毕赤酵母中tRNACCGPro基因的表达及其作用效果

论文摘要

转运核糖核酸（tRNA）是蛋白质合成过程中重要参与成分之一,为了探索稀有密码子对应的tRNA（稀少tRNA）丰度改变对外源基因表达量的影响,文中构建了毕赤酵母稀少tRNA基因与外源基因共表达体系。首先在GFP基因中添加由4个连续脯氨酸稀有密码子CCG组成的阻遏区,结果显示该GFP基因的表达量明显降低。然后将带有阻遏区的GFP基因和tRNACCGPro基因顺次连接于pPIC9K载体上,在毕赤酵母GS115中共表达,结果使GFP表达量提高了4.9%;另将带有阻遏区的GFP基因和tRNACCGPro基因分别连接于pPIC9K和pFLDα载体,在毕赤酵母GS115中共表达,GFP表达量最高提高了12.5%;应用同样方式将tRNACCGPro基因与NFATc3T-GFP融合基因共表达,其表达量提高了21.3%。可见,tRNACCGPro在毕赤酵母GS115中确为稀少tRNA,通过共表达tRNACCGPro基因可显著提高带有连续该密码子的外源基因表达量,并且,文中构建的共表达体系将同样适用于其他稀少t RNA基因的筛选和验证。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 主要试剂与耗材
•   1.2 方法
•     1.2.1 表达载体的构建
•     1.2.2 电击转化及转化子鉴定
•     1.2.3 菌株培养及GFP基因甲醇诱导表达
•     1.2.4 GFP4CCG基因与t RNA基因共表达的荧光检测
•     1.2.5 SDS-PAGE验证
• 2 结果与分析
•   2.1 重组毕赤酵母菌株的构建
•   2.2 重组毕赤酵母表达水平检测
•     2.2.1 重组毕赤酵母的生长曲线
•     2.2.2 带有连续稀有密码子阻遏的GFP表达
•     2.2.3 tRNACCGPro基因效果验证
•   2.3 tRNA共表达系统验证
•     2.3.1 融合基因NFATc3T-GFP表达菌株的构建
•     2.3.2 NFATc3T-GFP融合蛋白表达水平检测
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 彭梦,谭明,曾艳,郑宏臣,宋诙

关键词: 毕赤酵母,稀少丰度,基因,共表达

来源: 生物工程学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 天津科技大学,中国科学院天津工业生物技术研究所

基金: 国家自然科学基金(No.31701534),中国科学院重点部署项目(Nos.KFJ-STS-ZDTP-016,KFZD-SW-211),天津市科技计划项目(Nos.16YFZCSY00790,16YFXTSY00530,15YFYssy00040)资助~~

分类号: Q78

DOI: 10.13345/j.cjb.180126

页码: 70-80

总页数: 11

文件大小: 2193K

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