季开萍1东晓辉2海岩3金华瑞3（1.兴安盟乌兰浩特市疾病预防控制中心内蒙古乌兰浩特市137400；2.兴安盟扎赉特旗疾病预防控制中心内蒙古乌兰浩特市137400；3.内蒙古疾病预防控制中心内蒙古乌兰浩特市137400）
【中图分类号】R378.7+2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）16-0250-02
炭疽是由炭疽芽孢杆菌引起的一种人畜共患的急性传染病[1]。人类炭疽主要是由于接触病、死畜或其皮毛而受感染。本病的主要传染源是患畜，当患畜处于菌血症时，可通过粪便、尿、唾液及天然孔出血等方式排菌，如尸体处理不当，造成大量菌散播周围环境污染土壤、水源或牧场，尤其形成芽孢后可能成为长久的疫源地[2]。最常见的类型是皮肤型，通过受伤的皮肤和破损的粘膜感染。本病常呈地方性流行，干旱、多雨、洪水涝积都是促进炭疽爆发的因素。炭疽的发生也是不规律的，两次发生之间可能相隔很多年。2011年8～9月兴安盟扎赉特旗疑似皮肤炭疽病例数明显高于往年,共报告17例，以噬菌体裂解和青霉素敏感实验进行分离鉴定。
1炭疽杆菌的分离鉴定
1.1材料与试剂
1.1.1材料
兴安盟扎赉特旗疾控中心共采集血液样本17份，渗出物样本17份。
1.1.2试剂
营养肉汤（批号090710北京陆桥技术有限公司），营养琼脂（批号20100828北京奥博星生物技术有限公司），炭疽菌诊断用噬菌体（批号20110401兰州生物制品研究所），革兰氏染液（批号080420北京陆桥技术有限责任公司），青霉素纸片（批号1104271北京天坛药物生物技术开发公司）。
1.2实验方法
1.2.1样本的采集
依据《WS283-2008炭疽诊断标准》无菌方法采集疑似炭疽病人血液、皮肤渗出物。血液样本用5ml真空采血管采集，现场对皮肤渗出物进行压片并同时无菌棉签采集皮肤渗出物放入无菌50ml离心管中带回实验室。
1.2.2显微镜检查
依据《WS283-2008炭疽诊断标准》皮肤渗出物压片进行革兰染色，血液样本带回实验室后涂片染色同时分离血清保存，待样本片干后置显微镜下观察细菌形态。
1.2.3炭疽杆菌的分离鉴定
皮肤渗出液及血液样本直接划线接种普通营养琼脂平板37℃培养，同时将样本在肉汤培养基中增菌培养。
病原鉴定：挑取灰白色不透明中等大小，不规律呈卷发状，表面毛玻璃样的可疑菌落划线接种于普通营养琼脂平板之上进行纯培养24h后挑取菌落密集划线2个普通营养琼脂平板，在划线区内滴加诊断用炭疽芽孢杆菌噬菌体和贴青霉素药敏纸片37℃孵育过夜或24h后能够见到明显的噬菌体裂解的噬斑和青霉素抑菌环，即鉴定为炭疽芽孢杆菌。
2兴安盟扎赉特旗8～9月人间炭疽情况
自2011年8月以来，兴安盟扎赉特旗疑似皮肤炭疽病例数明显高于往年。从2011年8月20日～9月23日，扎赉特旗共报告皮肤炭疽病例17例，无死亡病例。其中，疑似皮肤炭疽13例，临床诊断皮肤炭疽3例，实验室确诊皮肤炭疽4例。病例以8月25日至9月7日报告居多。具体病例报告情况见图1。
2011年8～9月炭疽病例覆盖兴安盟扎赉特旗6个乡（镇、苏木）9个村（屯、嘎查）,病例数报告如下：巴彦乌兰6例、胡尔勒3例、阿尔本格勒1例、罕达罕4例、绰勒1例和努文木仁2例，共17例。从人群分布来看男性(15/17)占绝大部分，主要以青壮年为主，占总病例数的82.35%。30～50岁年龄组人群发病14例，20-30岁年龄组人群发病2例，50岁以上人群发病1例。全部为农民。
3结果
3.1涂片染色结果
对皮肤渗出物直接压片17份和血液样本涂片17份进行革兰染色。在3份皮肤渗出物样本镜下直接观察到单个或偶有呈短链存在的革兰染色阳性、两端平整的大杆菌。血液样本涂片17份全部未观察到革兰染色阳性、两端平整的大杆菌。
3.2分离鉴定结果
经培养17份血液样本均未长菌，17份病人皮肤渗出物均长出菌，挑取可疑菌落进行噬菌体裂解试验和青霉素敏感试验，结果鉴定出4株炭疽芽孢杆菌。
4讨论
扎赉特旗位于兴安盟东北部，大兴安岭向松嫩平原过渡地带，嫩江右岸。总面积11155平方公里，全旗总人口40万。当地居民以种地、养殖牛羊为主要经济来源。虽然兴安盟扎赉特旗是炭疽自然疫源地，2004～2010年扎赉特旗炭疽病例报告情况来看，每年发病率最高为3/40万，但2011年8～9月报告病例明显增多，达到17/40万，这可能与7月1日到8月6日兴安盟地区连降大到暴雨有关，大雨导致深埋地下的炭疽芽孢随着雨水的冲刷污染草场、污染居民的生活环境，牛羊因食入了污染炭疽芽孢的牧草而发病，继而人接触病畜，死畜而发生人间炭疽。
流调资料显示，2011年8～9月报告的17疑似皮肤炭疽病例全部为宰杀、加工病畜后发病。主要原因是由于农牧民防护意识淡薄,防病知识缺乏,人群无免疫力,所有患者都未接种过炭疽菌苗。由于多数农牧民家庭经济较困难，对于病畜或病死畜通常以食用或低价卖给小贩的方式处理，致使炭疽病疫情不报或少报现象非常严重。近年来人员流动和畜产品跨地区交易的增加,使疫区有逐年扩大的趋势，极大地增加了农牧民的暴露机会，也给疫区的扩大创造了有利的条件。
根据《WS283-2008炭疽诊断标准》要求，对17例疑似皮肤炭疽病人皮肤渗出物和血液样本涂片和病原分离鉴定结果显示，3例疑似皮肤炭疽病人皮肤渗出物样本镜下直接观察到单个或偶有呈短链存在的革兰染色阳性、两端平整的大杆菌，也就是该3例病人为临床诊断病例，经培养该3例样本直接分离出炭疽杆菌，此外还有1例疑似皮肤炭疽病人皮肤渗出物经增菌培养后分离到炭疽杆菌，共4株炭疽芽孢杆菌，因此，共4例实验室诊断病例。17份血液样本均未长菌。大多数病例使用过抗生素3天以上，患者由于使用抗生素多日，样本不能及时采集，导致大多数病人样本中未分离到炭疽杆菌。在实验室诊断病例中一例病人发病6天后，在未用抗生素的情况下，皮肤渗出物经肉汤增菌后分离获得，另外3例临床诊断病例均是发病3天后，在口服一次的头孢类抗生素的情况下，皮肤渗出物直接分离培养获得。本次试验结果证明，服用抗生素多次，尤其是服用青霉素的患者样本中分离不到炭疽杆菌。农牧民感染炭疽后自己不予重视，再加上临床医生对炭疽的认识不足，既耽误了有效的治疗也延误了最佳采样时期，给诊断治疗带来一定的难度。
总之，政府部门协调卫生、畜牧等相关部门，责任落实到位，早发现、早报告、早隔离、早诊断、早治疗，做到控制传染源；增强农牧民自我防护意识，了解炭疽知识，对死因不明的家畜,严禁剥皮食肉以切断传播途径；加强对疫区牧民、屠宰员、兽医和皮毛等加工人员以及在牧区接触牲畜的其他有关人员预防接种人用炭疽疫苗保护易感人群对控制该病,防止爆发流行是至关重要的。
参考文献
[1]马晓冬,马文丽,郑文岭.炭疽芽胞杆菌及炭疽疾病概述[J].微生物学免疫学进展,2003,31(3):51-54.
[2]梁旭东.炭疽防治手册[M].北京:中国农业出版社,1995.