETFL1进行双酶切验证,转化大肠杆菌BL21（DE3）,通过菌落PCR鉴定阳性转化子,并进行诱导表达,利用SDS-PAGE检测不同诱导条件对目的蛋白N-Lg-Flo1表达的影响,并对目的蛋白进行变性溶解、纯化、复性及活性测定。结果表明,酶切证实重组表达载体含有N-Lg-FLO1基因片段;在LB培养基中的表达量高于TB培养基;和IPTG相比,乳糖诱导同样可以表达含量较高的目的蛋白且成本较低。以乳糖作为诱导剂,终质量浓度为0. 2 g/L,诱导温度37℃,诱导6 h,目的蛋白的表达量均高于30%;荧光光谱分析表明,复性后的N-Lg-Flo1蛋白具有与甘露糖结合的活性。该研究为大规模生产絮凝蛋白并以此为原料制备糖的特异性吸附剂奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株和质粒
•   1.2 培养基及主要试剂
•   1.3 重组表达质粒的鉴定
•   1.4 重组表达质粒的转化及阳性转化子筛选
•   1.5 N-Lg-Flo1蛋白在大肠杆菌中的表达及SDS-PAGE分析
•   1.6 诱导条件对N-Lg-Flo1蛋白表达的影响
•     1.6.1 诱导剂对N-Lg-Flo1蛋白表达的影响
•     1.6.2 培养基对N-Lg-Flo1蛋白表达的影响
•     1.6.3 诱导温度对N-Lg-Flo1蛋白表达的影响
•     1.6.4 诱导时间对N-Lg-Flo1蛋白表达的影响
•     1.6.5 诱导剂用量对N-Lg-Flo1蛋白表达的影响
•   1.7 包涵体N-Lg-Flo1蛋白的变性溶解、纯化及复性
•   1.8 蛋白含量的测定
•   1.9 荧光光谱分析
• 2 结果与分析
•   2.1 重组表达载体p ETFL1的鉴定
•   2.2 重组表达质粒的转化及阳性转化子检测
•   2.3 诱导剂和培养基对N-Lg-Flo1蛋白表达的影响
•   2.4 诱导温度对N-Lg-Flo1蛋白表达的影响
•   2.5 诱导时间对N-Lg-Flo1蛋白表达的影响
•   2.6 乳糖加入量对N-Lg-Flo1蛋白表达的影响
•   2.7 N-Lg-Flo1蛋白的纯化
•   2.8 N-Lg-Flo1蛋白的甘露糖结合活性
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 谢莹,李晓敏,蔡国林,陆健

关键词: 蛋白,诱导表达,乳糖,甘露糖结合,絮凝

来源: 食品与发酵工业 2019年18期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 工业生物技术教育部重点实验室(江南大学),吉林化工学院生物与食品工程学院,粮食发酵工艺与技术国家工程实验室(江南大学),江南大学生物工程学院

基金: 国家自然科学基金项目(31871785),江苏省重点研发计划现代农业面上项目(BE2018345),中央高校基本科研业务费专项资金(JUSRP21914),高等学校学科创新引智计划(111计划)项目(111-206)

分类号: Q78

DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.021293

页码: 9-14

总页数: 6

文件大小: 1398K

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