构建表达Flag-GPI的重组乙型肝炎病毒载体

论文摘要

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）是小型的嗜肝DNA病毒,能够特异性地感染人肝实质细胞。HBV的易感性可以归于多个方面,包括细胞表面的受体以及细胞内的蛋白或其他因子,目前对HBV易感性的了解还有待深入。本课题利用课题组原有的HBV 5c3c载体和糖基磷脂酰肌醇（glycosylphosphatidylinositol,GPI）的特性,构建了重组HBV载体5c3c-CD59-Flag-GPI和5c3cT-Flag-GPI,转染Huh7细胞后可以将Flag标签锚定在细胞膜上,且可利用Flag抗体通过流式细胞术对其进行分选。在回补HBV包膜蛋白的情况下,5c3cT-Flag-GPI能包装形成完整的重组HBV颗粒。本研究为后续优化重组HBV的包装效率,进而为HBV易感性研究提供工具并奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 细胞系
•     1.1.2 质粒
•     1.1.3 仪器和试剂
•     1.1.4 引物合成
•   1.2 方法
•     1.2.1 细胞培养
•     1.2.2 免疫荧光
•     1.2.3 流式细胞术 （针对6孔板的贴壁细胞）
•     1.2.4 Southern印迹法
• 2 结果
•   2.1 Flag-GPI表达载体的构建
•   2.2 Flag-GPI的细胞表面锚定验证
•   2.3 表达Flag-GPI的重组HBV具有复制能力
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 胡孔颖,谷陈建,吴敏乐,陶帅,刘楠楠,刘晶,谢幼华

关键词: 乙型肝炎病毒,糖基磷脂酰肌醇,重组乙型肝炎病毒载体

来源: 微生物与感染 2019年04期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系教育部卫健委医科院医学分子病毒学重点实验室,上海市浦东医院复旦大学附属浦东医院检验科

基金: 国家科技重大专项(民口)(2018ZX10301-208)

分类号: R373

页码: 199-208

总页数: 10

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