脐带间充质干细胞源外泌体分离纯化的方法改良

论文摘要

目的改良脐带间充质干细胞来源外泌体（UCMSC-exo）分离纯化方法。方法外泌体经低温超离法初步分离后,q EV柱进一步纯化,透射电镜（TEM）观察其生物学形态,流式检测其表面标记物,NTA检测其粒径分布。结果改良前后的外泌体形态均为典型的双层膜结构,但改良后染色背景单一;外泌体表面标志物CD63和CD81阳性率改良前分别为69.3%和89.8%;改良后分别为88.3%和92.9%,改良后阳性率有所提高,但差异不显著（P> 0.05）。改良前外泌体粒径为58.77～396.1 nm,主峰为158.4 nm,平均粒径134.5 nm,分布系数（PDI）为0.148,20～200 nm的exo百分比为78.9%;改良法后粒径为58.77～396.1 nm,主峰为159.1 nm,平均粒径137.1 nm,PDI为0.132,20～200 nm的exo百分比为78.7%,改良法后外泌体的粒径分布范围、主峰值及PDI值比较无显著变化（P> 0.05）。结论低温超高速离心分离后加用qEV柱纯化,可去除UCMSC-exo杂蛋白,且不影响其得率、粒径分布和阳性标志物。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要试剂与设备
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 培养上清的收集
•     1.2.2 超高速离心分离外泌体
•     1.2.3 qEV柱纯化外泌体
•     1.2.4 TEM检测
•     1.2.5 流式检测外泌体表面标记物
•     1.2.6 NTA检测
•     1.2.7 银染检测exo蛋白
• 2 结果
•   2.1 TEM观察外泌体
•   2.2 银染检测外泌体蛋白
•   2.3 流式检测外泌体表面标记物
•   2.4 外泌体粒径分布
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘高米洋,宋乙甲,史菲,刘菊芬,林庆铿,张学娟,李自安,潘兴华

关键词: 脐带间充质干细胞,外泌体,分离,纯化,方法

来源: 西南国防医药 2019年08期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 解放军920医院细胞生物治疗中心干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室昆明医科大学920医院临床学院

基金: 全军实验动物专项面上项目(SYDW2016004),云南省科技创新团队建设项目(20140810)

分类号: R329.2

页码: 846-849

总页数: 4

文件大小: 1047K

下载量: 423