狐源肺炎大肠杆菌秦皇岛地区分离株毒力与耐药性检测

论文摘要

为了研究河北省秦皇岛地区狐大肠杆菌肺炎的流行情况,以及本地区大肠杆菌的耐药趋势,本试验采用实验室常规方法分离细菌,并通过玻片凝集、PCR技术及药敏试验对本地区血清型、毒力基因及耐谱和耐药基因进行检测,为本地区大肠杆菌肺炎的流行和致病菌临床治疗用药提供数据支撑。研究内容以及结果如下:1.病料采集及细菌鉴定:在河北秦皇岛地区各养殖场中采集病死狐的肺脏、肝脏和鼻拭子等共450份,通过鉴别培养、生化鉴定、16SrRNA序列分析等方法进行鉴定,分离出105株肺炎大肠杆菌,致病性试验结果显示,其中77株具有致病性。2.毒力基因及血清型检测:对分离的致病菌株进行毒力基因和血清型检测。检测19种毒力基因,分离菌株携带14种不同毒力基因,其中irp2检出率高达98.7%,fyuA、papC、fimC、iucDa、colv检出率也较高,在50.6%～85.7%之间,携带率较低的在1.3%～5.2%之间。其余未检出。检测出分离菌株携带9种血清型,O1、O8、O78、O12四种血清型是本地区的优势血清型。3.耐药表型检测:采用K-B药敏纸片法,用23种抗生素对分离的致病性菌株进行药敏试验,结果77株全部出现耐药现象。其中对SMZ耐药率100%,对P、AM、OT等9种药物耐药率很高,均达到95%以上,对DOX、FFC、STR的耐药率在72%～88%之间,对ENR、AMK、CIP等耐药情况在42%～70%之间,耐药率较低的也达到30%以上。所有菌株均有交叉耐药现象,耐药谱型高达23种,交叉耐药现象严重。4.耐药基因检测:通过PCR方法对分离菌株进行耐药基因检测,结果共检测出携带18种耐药基因,结果表明分离菌株以携带氟喹诺酮类药物耐药基因parE、parC、gyrB、gyrA几种耐药基因为主,占氟喹诺酮类药物耐药菌株的92%以上,其次oqxA、oqxB基因,也占到此类药物耐药菌株的比例分别是62.3%和66%,少数菌株携带qepA基因7.5%和qnrS基因1.9%,而且部分菌株同时携带多种类型耐药基因。本地区大肠杆菌耐药基因携带情况很严重。

论文目录

• 缩略词
• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
•   1.1 大肠杆菌病的研究进展
•   1.2 大肠杆菌的生物学特性
•     1.2.1 形态特征
•     1.2.2 培养特性
•     1.2.3 生化特性
•   1.3 大肠杆菌的致病机制
•     1.3.1 内毒素致病
•     1.3.2 外毒素致病
•     1.3.3 黏附素致病
•     1.3.4 外膜蛋白（OMPs）致病
•     1.3.5 大肠杆菌血清型致病
•   1.4 大肠杆菌的耐药性及耐药机制
•     1.4.1 生物化学机制
•     1.4.2 遗传机制
•   1.5 大肠杆菌对不同药物的耐药机制
•     1.5.1 氟喹诺酮类耐药机制
•     1.5.2 β-内酰胺类耐药机制
•     1.5.3 四环素类耐药机制
•     1.5.4 磺胺类耐药机制
•     1.5.5 氨基糖苷类耐药机制
•   1.6 研究意义
• 第二章 狐源肺炎E.coli的分离培养、鉴定
•   2.1 试验材料
•     2.1.1 主要试剂、材料及仪器设备
•     2.1.2 主要培养基
•   2.2 试验方法
•     2.2.1 病料来源
•     2.2.2 细菌分离培养
•     2.2.3 大肠杆菌（E.coli）形态观察
•     2.2.4 细菌的鉴定
•     2.2.5 菌株冻存
•   2.3 结果
•     2.3.1 细菌分离培养及镜检结果
•     2.3.2 细菌生化鉴定结果
•     2.3.3 16SrRNA鉴定结果
•   2.4 讨论
•   2.5 小结
• 第三章 狐源肺炎E.coli致病性试验、毒力基因及血清型检测
•   3.1 试验材料
•     3.1.1 主要菌株
•     3.1.2 试验动物
•     3.1.3 主要试剂及仪器
•   3.2 试验方法
•     3.2.1 细菌活化
•     3.2.2 分离菌株的致病性试验
•     3.2.3 致病性大肠杆菌血清型检测
•     3.2.4 致病性大肠杆菌毒力基因检测
•     3.2.5 大肠杆菌动物回归试验
•   3.3 结果
•     3.3.1 分离菌株的致病性
•     3.3.2 分离菌株的血清型
•     3.3.3 毒力基因检测结果
•     3.3.4 动物回归试验结果
•   3.4 分离菌株毒力基因与血清型相关性分析
•   3.5 讨论
•   3.6 小结
• 第四章 狐源肺炎E.coli耐药表型及耐药性分析
•   4.1 试验材料
•     4.1.1 菌株来源
•     4.1.2 主要培养基及试剂
•     4.1.3 主要耗材及仪器
•   4.2 试验方法
•     4.2.1 细菌复苏
•     4.2.2 菌液制备
•     4.2.3 药敏试验及判定标准
•     4.2.4 判定标准
•   4.3 药敏试验结果
•     4.3.1 分离菌株的耐药性
•     4.3.2 分离菌株的多重耐药分析
•   4.4 讨论
•   4.5 小结
• 第五章 狐源肺炎E.coli耐药基因检测及分析
•   5.1 试验材料
•     5.1.1 菌株DNA模板制备
•     5.1.2 主要试剂
•     5.1.3 主要仪器设备
•   5.2 试验方法
•     5.2.1 DNA模板
•     5.2.2 细菌抗性基因检测
•   5.3 分离菌株抗菌药物抗性基因检测结果
•     5.3.1 四环素类药物抗性基因检测
•     5.3.2 氟喹诺酮类药物抗性基因检测
•     5.3.3 β-内酰胺类抗生素抗性基因检测
•     5.3.4 氨基糖苷类抗生素抗性基因检测
•     5.3.5 磺胺类抗生素抗性基因检测
•     5.3.6 大环内酯类抗生素抗性因检测
•   5.4 耐药性与耐药基因相关性分析
•   5.5 讨论
•   5.6 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 李巧玲

导师: 贾青辉,王夕国

关键词: 肺炎大肠杆菌,毒力基因,耐药性,耐药基因

来源: 河北科技师范学院

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河北科技师范学院

分类号: S852.61

总页数: 74

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