检测点激酶RAD17在中国卤虫胚胎滞育解除过程中的作用

论文摘要

中国卤虫（Artemia sinica）在恶劣的气候条件下（如高盐及低温环境）胚胎可以停止自身发育,使细胞周期停滞,形成滞育卵来抵御恶劣环境对胚胎造成的损伤,并在生长环境适宜的情况下打破滞育继续生长。检测点激酶RAD17参与多种有关细胞周期调控的生理代谢活动,如DNA损伤修复,促进编程性细胞凋亡和细胞周期的阻滞等。目前,RAD17在中国卤虫滞育以及滞育解除过程中的作用机制尚不清楚。本实验采用RACE技术首次克隆得到了中国卤虫RAD17基因的全长序列,As-rad17全长1900 bp,包含一个1632 bp的开放阅读框（ORF）,编码了543个氨基酸,理论分子量约为60.7 kDa,理论等电点为5.20。通过软件分析发现中国卤虫的RAD17蛋白是定位于细胞核及细胞质的亲水性蛋白;无跨膜区域,是一种无分泌性的非跨膜蛋白;磷酸化位点预测显示在中国卤虫As-rad17中可能含有24个丝氨酸位点,8个苏氨酸位点,12个酪氨酸位点;二级结构预测结果显示,As-rad17以具有α螺旋（43.46%）,延伸链（17.68%）,β折叠（7.92%）及无规卷曲（30.94%）等结构;通过构建As-rad17蛋白系统发育进化树,我们将中国卤虫与其他13种物种的同源关系进行分析对比,证实了As-rad17为高度保守蛋白;原位杂交的实验结果表明,As-rad17几乎在卤虫的全身都有非特异性表达,Real-time PCR和免疫印迹的双重实验表明在中国卤虫在0?40 h的早期发育阶段,RAD17表达量呈现出先升高后下降的趋势,并在15?20 h具有较高的表达量;在进行有关胁迫实验的过程中我们发现,在低温及高盐的刺激下,As-rad17的表达水平呈现出不同的趋势,在低温胁迫条件下As-rad17表达上调,而在高盐胁迫条件下,As-rad17的表达量表达略微下调,且变化不明显。总体的实验结果表明,RAD17参与调控中国卤虫早期胚胎发育及中国卤虫胚胎滞育解除,并在以上代谢过程中发挥着至关重要的作用。

论文目录

• 摘要
• abstract
• 1 前言
•   1.1 卤虫的研究概况
•     1.1.1 卤虫的形态特征及分布特点
•     1.1.2 卤虫的经济与科研价值
•   1.2 RAD17 的研究概况
•   1.3 本研究的目的和意义
• 2 材料与方法
•   2.1 材料
•     2.1.1 卤虫孵化及培养条件
•     2.1.2 药品与试剂
•     2.1.3 仪器与设备
•   2.2 方法
•     2.2.1 中国卤虫总RNA提取
•     2.2.2 用逆转录法合成cDNA
•     2.2.3 目的基因片段的扩增
•     2.2.4 cDNA 3’RACE
•     2.2.5 PCR产物纯化与转化
•     2.2.6 cDNA 5’RACE
•     2.2.7 实时定量PCR（qPCR）
•     2.2.8 蛋白免疫印迹实验
•     2.2.9 原位杂交实验
•     2.2.10 生物信息学及生物统计分析
• 3 结果
•   3.1 As-RAD17基因全长序列
•     3.1.1 As-RAD17片段的获得
•     3.1.2 As-RAD17 3’端序列的获得
•     3.1.3 As-RAD17 5’端序列的获得
•     3.1.4 As-RAD17 cDNA序列全长
•   3.2 生物信息学分析
•   3.3 As-RAD17的进化树
•   3.4 As-RAD17的表达水平
•     3.4.1 中国卤虫As-rad17在不同发育时期的相对表达量
•     3.4.2 As-rad17在高盐胁迫下的表达
•     3.4.3 低温刺激条件下中国卤虫As-rad17的相对表达量
•   3.5 RAD17蛋白的表达模式
•     3.5.1 不同发育时期的中国卤虫RAD17蛋白相对表达情况
•     3.5.2 中国卤虫As-rad17蛋白在低温刺激条件下的表达
•   3.6 As-rad17的表达部位
• 4 讨论
•   4.1 中国卤虫As-rad17基因的生物学特征
•   4.2 中国卤虫As-rad17在卤虫胚胎不同发育时期的相对表达水平
•   4.3 中国卤虫As-rad17在低温及高盐胁迫条件下的表达水平
•   4.4 As-rad17在中国卤虫早期胚胎的不同发育时期的表达部位
• 结论
• 参考文献
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 孙克穷

导师: 侯林

关键词: 中国卤虫,基因表达,早期胚胎发育

来源: 辽宁师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学,生物学

单位: 辽宁师范大学

基金: 国家自然科学基金项目Annexin3介导anxa3,lea,drrb,atf3途径激活中国卤虫滞育胚胎重启动的分子机制,(项目编号:31572607)

分类号: Q953

总页数: 52

文件大小: 3403K

下载量: 18