导读:本文包含了鼠李糖苷酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:α-L-鼠李糖苷酶,GH78家族,基因组挖掘,催化关键基序
鼠李糖苷酶论文文献综述
张甜[1]（2019）在《新型细菌源α-L-鼠李糖苷酶挖掘及其生物转化应用》一文中研究指出α-L-鼠李糖苷酶(α-L-rhamnosidase,E.C.3.2.1.40)是一类糖苷水解酶,可通过专一性水解黄酮类化合物末端的α-L-鼠李糖基从而提高其生物利用率及生物学活性。α-L-鼠李糖苷酶作为一类生物催化剂,有广泛的应用前景。目前已表征的细菌源GH78家族α-L-鼠李糖苷酶仅有19个,有关其在生物催化应用方面的报道主要集中在真菌,因此,新型细菌源α-L-鼠李糖苷酶资源的挖掘及其对天然黄酮糖苷的生物转化研究具有重要意义。本研究首先利用基因组信息挖掘新酶发现策略,从解肝磷脂土地杆菌基因组中得到叁个α-L-鼠李糖苷酶基因PhRha78D、PhRha78E和PhRha78G,通过传统的双酶切连接法构建于表达载体pET-28a,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行异源表达,SDS-PAGE及酶活检测结果表明,PhRha78D、PhRha78E、PhRha78G大部分以催化活性包涵体形式异源表达。PhRha78D酶活力较低,仅对PhRha78E和PhRha78G进行了酶学特性研究,二者的最适pH分别为6.5和7.0,但最适反应温度却相差很大,分别为60 ~oC和40 ~oC;动力学常数K_M分别为0.55和0.4 mM,k_(cat)分别为0.18 s~(-1)和0.12 s~(-1);PhRha78E的T_(50)为51℃,在40-50℃孵育30 min后还有59%以上的活性,而PhRha78G的T_(50)为36℃,20-36℃热失活30 min仍有50%以上的残余活力;有机溶剂耐受性显示,二者均可耐受1%低浓度的有机溶剂。第一种策略获得新酶的催化活性不可预测,可溶性表达不可控。基于此引入第二种策略—宏基因组高通量测序结合催化关键基序虚拟筛选的新酶发现策略,利用该策略从人粪便宏基因组中获得叁个目标候选酶基因HFM-RhaA、HFM-RhaB和HFM-RhaC,密码子优化与全基因合成后,利用新颖的无缝克隆技术构建重组质粒。在大肠杆菌中异源表达后,SDS-PAGE表明,叁者大部分以可溶性形式表达于上清中,利用镍柱亲和纯化后进行了酶学性质表征,叁个酶的最适pH分别为6.0、6.0、5.7,最适温度分别为40 ~oC、60 ~oC、40 ~oC;HFM-RhaA和HFM-RhaC的K_M均很小,分别为1.59 mM和0.053 mM,最大反应速率分别为57.6μmol min~(-1) mg~(-1)和37.6μmol min~(-1) mg~(-1),k_(cat)分别为92.8 s~(-1)和62.9 s~(-1);HFM-RhaA和HFM-RhaC的T_(50)分别为35℃和28℃;HFM-RhaA对5%甚至10%的醇类有机溶剂有很好的耐受性,而HFM-RhaC仅对5%的醇类有机溶剂有较好的耐受性。对酶学性质有一定的了解后,进一步探究了HFM-Rha对芦丁和柚皮苷的生物转化情况。HFM-RhaA可以高效水解芦丁和柚皮苷,但水解柚皮苷的效率更高效,30μg/mL的HFM-RhaA催化水解柚皮苷时,88.6%的底物转化为樱桃苷,而120μg/mL的HFM-RhaA水解芦丁时,转化率达80.8%。200μg/mL HFM-RhaB水解柚皮苷120min,转化率达58.8%,但对芦丁几乎没有活性。HFM-RhaC对芦丁和柚皮苷的催化活性较好,180μg/mL的HFM-RhaC水解芦丁和柚皮苷120 min时,转化率分别为66.1%和49.2%。本研究提供了获得高概率活性的新酶资源挖掘策略,获得了具有自主知识产权的新型细菌源α-L-鼠李糖苷酶资源,并对黄酮类化合物进行了生物转化研究,对下一步酶法或全细胞法生物转化天然来源的黄酮类化合物具有指导作用。(本文来源于《山西大学》期刊2019-06-01）
史云璐[2]（2019）在《α-L-鼠李糖苷酶HFM-Rha78的酶学性质及其催化作用研究》一文中研究指出α-L-鼠李糖苷酶特异性地切割天然产物末端的α-鼠李糖基,有效地提高了这些天然产物的生物活性和生物利用度。本课题组通过基于保守基序的PCR和人粪便宏基因组高通量测序,获得了具有独立知识产权的新型α-L-鼠李糖苷酶HFM-Rha78。该酶分子质量为85.5kD,等电点为5.58。在克隆到载体pET-28a时,α-L-鼠李糖苷酶HFM-Rha78的N-末端携带(His)_6标签。本论文对其酶学性质和生物转化进行系统的研究,为该酶的进一步应用提供依据,对于挖掘新型α-L-鼠李糖苷酶资源具有重要的意义和价值。生物信息学分析结果表明,HFM-Rha78的亲水性氨基酸分布均匀,无明显的疏水区,且总亲水性平均系数为﹣0.425,表现出亲水性。N端的原始剪切位点分值为0.135,信号肽平均分值为0.205,综合剪切位点分值为0.185,皆处于较低水平,说明该酶缺乏信号肽。HFM-Rha78的2级结构以α螺旋和无规则卷曲为主,分别占33.43%和41.47%,其余为β转角结构和延伸链,分别占6.8%和18.31%。该酶的催化广义酸和广义碱均是谷氨酸,催化残基高度保守。以对硝基苯酚-α-L-吡喃鼠李糖苷(p-nitrophenyl-α-L-rhamnopyranoside,pNPR)为底物,紫外-可见分光光度法测定HFM-Rha78的酶学性质。结果表明,最适反应条件为:磷酸缓冲液pH 6.5,反应温度50℃。该酶在46℃以下保温30 min,不会影响其酶活性,说明其具有一定的热稳定性。HFM-Rha78能普遍耐受低浓度(1%以下)的有机溶剂,且1%~5%的异丙醇和1%的β-巯基乙醇还能够显着提高其酶活性。酶动力学实验证明HFM-Rha78对pNPR的亲和性较弱。采用高效液相色谱法,研究HFM-Rha78对黄酮苷类化合物芦丁、柚皮苷和橙皮苷的催化活性。结果表明,该酶均能专一性地将3种底物分别转化为异槲皮素、樱桃苷、橙皮素-7-O-葡萄糖苷,转化效率为柚皮苷(29)芦丁(29)橙皮苷。该酶水解芦丁、柚皮苷和橙皮苷的最适温度分别为39℃、45℃和42℃,最适pH为7.5、6.5和5.5~6.0。柚皮苷最适反应时间最短,为2 h,芦丁及橙皮苷的最适反应时间为12 h。(本文来源于《山西大学》期刊2019-06-01）
董德源[3]（2019）在《黑曲霉中α-L-鼠李糖苷酶基因的调取、克隆和初步表达》一文中研究指出α-L-鼠李糖苷酶(EC 3.2.1.40)是一种糖苷水解酶,它能够特异性水解非还原性末端的鼠李糖基。目前α-L-鼠李糖苷酶广泛地应用于食品、制药、化工等行业,市场前景广阔。微生物来源的α-L-鼠李糖苷酶一般都需要诱导物的诱导来促进产酶,但同时还伴随有β-葡萄糖苷酶产生,混合酶不仅存在纯化困难的问题还对后续应用造成不便。因此,得到单一并且催化效率高的α-L-鼠李糖苷酶就显得十分必要。本课题组前期分离得到一株黑曲霉菌株NCU-317,在进行诱导产α-L-鼠李糖苷酶的同时也有β-葡萄糖苷酶的产生。因此本研究拟通过现代分子生物学技术构建工程菌的方法来解决上述存在的问题。本论文主要结果如下:1、通过改变文献广泛报道的液体摇瓶为固体平板培养方法,提取到了完整的总RNA,随后采用改进的RACE技术并结合设计了特异性的接头引物,并充分运用了TdT末端转移酶的性质,还运用了Nested PCR、Touch-down PCR来提高RACE技术的稳定性和可靠性。经过实验发现此改良后的RACE法应用于黑曲霉中α-L-鼠李糖苷酶基因调取效果良好。2、以前期得到的黑曲霉NCU-317 cDNA为模板,通过普通PCR成功获得了α-L-鼠李糖苷酶基因(α-L-Rha)全长。α-L-鼠李糖苷酶基因全长3018bp,其中含有2748bp的完整开放阅读框,5’非编码区长为216bp,3’非编码区长为72bp。经过对序列的生物信息学分析显示:编码蛋白由915个氨基酸组成,预测理论分子量为103.94kD,等电点为5.59;蛋白质二级结构以无规则卷曲为主;将氨基酸序列输入UniProt比对后发现,黑曲霉NCU-317的产酶序列与细菌家族中的α-L-鼠李糖苷酶家族蛋白同源性最高,达到了99.6%。3、构建原核重组表达载体pET25b-α-L-Rha,采用能够识别稀有密码子的Rossetta为宿主菌。经过IPTG诱导实验,确定原核表达载体分泌的α-L-鼠李糖苷酶为包涵体形式,包涵体经稀释透析复性法后以芦丁和柚皮苷为底物进行去鼠李糖基活性测定,HPLC法几乎检测不到重组α-L-鼠李糖苷酶活性。4、构建了pPIC9K-α-L-Rha重组载体,毕赤酵母GS115为宿主菌。用Bgl II对重组载体线性化后电转入毕赤酵母GS115,筛选到8株符合Bgl II线性化表型的转化子,分别诱导后,但是几乎测不到有α-L-鼠李糖苷酶酶活出现。随后将8株阳性毕赤酵母工程菌诱导120 h后,对上清专门进行了70%的硫酸铵沉淀和透析操作,最终几乎检测不到酶活。5、随后将黑曲霉NCU-317中原始基因和来源于JMU-TS528的原始产酶序列分别优化后,在优化的JMU-TS528基因工程菌中检测到了酶活,其酶活在45℃达到了626.21 U/mL。(本文来源于《南昌大学》期刊2019-05-22）
方可,李婷,朱艳冰,黄高凌,杨远帆[4]（2019）在《β-葡萄糖苷酶和α-L-鼠李糖苷酶对速溶绿茶粉水溶液香气的影响》一文中研究指出速溶茶粉是重要的茶叶深加工产品,酶工程技术是改良速溶茶粉及其加工产品风味的重要途径。为了解β-葡萄糖苷酶和α-L-鼠李糖苷酶对速溶绿茶粉水溶液香气的影响,运用感官检验、气相色谱-质谱联用(GC-MS)、香气强度值(OAV)方法对酶处理前后的速溶绿茶粉水溶液进行分析。感官评价和GC-MS分析发现,速溶绿茶粉水溶液主要呈焦糖香和甜香;β-葡萄糖苷酶处理后花香、甜香和青草香显着增强,焦糖香降低,顺式-3-己烯醇、香叶醇、己醇、水杨酸甲酯和苯甲醛这些重要的挥发性化合物的含量显着增加;α-L-鼠李糖苷酶处理后速溶绿茶粉水溶液中焦糖香显着降低;两种酶结合处理后青草香和甜香进一步增强,顺式-3-己烯醇和水杨酸甲酯的含量进一步增加。OAV分析发现,速溶绿茶粉水溶液主要香气贡献成分为3-甲基丁醛、2-甲基丁醛、2-乙基呋喃、柠檬烯和壬醛;β-葡萄糖苷酶处理后主要香气贡献成分为顺式-3-己烯醇、水杨酸甲酯、香叶醇和癸醛;α-L-鼠李糖苷酶对速溶绿茶粉水溶液各成分的OAV值没有显着影响;两种酶联合处理可进一步增强顺式-3-己烯醇的OAV值。以上研究表明β-葡萄糖苷酶可显着改变速溶绿茶粉水溶液的香气,且α-L-鼠李糖苷酶与β-葡萄糖苷酶对增强速溶绿茶粉水溶液的青草香具有协同增效作用,为改良速溶茶粉加工食品的风味提供了技术参考。(本文来源于《食品与生物技术学报》期刊2019年01期）
刘小琴,杨岩,吴喆瑜,巩建业,刘嘉男[5]（2019）在《多点突变提高α-L-鼠李糖苷酶热稳定性》一文中研究指出为了提高α-L-鼠李糖苷酶的热稳定性,对实验室前期构建的K406R、K440R、K573V、E631F四个不同氨基酸位点的单点突变体进行联合突变,得到了K406R-K573V、K406R-E631F、K440R-K573V、K440R-E631F四个联合突变体。结果表明,相比于野生型(wild type,WT),联合突变体K440R-K573V和K440R-E631F的热稳定性有所提高,在60℃时半衰期分别提高了1. 13倍,1. 44倍;在65℃的半衰期分别提高了1. 64倍,1. 64倍;在70℃的半衰期分别提高了1. 88倍,1. 68倍。对突变体K440R-E631F进行圆二色谱分析、分子动力学以及分析微观结构变化分析可知,K440R-E631F突变体与WT相比,内部疏水性有所提高,二级结构中α-螺旋、"-转角、无规则卷曲含量增多,可能与热稳定性的提高相关。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2019年06期）
史云璐,李彬春,李艳琴[6]（2018）在《人粪便宏基因组α-L-鼠李糖苷酶的酶学性质及其对芦丁的生物转化》一文中研究指出HFM-rha78是本实验室从健康人体粪便宏基因组DNA中获得的新型细菌源α-L-鼠李糖苷酶基因。该基因全长2 166 bp,编码蛋白质分子质量为83 kD,等电点5. 58,其二级结构以α螺旋和无规卷曲为主,整体表现出亲水性,其氨基酸序列与GenBank收录的序列一致性仅为48%。系统进化树表明,该酶被分类至亚家族Ⅱ,其催化广义酸和广义碱均为谷氨酸,催化残基高度保守。为明确其酶学性质,以对硝基苯酚-α-L-吡喃鼠李糖苷(p-nitrophenyl-α-L-rhamnopyranoside,pNPR)为底物,通过紫外-可见分光光度法测定产物对硝基苯酚的生成量,得到HFM-Rha78的最适反应温度为50℃,最适pH为6. 5,且在30～46℃下保温30 min,不影响活力。为初步研究其对芦丁的水解能力,首先对HFM-Rha78的有机溶剂耐受性进行了研究。结果表明,该酶能普遍耐受1%的有机溶剂,甚至1%～5%的异丙醇和1%的β-巯基乙醇,有提高其活性的能力。当DMSO浓度为10%时,仍能保持79%的酶活性。HFM-Rha78对底物pNPR的V_(max)为129. 9μmol min-1mg~(-1),HFM-Rha78的KM较大,为26. 0 mmol L~(-1)。转换数k_(cat)为185. 1 s~(-1),催化效率k_(cat)/KM为7. 1×103s~(-1)mol~(-1)L。采用高效液相色谱仪检测HFM-Rha78水解芦丁的能力。结果表明,37℃条件下,随着酶浓度和水解时间增加,芦丁转化率增大。反应10 h时,芦丁转化率达41. 8%。本研究获得了HFM-Rha78的最适反应条件,并确定其可特异性生物转化芦丁为异槲皮素。(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2018年12期）
李文静,李利君,高庭,巩建业[7]（2018）在《D555N-E617G联合突变提高白曲霉α-L-鼠李糖苷酶的催化效率》一文中研究指出α-L-鼠李糖苷酶(α-L-rhamnosidase [EC3.2.1.40])是一种糖苷水解酶,它能够特异性地水解许多糖苷类物质末端的α-L-鼠李糖基。α-L-鼠李糖苷酶的来源广泛,在动物组织、植物和微生物中均发现了α-L-鼠李糖苷酶。目前主要是通过细菌和真菌发酵来获取α-L-鼠李糖苷酶。本文通过发酵获得了白曲霉来源的α-L-鼠李糖苷酶,采用序列比对和蛋白质结构模拟分析相结合的策略,构建了7个重组白曲霉α-L-鼠李糖苷酶突变体。其中,联合突变体D555N-E617G的比活力比原始型提高了585.5%。其最适pH和最适温度与原始型一样未发生明显变化,都保持在pH 4.0和50℃。而D555N-E617G的最大反应速率Vmax比原始型提高了约5.3倍,催化常数kcat比原始型提高了约9.9倍,催化效率kcat/Km比原始型提高了约9.0倍。本研究为后续研究α-L-鼠李糖苷酶的催化机制提供了理论基础。(本文来源于《中国生物化学与分子生物学会第十二届全国会员代表大会暨2018年全国学术会议摘要集》期刊2018-10-25）
郭双双,兰青,何贺贺,郑芳芳,王子龙[8]（2018）在《Klebsiella sp.GXK-1的α-L-鼠李糖苷酶的酶学性质》一文中研究指出【目的】克隆、表达克雷伯氏菌Klebsiellasp.GXK-1菌株中的α-L-鼠李糖苷酶基因,并研究重组酶的酶学性质。【方法】比对分析GenBank数据库中克雷伯氏菌同属的α-L-鼠李糖苷酶基因序列,设计简并引物PCR扩增基因的保守区。扩增目的基因,以pSE380为表达载体构建重组质粒pSE-rha1,并在大肠杆菌E.coli XL-blue进行诱导表达,使用镍亲和层析纯化重组蛋白,研究目的蛋白RHA1的酶学性质。【结果】以pNPR为底物,进行重组酶酶学性质的研究。重组酶RHA1的最适pH值和最适温度分别为5.0和45℃,Km值为(0.223±0.030)mmol/L,V_(max)值为(1.272±0.121)μmol/(min·mg)。在pH值为6~10的缓冲液内酶活力仍保持在80%以上;在温度为40℃以下时,酶活较为稳定,但在温度高于40℃时酶活力迅速下降。RHA1能水解pNPR、橙皮苷和芦丁。【结论】RHA1具有良好的pH稳定性,不仅能够水解人工底物pNPR,还能够水解α-1,6键的天然底物橙皮苷和芦丁,具有一定的医疗应用价值。(本文来源于《广西科学》期刊2018年03期）
吉亚茹[9]（2018）在《多形拟杆菌α-L-鼠李糖苷酶资源挖掘及其结构分析》一文中研究指出作为生物催化剂,酶具有很多优点,被广泛应用于各种工业生产领域。α-L-鼠李糖苷酶(α-L-rhamnosidase,E.C.3.2.1.40)是一类可高效水解天然糖苷化合物的糖苷水解酶,在生物技术领域具有很好的生物催化应用前景。迄今,已报道的细菌源GH78家族α-L-鼠李糖苷酶基因不到20个,对α-L-鼠李糖苷酶的酶学性质与催化机制还有待进一步研究。人体肠道细菌多形拟杆菌可利用各种多糖与糖苷,其多种糖苷酶水解酶系已被详细解析,然而,多形拟杆菌α-L-鼠李糖苷酶系未见报道。通过检索CAZy数据库,得知多形拟杆菌VPI-5482基因组包含6个预测的α-L-鼠李糖苷酶基因,本论文选取其中叁个α-L-鼠李糖苷酶进行研究。以多形拟杆菌VPI-5482全基因组为模板PCR成功扩增得到目的基因BtRha78A、BtRha78D和BtRha78E,其核苷酸序列长度分别为2190、3459和2646 bp,对应编码729、1152和881个氨基酸残基。将目的基因与表达载体pET-28a连接,在大肠杆菌BL21(DE3)异源表达,采用Ni-NTA琼脂糖亲和色谱纯化得到目的酶,并对目的酶进行系统地酶学性质表征。酶学性质研究表明,叁个酶可高效水解底物pNPR,BtRha78A、BtRha78D和BtRha78E的最适pH分别为6.5、6.0和7.0,BtRha78A最适温度为60 ~oC,BtRha78D和BtRha78E最适温度均为50 ~oC。酶反应动力学数据显示,BtRha78A、BtRha78D和BtRha78E水解底物pNPR的V_(max)分别为48.7μmol min~-11 mg~(-1)、6.77μmol min~-11 mg~(-1)和3.21μmol min~-11 mg~(-1);k_(cat)/K_M分别为130000 M~-11 S~(-1)、105600 M~-11 S~(-1)和12500 M~-11 S~(-1)。有机溶剂对酶活力影响的实验结果表明,BtRha78A对低浓度醇类有较好的耐受性,在1%(v/v)的醇类中可保持78%~85%的活性;BtRha78D和BtRha78E可耐受低浓度(1%)的有机溶剂,10%浓度显着降低了酶活性,对DMSO具有很好的耐受性,在10%DMSO浓度下仍能分别保持42%和53%活性。此外,从BtRha78A的稳定性实验可得出,BtRha78A具有很好的pH稳定性与较高的热稳定性。基于氨基酸序列比对与结构分析,利用丙氨酸扫描突变技术确定BtRha78A的功能残基。通过全质粒PCR构建BtRha78A关键残基的定点突变体,各突变体酶的活力显着下降。由此得出,BtRha78A的催化广义酸为Asp335,广义碱为Glu595。Asp330、Arg334、Trp339、Asp342、Tyr383、Trp440和His620是BtRha78A的功能残基。对BtRha78A的保守广义酸基序(Asp330-Asp342)研究表明,此基序包含酶的催化广义酸及很多功能残基,对酶发挥催化作用是至关重要的。本研究中多形拟杆菌VPI-5482的叁个α-L-鼠李糖苷酶具有良好的酶学性质,有利于酶在工业生产领域中的应用。BtRha78A结构分析与功能残基确定为酶的催化机制解析与分子改造奠定基础。(本文来源于《山西大学》期刊2018-06-01）
邬子彬[10]（2018）在《α-L-鼠李糖苷酶生产菌株的筛选及其应用》一文中研究指出黄酮类化合物以游离态或成苷的形式分布于自然界中,由于苷元及糖苷的数量、种类、连接方式的不同,使得黄酮类化合物的结构复杂多样。黄酮类化合物具有清除自由基、抗氧化、抗肿瘤、降血脂、抗病毒等药理活性,但是黄酮类化合物普遍水溶性差,导致其利用效率低。为了提高黄酮类化合物的水溶性,目前主要对黄酮类化合物进行结构修饰,而去糖基化是其中一种常用手段。去糖基化包括传统的化学水解和生物酶催化法,传统化学方法采用硫酸或盐酸水解黄酮类化合物,该方法反应激烈,对设备要求高,副产物多;生物酶催化法采用酶对黄酮类化合物进行酶水解,进而达到去糖基的作用。由于大部分黄酮类化合物末端带有鼠李糖,进行影响其水溶性和药理活性,而α-L-鼠李糖苷酶可以高效、专一水解黄酮类化合物的末端鼠李糖,进而增大其水溶性,提高其利用效率。因此,筛选产α-L-鼠李糖苷酶的菌株具有非常重要的意义。本研究首先从霉变的柚子及附近的土壤中采样,初筛得到20株产α-L-鼠李糖苷酶的菌株,测定各株菌株所产α-L-鼠李糖苷酶的酶活,其中No.5号菌株所产α-L-鼠李糖苷酶酶活最高,高达484.25 U/m L。观察No.5号菌株的菌落形态和显微结构初步确定该菌株是黑曲霉,再将该菌株的18S rRNA序列与NCBI数据库的进行同源比对,构建系统发育进化树,该菌株的18S rRNA序列与Aspergillus Niger 513.88具有99%的相似度。因此,可以确定该菌株为黑曲霉,并命名为黑曲霉NCU-317。以酶活为优化指标,探究黑曲霉NCU-317发酵产α-L-鼠李糖苷酶的条件,确定了培养基的最佳成分:4 g/L蔗糖,4 g/L酵母膏,0.2 g/L硫酸镁,2 g/L芦丁;最佳发酵条件:最佳发酵温度为28℃,最佳发酵初始pH值为5,最佳转速为180 r/min,250 mL摇瓶中最佳装液量为100 m L,最佳发酵周期为72 h。优化后,黑曲霉NCU-317所产α-L-鼠李糖苷酶的酶活为675.8 U/m L,是初始PDA培养基的1.4倍。采用(NH_4)_2SO_4分级沉淀和凝胶色谱层析对黑曲霉NCU-317发酵所产α-L-鼠李糖苷酶进行了分离纯化,纯化倍数分别为1.27和3.51,回收率分别为80.00%和57.86%。采用SDS-PAGE凝胶电泳和蛋白分子量与迁移率的方程,测得α-L-鼠李糖苷酶的分子量为58.1 kDa。探究了α-L-鼠李糖苷酶酶学性质,其中最适反应温度为50℃,最适反应pH值为5,该酶具有耐高温和耐酸性的性质,在70℃静置2 h后,其酶活为262 U/m L,约为最适温度下酶活的1/3,于pH值为2~7下静置2 h后测定酶活,其酶活几乎不受影响。Mg~(2+)和Mn~(2+)对α-L-鼠李糖苷酶具有激活作用,Fe~(2+)、Cu~(2+)和Hg~(2+)对α-L-鼠李糖苷酶起抑制作用。研究了α-L-鼠李糖苷酶的动力学,测得米氏常数K_m=14.03 mmol/(L·min),最大反应速率V_(max)=22.47 mmol/(L·min)。利用黑曲霉NCU-317所产α-L-鼠李糖苷酶催化水解芦丁,制备异槲皮素,芦丁的转化率高达95%以上,采用硅胶柱层析对异槲皮素进行分离纯化,用HPLC测定所得异槲皮素的纯度高达99.1%,通过核磁氢谱和质谱对异槲皮素的结构进行了表征鉴定。(本文来源于《南昌大学》期刊2018-05-30）
鼠李糖苷酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
α-L-鼠李糖苷酶特异性地切割天然产物末端的α-鼠李糖基,有效地提高了这些天然产物的生物活性和生物利用度。本课题组通过基于保守基序的PCR和人粪便宏基因组高通量测序,获得了具有独立知识产权的新型α-L-鼠李糖苷酶HFM-Rha78。该酶分子质量为85.5kD,等电点为5.58。在克隆到载体pET-28a时,α-L-鼠李糖苷酶HFM-Rha78的N-末端携带(His)_6标签。本论文对其酶学性质和生物转化进行系统的研究,为该酶的进一步应用提供依据,对于挖掘新型α-L-鼠李糖苷酶资源具有重要的意义和价值。生物信息学分析结果表明,HFM-Rha78的亲水性氨基酸分布均匀,无明显的疏水区,且总亲水性平均系数为﹣0.425,表现出亲水性。N端的原始剪切位点分值为0.135,信号肽平均分值为0.205,综合剪切位点分值为0.185,皆处于较低水平,说明该酶缺乏信号肽。HFM-Rha78的2级结构以α螺旋和无规则卷曲为主,分别占33.43%和41.47%,其余为β转角结构和延伸链,分别占6.8%和18.31%。该酶的催化广义酸和广义碱均是谷氨酸,催化残基高度保守。以对硝基苯酚-α-L-吡喃鼠李糖苷(p-nitrophenyl-α-L-rhamnopyranoside,pNPR)为底物,紫外-可见分光光度法测定HFM-Rha78的酶学性质。结果表明,最适反应条件为:磷酸缓冲液pH 6.5,反应温度50℃。该酶在46℃以下保温30 min,不会影响其酶活性,说明其具有一定的热稳定性。HFM-Rha78能普遍耐受低浓度(1%以下)的有机溶剂,且1%~5%的异丙醇和1%的β-巯基乙醇还能够显着提高其酶活性。酶动力学实验证明HFM-Rha78对pNPR的亲和性较弱。采用高效液相色谱法,研究HFM-Rha78对黄酮苷类化合物芦丁、柚皮苷和橙皮苷的催化活性。结果表明,该酶均能专一性地将3种底物分别转化为异槲皮素、樱桃苷、橙皮素-7-O-葡萄糖苷,转化效率为柚皮苷(29)芦丁(29)橙皮苷。该酶水解芦丁、柚皮苷和橙皮苷的最适温度分别为39℃、45℃和42℃,最适pH为7.5、6.5和5.5~6.0。柚皮苷最适反应时间最短,为2 h,芦丁及橙皮苷的最适反应时间为12 h。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
鼠李糖苷酶论文参考文献
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