犬腺病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

论文摘要

为建立良好的犬腺病毒检测方法,参考GenBank中犬腺病毒毒株（GenBank登录号:U77082.1）的E3基因,设计并合成了一对特异性引物。扩增的目的片段与pMD19-T载体相连接构建重组质粒,以该重组质粒为模板建立特异性好、灵敏度高且可快速检测犬腺病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。经特异性方法验证,在常见的五种犬病毒病中,本方法只能检测出犬腺病毒存在。敏感性试验结果表明,本方法的灵敏性较普通PCR方法高出100倍。重复性试验结果的变异系数均不高于0.95%。本方法的建立可为犬腺病毒的检测提供技术支持。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 病毒
•   1.2 主要试剂
•   1.3 引物设计
•   1.4 CAV普通PCR检测方法退火温度摸索及建立
•   1.5 标准模板的制备
•   1.6 标准曲线的建立
•   1.7 敏感性试验
•   1.8 特异性试验
•   1.9 重复性试验
• 2 结果
•   2.1 退火温度的摸索及目的片段的PCR鉴定
•   2.2 CAV实时荧光定量PCR方法标准曲线和熔解曲线的绘制
•   2.3 敏感性试验
•   2.4 特异性试验
•   2.5 重复性试验
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 由欣月,郝雲峰,崔尚金,秦彤

关键词: 犬腺病毒,荧光定量,基因,检测方法

来源: 中国动物传染病学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,农业农村部兽用药物与诊断技术北京科学观测实验站

基金: 中国农业科学院基本科研业务费(2018-YWF-YTS-16),中国农业科学院创新工程项目(ASTIP-IAS15)

分类号: S852.655

页码: 29-34

总页数: 6

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