圆二色谱法分析金属离子对鲍鱼脯氨酰内肽酶的作用

论文摘要

使用原核表达系统表达了皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）脯氨酰内肽酶（prolyl endopeptidase,PEP）,并对其进行高度纯化。SDS-PAGE结果表明,该酶的相对分子质量约为85 ku,其二级结构主要由α-螺旋（28.3%）、反向平行结构（17.4%）、平行结构（8.70%）、β转角（19.0%）、无规卷曲（28.5%）组成。选取PEP特异性荧光底物Suc-Gly-Pro-MCA测定其活性,并选取了多种常见金属盐溶液对其进行抑制作用分析。结果发现,Al3+、Cu2+、 Zn2+、Ag+和Pb2+能够抑制PEP的活性。利用圆二色谱法,对金属离子作用下PEP的二级结构变化进行分析和计算。分析结果表明,不同金属离子对PEP的作用效果不同:Al3+、Cu2+和Zn2+在影响PEP结构时也影响其活性;Ca2+、Mg2+对PEP的结构和活性均不产生明显影响,而Ag+和Pb2+可在不影响PEP二级结构的前提下抑制其活性。

论文目录

• 0 引言
• 1 材料与方法
•   1.1 表达菌株
•   1.2 主要试剂
•   1.3 实验方法
•     1.3.1 Hdh-PEP的体外表达和纯化
•     1.3.2 Hdh-PEP的活性测定
•     1.3.3 金属离子对Hdh-PEP活性的抑制作用测定
•     1.3.4 Hdh-PEP的圆二色谱分析
•     1.3.5 金属离子对Hdh-PEP影响的圆二色谱分析
• 2 结果与分析
•   2.1 Hdh-PEP的表达与纯化
•   2.2 Hdh-PEP的二级结构与三级结构预测
•   2.3 不同金属离子对Hdh-PEP的抑制效果
•   2.4 Hdh-PEP的圆二色谱分析
•   2.5 金属离子对Hdh-PEP构型变化的圆二色谱分析
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李越,颜龙杰,翁凌,章骞,曹敏杰

关键词: 脯氨酰内肽酶,皱纹盘鲍,金属离子,圆二色谱,抑制剂

来源: 集美大学学报(自然科学版) 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑,农业科技

专业: 生物学,环境科学与资源利用,水产和渔业

单位: 集美大学食品与生物工程学院,水产品深加工技术国家地方联合工程研究中心

基金: 国家自然科学基金项目(31471640,31701676),农业部贝类产业技术体系项目(CARS-49),福建省科技计划项目(2017N5011)

分类号: X174;S917.4

DOI: 10.19715/j.jmuzr.2019.03.02

页码: 167-173

总页数: 7

文件大小: 2579K

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