表达PCV-2 Cap和PPV-1 VP2蛋白的重组PRV的构建及鉴定

论文摘要

为了构建表达猪圆环病毒2型（PCV-2）Cap蛋白和猪细小病毒1型（PPV-1）VP2蛋白的重组伪狂犬病病毒（PRV）及鉴定其免疫原性,试验采用经典同源重组技术构建重组病毒,利用密码子优化的VP2基因(VP2opti)和含PRV gG蛋白信号肽序列的VP2opti基因分别构建重组质粒pMD18T-LR（TK）-VP2opti和pMD18T-LR（TK）-VP2opti（SP）。用已构建的重组病毒rPRV-TK-/gE-/gG-/3Cap+为骨架,以EGFP为标签经同源重组获得重组病毒。采用IPMA法鉴定Cap蛋白和VP2蛋白抗原在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达,采用IFA法鉴定VP2蛋白在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达与定位。用这2株重组病毒免疫小鼠,通过检测血清中PRV、PCV-2和PPV-1抗体水平对构建的重组病毒在小鼠体内的免疫原性进行评价。结果表明:经同源重组获得重组病毒rPRV-TK-/VP2+/gE-/gG-/2Cap+和rPRV-TK-/VP2+（SP）/gE-/gG-/2Cap+;在重组病毒感染的PK-15细胞中均能检测到阳性Cap蛋白和VP2蛋白抗原;重组病毒rPRV-TK-/VP2+/gE-/gG-/2Cap+表达的VP2蛋白定位于细胞浆和细胞核,而重组病毒rPRV-TK-/VP2+（SP）/gE-/gG-/2Cap+表达的VP2蛋白定位于细胞浆;用这2株重组病毒免疫小鼠能够检测到PRV中和抗体;用灭活的重组病毒免疫小鼠后可产生低水平的Cap和VP2抗体,而重组病毒活毒免疫的小鼠未检测到相应抗体。说明这2株重组病毒在体外能够表达Cap蛋白和VP2蛋白,PRV gG蛋白信号肽序列的加入促进了VP2蛋白从细胞核的释放。

论文目录

• 1 材料
•   1.1 病毒株、质粒、细胞系、抗体及主要试剂
•   1.2 试验动物
•   1.3 主要仪器
• 2 方法
•   2.1 含VP2表达盒的重组质粒的构建与鉴定
•   2.2 表达EGFP蛋白和Cap蛋白的重组病毒的构建与鉴定
•   2.3 表达Cap蛋白和VP2蛋白的重组病毒的构建与鉴定
•   2.4 Cap蛋白和VP2蛋白在重组病毒感染细胞中的表达鉴定
•   2.5 VP2蛋白在重组病毒感染细胞中的表达与定位鉴定
•   2.6 重组病毒的生长动力学及毒价测定
•   2.7 重组病毒免疫小鼠抗体水平的测定
• 3 结果与分析
•   3.1 含VP2表达盒的重组质粒的构建与鉴定
•   3.2 表达EGFP蛋白和Cap蛋白的重组病毒的构建与鉴定
•   3.3 表达Cap蛋白和VP2蛋白的重组病毒的构建与鉴定
•   3.4 Cap蛋白和VP2蛋白在重组病毒感染细胞中的表达鉴定
•   3.5 VP2蛋白在重组病毒感染细胞中的表达与定位鉴定
•   3.6 重组病毒的生长动力学及毒价测定
•   3.7 重组病毒免疫小鼠抗体水平的测定
• 4 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 谢永兴,夏德利,黄立平,危艳武,吴洪丽,朱红振,冯力,刘长明

关键词: 猪圆环病毒型,蛋白,猪细小病毒型,重组伪狂犬病病毒,重组质粒,免疫原性

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

基金: 国家重点研发计划项目(2017YFD0500600,2017YFD0501600,2017YFD0500903),黑龙江省自然科学基金项目(C2015064)

分类号: S852.651

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.05.0255

页码: 16-22+175

总页数: 8

文件大小: 794K

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