miR-142-3p在MCF-7细胞中靶向调节AKT pathway活性机理

论文摘要

为探究miR-142-3p在MCF-7细胞中作用机理,采用RNA免疫共沉淀技术和双荧光素酶报告基因技术筛选及验证miR-142-3p作用靶基因;蛋白质免疫印迹技术验证靶基因及其介导的PI3K-AKT-mTOR信号通路蛋白表达量及通路活性;应用实时荧光定量PCR验证靶基因PTEN对miR-142-3p调节关系。结果表明,miR-142-3p靶向调节AKT和PTEN表达;miR-142-3p过表达组中PI3K-AKT-mTOR通路活性显著降低;miR-142-3p抑制组中PI3K-AKT-mTOR通路活性显著上升;抑制PTEN表达显著提高miR-142-3p表达量。因此miR-142-3p靶向调节AKT和PTEN表达继而抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路活性,PTEN与miR-142-3p存在调节关系。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 细胞
•     1.1.2 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 细胞培养
•     1.2.2 细胞转染
•     1.2.3 RNA免疫共沉淀
•     1.2.4 双荧光素酶报告检测
•     1.2.5 实时荧光定量PCR反应体系
•     1.2.6 Western印迹检测
•     1.2.7 统计学方法
• 2 结果与分析
•   2.1 转染miR-142-3p mimics或inhibitor对miR-142-3p基因表达的影响
•   2.2 miR-142-3p靶基因筛选
•   2.3 miR-142-3p靶向调控AKT、PTEN表达检测
•   2.4 PI3K-AKT-mTOR通路蛋白表达检测
•   2.5 PTEN调节miR-142-3p表达检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王春梅,张玥,赵峰,门晶晶,王保胜,王赛赛,崔英俊,张莉

关键词: 信号通路,乳腺上皮癌细胞系

来源: 东北农业大学学报 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 东北农业大学乳品科学教育部重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目(31571338)

分类号: R392

DOI: 10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2019.09.006

页码: 44-49

总页数: 6

文件大小: 1373K

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