导读:本文包含了星形胶质细胞条件性培养液论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:星形胶质细胞,骨髓基质细胞,分化,脑源性神经营养因子
星形胶质细胞条件性培养液论文文献综述
闫荣,罗晓光,张尧,李宇凤,冯娟[1]（2013）在《星形胶质细胞条件培养液诱导骨髓基质细胞向神经元样细胞分化的神经营养机制探讨》一文中研究指出目的星形胶质细胞(AS)与Aβ1-40诱导凋亡的PC12细胞共育,观察其共育条件培养液诱导骨髓基质细胞(BMSCs)向神经元样细胞分化的影响,探讨神经营养素家族蛋白[包括脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经营养素3(NT-3)]是否参与了此过程。方法 PC12细胞分别经10μg/mL Aβ1-40诱导不同时间点(0 h、4 h、6 h、12 h、24 h)后分为两部分,一部分应用流式细胞技术检测不同时间点PC12细胞凋亡率;另一部分与星形胶质细胞共育2 d,收集各组条件培养液;各组条件培养液分为两部分,一部分应用ELASA法检测各组细胞条件培养液中的BDNF、NGF、NT-3蛋白含量;将另一部分各组细胞条件培养液对BMSCs进行诱导分化,免疫荧光检测BMSCs神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(nestin)蛋白表达和计数神经元样细胞分化比例。结果在Aβ1-40作用6 h时间点,PC12细胞凋亡率达高峰(P<0.05);与各组比较,与Aβ1-40诱导6 h后的PC12细胞共育2 d后的星形胶质细胞条件培养液中(即C3组)的BDNF蛋白总量明显增高(A=1.87±0.43),具有统计学意义(P<0.05),并且其诱导的BMSCs NSE(A=38.63±2.72)、nestin(A=43.53±5.63)表达和神经元样细胞分化比例(A=44.62±3.22)明显升高,与其他组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论星形胶质细胞与Aβ1-40诱导凋亡的PC12细胞共育后,星形胶质细胞共育条件培养液促进BMSCs向神经元样细胞分化,BDNF可能参与了这一过程。(本文来源于《中国医科大学学报》期刊2013年08期）
谭军[2]（2013）在《星形胶质细胞条件培养液对缺氧/复氧损伤神经元的保护作用及其机制探讨》一文中研究指出背景随着人们物质生活的改善，老年人口逐年增加，神经系统疾病的发病率逐年上升，其中脑血管疾病是现在神经内科最常见的一种疾病，它已成为我国致残和致死性疾病病因的第一位，而且呈逐年上升趋势，在脑血管疾病中缺血性卒中又占全部脑血管疾病的80%~85%。由于成年人中罹患缺血性卒中人数迅速增加，由此不仅降低了人们的生活质量，同时也给患者家庭和社会带来了巨大的负担，因此，寻找治疗缺血性卒中的新方法势在必行。目前，尚无一种对所有缺血性卒中有确切疗效的治疗方法。在短暂性脑缺血发作的研究过程中，发现了脑组织存在着缺血预处理；但是缺血预处理在临床中无法被复制，然而它又是目前发现的一种对缺血缺氧性脑病有确切疗效的治疗方法；学者们为了解决缺血对脑组织造成的严重损伤，提出使用药物进行预处理设想，利用药物代替或激发体内的内源性物质，如腺苷（adenosine，Ado）、缓激肽和一氧化氮（nitric oxide，NO）等的作用，而起到缺血预处理的效能，对中枢神经系统发挥保护作用。Ado及其受体在多种脏器缺血再灌注的损伤方面有重要的保护作用。一般情况下，30~300nmol/L是脑细胞外液Ado的正常水平，脑缺血缺氧等病理状态下Ado在细胞外液的水平可达到5~40umol/L，甚至可达正常的200多倍。通过此结论得出，内源性的神经保护因子的应激反应可能是通过急剧增加Ado水平实现的。星形胶质细胞（astrocyte，AS）主要存在于中枢神经系统中，它支持及对神经元起着营养作用。当星形胶质细胞激活后产生了数量大、种类多的神经递质，细胞因子（L-6），神经营养因子（BDNF）等；当机体遇到组织缺血等病理状态下时，AS会分泌大量的神经营养因子，如：脑源性BDNF、神经生长因子（NGF）、血管内皮生长因子（VEGF）及L-6等；这些BDNF大量地出现，能对受损的神经元起到一定的保护作用并能够加速病损神经元的功能恢复。大量的体外细胞培养实验已经证实了星形胶质细胞条件培养液（astrocyte-conditioned medium, ACM）中具有很多神经元需要的物质，起到对神经元的保护作用，出现这种共存的现象说明ACM确实存在着能够加快受损神经元功能的恢复及对受损神经元起到营养支持的作用。虽然星形胶质细胞对神经元的保护作用已被研究者认可，但其对神经元的保护作用机制依然不清，因为机制不清，也为我们进一步研究ACM对受损神经元的营养支持作用的机制提供了机遇。本实验利用培养原代细胞的方法及技术，从而得到星形胶质细胞、神经元，给予特殊处理及干预细胞从而建立模拟脑缺血再灌注损伤模型，如：ACM、ACMa及ACM+a等方法来预处理因缺血缺氧状态受到损伤的神经元；利用倒置显微镜观察镜星形胶质细胞及神经元的形态学变化，流式细胞术检测细胞凋亡结果，XTT法测定细胞活性，利用免疫细胞化学技术及免疫荧光技术分别测定神经元特异性稀醇化酶（neuron–specificenolase，NSE）强阳性细胞的表达量，各组神经元细胞中caspase-3蛋白表达及活性检测，应用Western blot分析各组神经元caspase-3的活性。从而了解经缺氧/复氧损伤的神经元在星形胶质细胞和Ado的作用下，对它们起到的修复、支持、保护的作用，从而揭示Ado在中枢神经系统受到损害后是发挥作用的途径以及特异的保护机制产生的机理，为Ado应用于临床治疗缺血缺氧性脑血管疾病提供理论支持。目的分析星形胶质细胞与Ado对缺氧/复氧神经元损伤的保护作用，Ado对神经系统的作用方法及特异的保护机制，并进一步探讨Ado预处理后ACM的对受损神经元的营养支持作用，从而为Ado应用在临床缺血缺氧性脑血管疾病的治疗上提供理论依据。材料与方法通过提取SD大鼠大脑皮层的星形胶质细胞、海马区以及大脑皮层的神经元在体外进行培养，进一步纯化后，经处理建立一种类似于脑缺血再灌注损伤的模型，并收集再灌注18h后的ACM和经Ado预处理的再灌注18h的ACMa（ACM+含100μmol/LAdo的DMEM液），然后用ACM、ACMa及ACM+a按1:5的浓度配制培养液，将缺氧/复氧的损伤神经元放置于配置好的培养液中进行培养；然后观察星形胶质细胞、神经元的形态学变化运用倒置显微镜，使用XTT法测法测定星形胶质细胞、神经元活性变化，使用免疫细胞化学技术和免疫荧光技术分别测定胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillaryacidic protein，GFAP）、NSE强阳性细胞的表达量，利用ELISA试剂盒进行星形胶质细胞乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）酶联免疫分析，运用流式细胞术检测细胞凋亡，按Promega公司的CaspACETM Assay System，Colorimetric试剂盒说明书进行各组神经元caspase-3活性测定，应用Western blot分析各组神经元caspase-3的活性。结果光镜观察：正常组：神经元折光性好，细胞胞体为椭圆形，生长状态良好，突触之间呈网状结构紧密联系在一起；模型组：神经元折光性变差，细胞的胞体增大且形态不规则，突触明显减少或消失；ACM组、ACM+a组及ACMa组细胞形态介于正常组和模拟组之间，从总体观察结果来说，神经元形态变化的排列顺序：ACMa组＞ACM+a组＞ACM组。流式细胞术检测细胞凋亡结果：与正常组相比，模型组、ACMa组、ACM+a组和ACM组细胞凋亡均显着增加；而ACMa组、ACM+a组和ACM组细胞凋亡显着低于模型组，ACMa组细胞凋亡显着低于ACM+a组和ACM组，ACM+a组和ACM组细胞凋亡无差异。通过XTT检测法检测细胞活性：模型组：神经元活性明显下降，吸光度OD值结果得出模型组较正常对照组明显降低。干预组：ACMa组、ACM+a组及ACM组神经元的活力较模型组均有所提高，根据吸光度OD值，其作用强度ACMa组＞ACM+a组＞ACM组。神经元表达NSE的测定：模型组：神经元表达NSE的能力明显降低，均较ACMa组、ACM+a组及ACM组神经元表达NSE的能力低；对细胞培养片染色后呈阳性的进行图像分析，结果得出：ACMa组＞ACM+a组＞ACM组。caspase-3的活性：ACMa组、ACM+a组及ACM组神经元caspase-3的活性均较模型组下降，其作用：ACMa＞ACM+a＞ACM。caspase-3活性测定结果显示：与模型组相比，ACMa组、ACM+a组和ACM组神经元细胞中Caspase-3活性均显着降低；而ACMa组Caspase-3活性低于ACM+a组和ACM组，ACM+a组和ACM组细胞凋亡结果无差异。结论1、通过检测细胞活性、检测受损神经元中NSE的表达量分析得出ACM对缺氧/复氧损伤的神经元起到保护及修复作用；2、通过检测凋亡神经元、受损伤神经元中caspase-3的活性变化得出ACM能抑制细胞凋亡；3、星形胶质细胞对脑缺血再灌注损伤组织起到保护作用，经腺苷预处理后它对受损神经元的支持、保护、修复作用增强。(本文来源于《郑州大学》期刊2013-03-01）
徐建可,栗延伟,韩新生,谭军[3]（2012）在《星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的影响》一文中研究指出目的分析星形胶质细胞(Ast)与腺苷对缺氧/复氧损伤神经元的保护作用,揭示腺苷对神经系统的保护机制。方法体外培养SD大鼠大脑皮层Ast和海马神经元及大脑皮层神经元,纯化后给予神经元缺氧/复氧处理,收集复氧18 h后的Ast条件培养液(ACM)和腺苷预处理的Ast条件培养液(ACMa),然后用ACM、ACMa及ACM+腺苷(ACM+含100μmol·L-1腺苷的DMEM液)以15的浓度培养缺氧损伤神经元;光镜观察神经元形态学变化,二甲氧唑黄比色法测定细胞活性。结果 ACMa组、ACM+腺苷组及ACM组的神经元缺氧损伤后的细胞形态较模型组得到明显改善,细胞活性较模型组也得到显着提高。不同条件培养液对缺氧/复氧后神经元活性的作用:ACMa>ACM+腺苷>ACM。结论 Ast条件培养液对缺氧/复氧损伤的神经元有重要的保护、修复作用,腺苷可通过Ast间接地保护和修复受损神经元。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2012年10期）
朱元,李澎涛,李卫红,贾静,盖聪[4]（2012）在《不同状态的大鼠星形胶质细胞条件培养液对脑微血管内皮细胞血脑屏障特征性酶的影响》一文中研究指出目的:探讨不同状态下大鼠星形胶质细胞(AS)条件培养液对脑微血管内皮细胞(BMEC)活性和血脑屏障特征性酶的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法:收集正常、激活、激活合并通络救脑注射液处理、损伤、损伤合并通络救脑注射液处理5种不同状态的星形胶质细胞条件培养液,分别作用于拟缺血损伤的脑微血管内皮细胞,采用MTT法检测细胞活性,微量酶标仪法和上机比色法检测碱性磷酸酶(AKP)、γ-谷氨酰胺转肽酶(γ-GT)的活性。结果:正常星形胶质细胞条件培养液能明显提高受损内皮细胞活性,诱导AKP、γ-GT活性增强,激活的星形胶质细胞条件培养液上述作用下降,而损伤后的星胶条件培养液对受损内皮细胞几乎无作用。通络救脑注射液作用于激活和损伤星形胶质细胞后,其条件培养液提高内皮细胞活性和AKP、γ-GT活性的作用显着增强。结论:正常AS的分泌产物对提高BMEC的活性和维持血脑屏障特性具有重要意义,AS受损后,该作用减弱或消失,通络救脑注射液可显着提高AS对受损BMEC活性和功能的保护作用,这可能是该药物发挥脑缺血性损伤后血脑屏障稳定作用的内在机制之一。(本文来源于《世界科学技术(中医药现代化)》期刊2012年02期）
徐建可[5]（2012）在《星形胶质细胞条件培养液对缺氧损伤神经元的影响》一文中研究指出目的分析星形胶质细胞与腺苷(adenosine, Ado)对缺氧/复氧神经元损伤的保护作用,探讨腺苷预处理后的星形胶质细胞条件培养液的营养性作用,从而揭示腺苷对神经系统的保护机制,为腺苷应用于临床治疗脑血管疾病奠定理论基础。方法体外培养SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞和海马神经元及大脑皮层神经元,纯化后建立模拟脑缺血再灌注损伤模型,收集再灌注18h的星形胶质细胞条件培养液(Astrocyte conditioned medium, ACM)和经腺苷预处理的再灌注18h的星形胶质细胞条件培养液(ACMa),然后用ACM、ACMa及ACM+a(ACM+含100μmol/L腺苷的DMEM液)以1：5的浓度培养缺氧/复氧损伤神经元；倒置显微镜下观察神经元形态学变化,XTT法测定神经元活性,利用免疫荧光技术和免疫细胞化学技术分别测定NSE、Bcl-2强阳性细胞的表达量。结果光镜观察：正常组神经元生长良好,形态规则,胞体椭圆,折光性好,突触连接紧密呈网状：模型组神经元胞体变大不规则,折光性差,突触明显减少或消失；ACMa组、ACM+a组及ACM组细胞状态介于两者之间,总体肉眼观察,其作用：ACMa>ACM+a>ACM。XTT法细胞活性检测：模型组神经元活力下降,OD值明显低于正常对照组。ACMa组、ACM+a组及ACM组细胞活力均高于模型组,根据OD值,其作用：ACMa>ACM+a>ACM。NSE、Bcl-2的测定：ACMa组、ACM+a组及ACM组神经元表达NSE和Bcl-2的能力均较模型组提高,对染色结果阳性的细胞培养片进行图像分析,其作用：ACMa> ACM+a>ACM。结论1、通过细胞活性检测及受损神经元NSE的表达量反映出ACM对缺氧/复氧损伤的神经元有重要的保护和修复作用：2、.通过受损神经元表达bcl-2的变化表明ACM具有抗凋亡作用；3、星形胶质细胞在脑缺血再灌注损伤中起着重要作用,腺苷可通过星形胶质细胞间接地保护和修复受损神经元。(本文来源于《新乡医学院》期刊2012-04-01）
桂韦[6]（2012）在《转化生长因子β-1及其作用后的星形胶质细胞条件培养液对神经元树突生长以及突触素1表达的影响》一文中研究指出目的研究不同浓度转化生长因子β-1（TGF-β1）以及TGF-β1作用后的星形胶质细胞条件培养液对体外培养的胎鼠小脑神经元树突生长及突触素1（Synapsin1）表达的影响，探讨脑损伤后促进神经功能恢复的机制及TGF-β1作用下星形胶质细胞条件培养液对神经元生长的调节作用。方法（1）取孕18天小鼠神经元细胞进行体外原代培养，在培养7d的小脑神经元中加入不同浓度的TGF-β1（1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml），并设正常对照组。作用48小时后，对培养的神经元细胞采用免疫细胞化学荧光标记：用结构性微管相关蛋白-2（microtubule associated protein-2, MAP2）标记树突，同时以突触素1（Synapsin1）抗体标记Synapsin1。用荧光显微镜直接观察细胞树突的长度变化；应用多功能酶标仪测量Synapsin1的荧光强度值。（2）取出生3d内的新生鼠，纯化培养小鼠星形胶质细胞，传代接种后采用SiRNA基因沉默技术，干扰Smad3基因的表达，RT-PCR验证沉默效果，将实验分5组，分别加入浓度为10ng·ml-1的TGF-β1以及Smad3-SiRNA-1，Smad3-SiRNA-2及Smad3-SiRNA-3，并设空白对照，培养2d后，制成星形胶质细胞条件培养液，-20℃冻存。把经过处理后的星形胶质细胞条件培养液加入到体外培养的原代神经元细胞作用48小时后，对培养的神经元细胞采用免疫细胞化学荧光标记：用结构性微管相关蛋白-2（microtubule associated protein-2, MAP2）标记树突，同时以突触素1（Synapsin1）抗体标记Synapsin1。用荧光显微镜直接观察细胞树突的长度变化；应用多功能酶标仪测量Synapsin1的荧光强度值。结果（1）在1ng/ml、5ng/ml及10ng/ml TGF-β1干预培养48h后，小脑神经元树突长度分别为106.2±5.5、164.3±7.49、218.3±13.5，与对照组（63.7±7.8）相比，明显增长（P <0.05）；TGF-β1也可促进Synapsin1的表达，在1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml TGF-β1干预培养的条件下，Synapsin1荧光强度值分别为21940.7±870.0、38450.0±559.1、46067.5±1303.5，较对照组（17608.3±1389.3）显着增强（P <0.01）。（2）TGF-β1作用后的星形胶质细胞培养液干预培养48小时后，TGF-β1作用的星形胶质细胞培养液干预培养48小时后，神经元树突长度为（66.75±5.94），与对照组（81.26±7.69）相比，明显减低，显示有统计学差异（P <0.05）。对突触素1表达的影响显示10ng/mlTGF-β1组（14992.73±1537.73），与对照组（17891.20±1034.44）相比，表达明显减弱，显示有统计学差异（P <0.05）。成功沉默Smad3基因后，Smad3-SiRNA-1组、Smad3-SiRNA-3组突起长度的测量平均值分别为：107.82±11.48、105.28±13.18，对照组81.26±7.69相比，明显增长，显示有统计学差异（P <0.05）。其对Synapsin1的荧光强度值的影响，Smad3-SiRNA-1组、Smad3-SiRNA-3组Synapsin1的荧光强度值分别为：27008.86±1720.05、28325.67±1547.93，与对照组(17891.20±1034.4)相比，表达明显增强。显示统计学意义（P<0.05）。结论（1）TGF-β1可通过促进小脑神经元树突生长以及Synapsin1表达的增多，促进神经功能的恢复；其促进效应总体趋势呈剂量依赖性特征。（2）TGF-β1作用的胶质细胞培养液抑制小脑神经元树突生长以及减少Synapsin1的表达。TGF-β1-Smad3信号转导系统参与此过程。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2012-03-01）
张华军,徐格林,刘新峰[7]（2010）在《嗅鞘细胞条件培养液和星形胶质细胞条件培养液对受损海马神经元保护作用的对比研究》一文中研究指出目的:观察嗅鞘细胞条件培养液(OECCM)和星形胶质细胞条件培养液(ACM)对受损海马神经元的保护作用。方法:分别采用2种胶质细胞条件培养液预处理受损海马神经元(谷氨酸诱导损伤),对比其对受损海马神经元活力、凋亡率和胞浆内游离钙离子浓度的影响。结果:与谷氨酸组相比,OECCM组神经元活力明显增高(P<0.01),ACM组神经元活力增高(P<0.05);与OECCM组相比,ACM组神经元活力降低(P<0.05)。与谷氨酸组相比,ACM组神经元凋亡率和胞内游离钙浓度降低(P<0.05),OECCM组明显降低(P<0.01);OECCM组神经元凋亡率和胞内游离钙浓度低于ACM组(P<0.05)。结论:OECCM和ACM均可明显提高受损海马神经元活力、降低凋亡率和胞浆内游离钙离子浓度,OECCM的保护作用优于ACM。(本文来源于《神经损伤与功能重建》期刊2010年05期）
唐卉凌,李澎涛,张玮,潘彦舒,王筠[8]（2010）在《脑微血管内皮细胞条件培养液对星形胶质细胞的影响及通络中药的干预特征》一文中研究指出目的:揭示脑微血管内皮细胞生理、病理及通络中药处理后不同状态的培养液对正常星形胶质细胞影响的特征,从细胞间相互作用角度探讨脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞的生物学关系,为阐释脑微环境稳定的血脑屏障维护机制以及通络中药通过内皮细胞调节脑内微环境理论假说提供新的证据。方法:制备正常、拟缺血和拟缺血合并通络救脑注射液处理的大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液,观察其对星形胶质细胞活性和凋亡率的影响。结果:与正常星形胶质细胞相比,正常内皮细胞条件培养液能够降低正常星形胶质细胞的活性,并促进星形胶质细胞的凋亡;而拟缺血处理的内皮细胞条件培养液能够提高正常星形胶质细胞的活性和凋亡率;拟缺血合并通络药物处理的内皮细胞条件培养液对正常星形胶质细胞的活性有提高作用,并显着降低其凋亡率。结论:叁种不同处理方式的内皮细胞条件培养液对正常星形胶质细胞活性和凋亡产生不同的影响,提示不同状态的微血管内皮细胞对脑内微环境产生影响,通络救脑注射液可能通过调节微血管内皮细胞的分泌而对星形胶质细胞发挥作用。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2010年05期）
唐卉凌,张玮,潘彦舒,侯金才,周莉[9]（2009）在《不同大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液对正常星形胶质细胞的影响》一文中研究指出目的探讨不同方式处理的大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液对正常星形胶质细胞的影响。方法制备正常和拟缺血大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液,观察其对正常星形胶质细胞活性和凋亡率的影响。结果正常内皮细胞条件培养液能够降低正常星形胶质细胞的活性,提高正常星形胶质细胞的凋亡率;拟缺血处理的内皮细胞条件培养液能够提高正常星形胶质细胞的活性和凋亡率。结论正常微血管内皮细胞条件培养液对星形胶质细胞的活性和细胞周期产生抑制作用,而拟缺血微血管内皮细胞条件培养液能够提高星形胶质细胞活性,并促进其凋亡。(本文来源于《络病学基础与临床研究（5）》期刊2009-11-30）
王立芹,赵久红,唐源远,季丽莉,王振宇[10]（2009）在《星形胶质细胞条件培养液促进新生大鼠海马神经干细胞分化》一文中研究指出目的探讨星形胶质细胞条件培养液(ACM)对神经干细胞(NSCs)体外分化的影响。方法行新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞的纯化培养后收集ACM,将新生大鼠海马NSCs单克隆培养后行nestin免疫细胞荧光染色,诱导分化5d后行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖脑苷脂(GALC)免疫细胞荧光染色;将单克隆培养的NSCs分为对照组和实验组,对照组为单纯NSCs培养液,实验组根据NSCs培养液与ACM比的不同分3组:A组(2:1),B组(1:1),C组(1:2)。各组培养1周,采用NSE免疫细胞荧光检测方法标记神经元并计数和统计学分析。结果纯化的星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白抗体标记阳性率为96.5%;单克隆培养的海马NSCs呈nestin阳性,诱导后呈NSE、GFAP和GALC阳性表达。ACM培养的海马NSCs各组分化为神经元的比例明显高于对照组(<0.01),其中A组的比例最高。结论ACM可以促进新生大鼠海马NSCs向神经元分化。(本文来源于《解剖科学进展》期刊2009年03期）
星形胶质细胞条件性培养液论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景随着人们物质生活的改善，老年人口逐年增加，神经系统疾病的发病率逐年上升，其中脑血管疾病是现在神经内科最常见的一种疾病，它已成为我国致残和致死性疾病病因的第一位，而且呈逐年上升趋势，在脑血管疾病中缺血性卒中又占全部脑血管疾病的80%~85%。由于成年人中罹患缺血性卒中人数迅速增加，由此不仅降低了人们的生活质量，同时也给患者家庭和社会带来了巨大的负担，因此，寻找治疗缺血性卒中的新方法势在必行。目前，尚无一种对所有缺血性卒中有确切疗效的治疗方法。在短暂性脑缺血发作的研究过程中，发现了脑组织存在着缺血预处理；但是缺血预处理在临床中无法被复制，然而它又是目前发现的一种对缺血缺氧性脑病有确切疗效的治疗方法；学者们为了解决缺血对脑组织造成的严重损伤，提出使用药物进行预处理设想，利用药物代替或激发体内的内源性物质，如腺苷（adenosine，Ado）、缓激肽和一氧化氮（nitric oxide，NO）等的作用，而起到缺血预处理的效能，对中枢神经系统发挥保护作用。Ado及其受体在多种脏器缺血再灌注的损伤方面有重要的保护作用。一般情况下，30~300nmol/L是脑细胞外液Ado的正常水平，脑缺血缺氧等病理状态下Ado在细胞外液的水平可达到5~40umol/L，甚至可达正常的200多倍。通过此结论得出，内源性的神经保护因子的应激反应可能是通过急剧增加Ado水平实现的。星形胶质细胞（astrocyte，AS）主要存在于中枢神经系统中，它支持及对神经元起着营养作用。当星形胶质细胞激活后产生了数量大、种类多的神经递质，细胞因子（L-6），神经营养因子（BDNF）等；当机体遇到组织缺血等病理状态下时，AS会分泌大量的神经营养因子，如：脑源性BDNF、神经生长因子（NGF）、血管内皮生长因子（VEGF）及L-6等；这些BDNF大量地出现，能对受损的神经元起到一定的保护作用并能够加速病损神经元的功能恢复。大量的体外细胞培养实验已经证实了星形胶质细胞条件培养液（astrocyte-conditioned medium, ACM）中具有很多神经元需要的物质，起到对神经元的保护作用，出现这种共存的现象说明ACM确实存在着能够加快受损神经元功能的恢复及对受损神经元起到营养支持的作用。虽然星形胶质细胞对神经元的保护作用已被研究者认可，但其对神经元的保护作用机制依然不清，因为机制不清，也为我们进一步研究ACM对受损神经元的营养支持作用的机制提供了机遇。本实验利用培养原代细胞的方法及技术，从而得到星形胶质细胞、神经元，给予特殊处理及干预细胞从而建立模拟脑缺血再灌注损伤模型，如：ACM、ACMa及ACM+a等方法来预处理因缺血缺氧状态受到损伤的神经元；利用倒置显微镜观察镜星形胶质细胞及神经元的形态学变化，流式细胞术检测细胞凋亡结果，XTT法测定细胞活性，利用免疫细胞化学技术及免疫荧光技术分别测定神经元特异性稀醇化酶（neuron–specificenolase，NSE）强阳性细胞的表达量，各组神经元细胞中caspase-3蛋白表达及活性检测，应用Western blot分析各组神经元caspase-3的活性。从而了解经缺氧/复氧损伤的神经元在星形胶质细胞和Ado的作用下，对它们起到的修复、支持、保护的作用，从而揭示Ado在中枢神经系统受到损害后是发挥作用的途径以及特异的保护机制产生的机理，为Ado应用于临床治疗缺血缺氧性脑血管疾病提供理论支持。目的分析星形胶质细胞与Ado对缺氧/复氧神经元损伤的保护作用，Ado对神经系统的作用方法及特异的保护机制，并进一步探讨Ado预处理后ACM的对受损神经元的营养支持作用，从而为Ado应用在临床缺血缺氧性脑血管疾病的治疗上提供理论依据。材料与方法通过提取SD大鼠大脑皮层的星形胶质细胞、海马区以及大脑皮层的神经元在体外进行培养，进一步纯化后，经处理建立一种类似于脑缺血再灌注损伤的模型，并收集再灌注18h后的ACM和经Ado预处理的再灌注18h的ACMa（ACM+含100μmol/LAdo的DMEM液），然后用ACM、ACMa及ACM+a按1:5的浓度配制培养液，将缺氧/复氧的损伤神经元放置于配置好的培养液中进行培养；然后观察星形胶质细胞、神经元的形态学变化运用倒置显微镜，使用XTT法测法测定星形胶质细胞、神经元活性变化，使用免疫细胞化学技术和免疫荧光技术分别测定胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillaryacidic protein，GFAP）、NSE强阳性细胞的表达量，利用ELISA试剂盒进行星形胶质细胞乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）酶联免疫分析，运用流式细胞术检测细胞凋亡，按Promega公司的CaspACETM Assay System，Colorimetric试剂盒说明书进行各组神经元caspase-3活性测定，应用Western blot分析各组神经元caspase-3的活性。结果光镜观察：正常组：神经元折光性好，细胞胞体为椭圆形，生长状态良好，突触之间呈网状结构紧密联系在一起；模型组：神经元折光性变差，细胞的胞体增大且形态不规则，突触明显减少或消失；ACM组、ACM+a组及ACMa组细胞形态介于正常组和模拟组之间，从总体观察结果来说，神经元形态变化的排列顺序：ACMa组＞ACM+a组＞ACM组。流式细胞术检测细胞凋亡结果：与正常组相比，模型组、ACMa组、ACM+a组和ACM组细胞凋亡均显着增加；而ACMa组、ACM+a组和ACM组细胞凋亡显着低于模型组，ACMa组细胞凋亡显着低于ACM+a组和ACM组，ACM+a组和ACM组细胞凋亡无差异。通过XTT检测法检测细胞活性：模型组：神经元活性明显下降，吸光度OD值结果得出模型组较正常对照组明显降低。干预组：ACMa组、ACM+a组及ACM组神经元的活力较模型组均有所提高，根据吸光度OD值，其作用强度ACMa组＞ACM+a组＞ACM组。神经元表达NSE的测定：模型组：神经元表达NSE的能力明显降低，均较ACMa组、ACM+a组及ACM组神经元表达NSE的能力低；对细胞培养片染色后呈阳性的进行图像分析，结果得出：ACMa组＞ACM+a组＞ACM组。caspase-3的活性：ACMa组、ACM+a组及ACM组神经元caspase-3的活性均较模型组下降，其作用：ACMa＞ACM+a＞ACM。caspase-3活性测定结果显示：与模型组相比，ACMa组、ACM+a组和ACM组神经元细胞中Caspase-3活性均显着降低；而ACMa组Caspase-3活性低于ACM+a组和ACM组，ACM+a组和ACM组细胞凋亡结果无差异。结论1、通过检测细胞活性、检测受损神经元中NSE的表达量分析得出ACM对缺氧/复氧损伤的神经元起到保护及修复作用；2、通过检测凋亡神经元、受损伤神经元中caspase-3的活性变化得出ACM能抑制细胞凋亡；3、星形胶质细胞对脑缺血再灌注损伤组织起到保护作用，经腺苷预处理后它对受损神经元的支持、保护、修复作用增强。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
星形胶质细胞条件性培养液论文参考文献
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