苹果类泛素蛋白MdRAD23C2基因的分离及功能鉴定

论文摘要

【目的】研究苹果类泛素蛋白RAD23基因（MdRAD23C2）的功能,为抗旱苹果新品种的培育奠定基础。【方法】以秦冠苹果（Malus domestica cv.‘Qinguan’）为材料,克隆MdRAD23C2基因,对其进行生物信息学和定位分析,通过实时定量PCR分析其在不同逆境胁迫下（干旱、盐、碱和ABA）的表达模式。构建过表达载体转化农杆菌,采用叶盘法转化烟草,选取相应的转基因烟草株系,分析干旱胁迫下转基因烟草的相对电导率和丙二醛、叶绿素、过氧化氢（H2O2）、超氧阴离子■含量以及二氨基联苯胺（DAB）、氮蓝四唑（NBT）染色情况,探讨MdRAD23C2过表达对转基因烟草抗旱能力的影响。【结果】苹果MdRAD23C2基因编码序列长1 146 bp,编码381个氨基酸,其定位于细胞核和细胞膜中,可响应干旱、盐和碱等逆境胁迫。干旱处理2周,野生型烟草株系萎蔫程度明显,且DAB和NBT染色加深,相对电导率、丙二醛、H2O2和■含量均极显著高于转基因型烟草,而叶绿素含量极显著低于转基因型烟草,说明过量表达MdRAD23C2的烟草株系对干旱胁迫的耐受性明显增强。【结论】分离克隆了苹果MdRAD23C2基因,该基因可提高转基因植物对干旱胁迫的耐受性。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材 料
•   1.2 方 法
•     1.2.1 苹果材料的逆境处理
•     1.2.2 苹果材料RNA提取
•     1.2.3 MdRAD23C2基因克隆
•     1.2.4 MdRAD23C2序列生物信息学分析
•     1.2.5 MdRAD23C2的逆境响应分析
•     1.2.6 MdRAD23C2蛋白的亚细胞定位
•     1.2.7 MdRAD23C2过表达载体的构建
•     1.2.8 农杆菌侵染烟草及阳性植株的筛选
•     1.2.9 转基因烟草的抗旱能力
• 2 结果与分析
•   2.1 MdRAD23C2的克隆及序列分析
•   2.2 MdRAD23C2的逆境响应分析
•   2.3 MdRAD23C2蛋白的亚细胞定位
•   2.4 转MdRAD23C2基因烟草的鉴定
•   2.5 转MdRAD23C2基因烟草对干旱胁迫的响应
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 豆芳芳,龚小庆,邹养军

关键词: 类泛素蛋白,秦冠苹果,转基因烟草,干旱胁迫,抗旱育种

来源: 西北农林科技大学学报(自然科学版) 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,园艺

单位: 西北农林科技大学园艺学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室,广元市农业科学研究院

基金: 国家自然科学基金项目(31601737),中央高校基本科研业务费项目(2452015019),陕西省博士后科学基项目(2016-BSHED-ZZ118),国家苹果产业技术体系项目(CARS-27),陕西科技攻关项目“渭北旱地苹果园深层土壤干燥化形成机理与调控”(2016NY-070)

分类号: Q78;S661.1

DOI: 10.13207/j.cnki.jnwafu.2019.11.009

页码: 67-76

总页数: 10

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