miR-155靶向SIRT1调控缺氧/复氧心肌细胞的活力、凋亡和氧化应激

miR-155靶向SIRT1调控缺氧/复氧心肌细胞的活力、凋亡和氧化应激

论文摘要

目的研究miR-155对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞的活力、凋亡和氧化应激的影响,并探讨其机制。方法运用RT-qPCR检测细胞中miR-155、组蛋白去乙酰化酶(SIRT)1表达;H/R+miR-NC inhibitors组(转染miR-NC inhibitors)、H/R组(未转染H/R H9C2细胞)和Control组(未转染H9C2细胞)、H/R+miR-155 inhibitors+SIRT1 blocker组(miR-155 inhibitors和SIRT1 blocker共转染)、H/R+miR-155 inhibitors组(转染miR-155 inhibitors),均采用脂质体转染H/R H9C2细胞;Western印迹检测裂解的半胱天冬酶半胱天冬酶(cleaved-caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病蛋白(Bcl)-2、SIRT1的蛋白水平;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)实验检测细胞中乳酸盐脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光素酶活性。结果与Control组相比,H/R组细胞的miR-155表达显著升高(P<0.05),且敲减miR-155表达增加大鼠原代心肌细胞活力,抑制H9C2细胞凋亡,促进H9C2细胞的氧化应激。SIRT1为miR-155的靶标,且敲减SIRT1表达可逆转敲减miR-155对细胞的促生长,抑凋亡和促氧化作用。结论 miR-155可抑制大鼠原代心肌细胞的活力、促进H9C2细胞凋亡及抑制氧化应激,可能与靶向SIRT1有关,将为miR-155靶向治疗心脏病提供依据。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 细胞分离培养
  •     1.2.2 建立H/R H9C2细胞模型
  •     1.2.3 细胞转染
  •     1.2.4 RT-qPCR实验
  •     1.2.5 噻唑蓝(MTT)实验
  •     1.2.6 Western印迹实验
  •     1.2.7 Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡
  •     1.2.8 酶联免疫吸附试验(ELISA)
  •     1.2.9 双荧光素酶报告基因实验
  •   1.3 统计学分析
  • 2 结 果
  •   2.1 miR-155在H/R H9C2细胞中高表达
  •   2.2 敲减miR-155表达促进H/R H9C2细胞的活力,抑制凋亡
  •   2.3 敲减miR-155表达对H/R H9C2细胞中氧化应激指标的影响
  •   2.4 miR-155靶向调控SIRT1
  •   2.5 敲减SIRT1表达对大鼠原代心肌细胞活力及H/R H9C2细胞凋亡的影响
  •   2.6 敲减SIRT1对H/R H9C2细胞氧化应激的影响
  • 3 讨 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李世勋,周凡,王岩

    关键词: 组蛋白去乙酰化酶,缺氧,复氧,心肌细胞,细胞活力,凋亡,氧化

    来源: 中国老年学杂志 2019年24期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 心血管系统疾病

    单位: 新乡市中心医院心血管内科

    分类号: R542.21

    页码: 6084-6090

    总页数: 7

    文件大小: 946K

    下载量: 206

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