牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿AP1-AP2-BP基因亚单位抗体的制备

论文摘要

目的构建牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a亚单位重组抗原AP1-AP2-BP,并制备其多亚单位抗体,为后期研制新型免疫疫苗和检测试剂提供实验基础。方法利用延伸PCR技术构建了AP1-AP2-BP三联基因,并将该串联基因进行转化,诱导,表达,纯化,并将纯化蛋白制作为抗原,对家兔免疫,制备多亚单位抗体,并通过亲和层析的方式从免疫后的血清中获得纯化的IgG,完成多亚单位抗体的制备。结果 AP1-AP2-BP三基因串联重组工程菌株通过诱导、表达,对产物亲和层析等方法获得的纯化蛋白,其相对分子质量为65 kDa,其含量达到3.3 mg/mL,并具有较好的免疫原性。经间接ELISA可知,经过4周的免疫抗体的滴度已达到1∶5 600的水平。通过Protein A280测量数据表明,纯化后的IgG的含量高达9.1 mg/mL。结论牛乳腺炎无乳链球菌的菌毛岛屿AP1-AP2-BP三基因串联重组工程菌经诱导、表达后获得的纯化蛋白AP1-AP2-BP多亚单位抗原有较好的免疫原性,为制备相应多亚单位抗体的制备提供了良好的多价抗原,同时为将研制新型工程疫苗及检测试剂提供了科学研究基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 重组质粒构建
•   1.2 主要试剂
•   1.3 实验动物
•   1.4 AP1-AP2-BP克隆基因的表达及样品处理
•   1.5 AP1-AP2-BP蛋白粗提取及纯化
•   1.6 家兔抗AP1-AP2-BP融合抗原的亚单位抗体制备
•   1.7 间接-ELISA检测亚单位抗体滴度
•   1.8 AP1-AP2-BP亚单位抗体的纯化
• 2 结 果
•   2.1 重组质粒诱导表达结果
•   2.2 IPTG诱导剂浓度的优化结果
•   2.3 诱导温度优化结果
•   2.4 抗原蛋白盐析处理硫酸铵质量浓度优化结果
•   2.5 AP1-AP2-BP重组蛋白悬浮缓冲液的优化结果
•   2.6 AP1-AP2-BP重组蛋白最优纯化结果
•   2.7 血清中抗体的滴度测定结果
•   2.8 抗体的制备
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王雪吟,布日额,陈金龙,王金良,吴金花,锡林高娃

关键词: 无乳链球菌,蛋白纯化,亚单位抗体

来源: 中国人兽共患病学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心,内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所,山东绿都生物科技有限公司,山东省滨州畜牧兽医研究院

基金: 国家自然科学基金项目(Nos.31560689,31760725),内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心开放课题(Nos.MDK2017016,MDK2017018),内蒙古科技厅社会发展领域计划项目(食品安全关键技术研究,2017),内蒙古自治区第七批“草原英才”人才工程产业创新团队建设项目(2017)联合资助~~

分类号: S852.61

页码: 206-211

总页数: 6

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