牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法的建立

论文摘要

为研究快速定量检测牛血清中口蹄疫病毒非结构蛋白抗体的方法,试验通过优化抗原表达条件等步骤,在大肠杆菌原核表达系统中表达可溶性的3A-3B融合蛋白,并基于纯化的可溶性融合蛋白建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒。结果表明:建立的方法能够检测牛血清中的口蹄疫病毒非结构蛋白抗体,敏感性高,特异性强,对其他相关的牛类病原无交叉反应,其组内与组间变异系数分别低于10%和15%,具有良好的重复性。对300份临床牛血清样品进行检测,同Procheck公司的口蹄疫非结构蛋白抗体试剂盒进行比较,阳性样品符合率96%,阴性样品符合率93.3%,总的符合率95.7%。重复性试验组内与组间变异系数均小于10%。文章首次建立了口蹄疫病毒非结构蛋白抗体时间分辨荧光免疫分析检测方法,同传统的ELISA方法相比,该检测方法特异性相当、敏感性更高,操作更简单、快速,具有较高的应用推广价值。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 目的基因片段的获得
•     1.2.2 目的基因扩增与融合
•     1.2.3 重组蛋白可溶性诱导表达条件的建立
•     1.2.4 重组蛋白3A-3B的表达与纯化
•       1.2.4. 1 树脂的预处理
•       1.2.4. 2 挂柱
•       1.2.4. 3 重组蛋白的洗杂和洗脱
•       1.2.4. 4 蛋白的收获
•     1.2.5 纯化后蛋白的抗原性分析 （Dot-ElISA） 检测
•     1.2.6 铕标记抗体结合物的制备
•       1.2.6. 1 兔抗牛二抗的预处理
•       1.2.6. 2 兔抗牛二抗的标记
•       1.2.6. 3 铕标记兔抗牛二抗的纯化
•       1.2.6. 4 铕标稀释液的配制
•       1.2.6. 5 铕标结合物的配制
•       1.2.6. 6 标记物的保存
•     1.2.7 3A-3B抗原的包被和封闭
•     1.2.8 铕标记兔抗牛二抗最适工作浓度的确定
•     1.2.9 样品稀释度的确定
•     1.2.10抗原最佳反应时间选择
•     1.2.1 1 阴阳性临界值的确定
•     1.2.1 2 特异性试验
•     1.2.1 3 敏感性试验
•     1.2.1 4 重复性试验
•     1.2.1 5 符合性试验
• 2 结果与分析
•   2.1 SDS-PAGE分析结果
•   2.2 纯化后蛋白的抗原性分析 （Dot-ElISA） 检测结果
•   2.3 3A-3B抗原最佳包被浓度与铕标二抗最佳稀释浓度的选择
•   2.4 样品稀释度
•   2.5 待检抗体反应时间选择
•   2.6 铕标二抗反应时间选择
•   2.7 时间分辨荧光免疫分析检测方法阴阳性临界值确定
•   2.8 特异性试验
•   2.9 敏感性试验
•   2.1 0 重复性试验
•   2.1 1 符合性试验
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王旭,孙雨,王睿男,肖颖,蒋菲,毕一鸣,李硕,杨林,董虹,宋晓晖,王传彬

关键词: 牛血清,口蹄疫病毒,非结构蛋白,可溶性表达与纯化,时间分辨荧光免疫分析

来源: 中国草食动物科学 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 北京农学院,中国动物疫病预防控制中心,重庆动物疫病预防控制中心

基金: 人才培养质量建设-高水平人才交叉培养-实培计划(市级)项目(PXM2019_014207_000035),十三五种畜场口蹄疫净化标准研究(2016YFD0501504),现代农业人才支撑计划(2130106-024)

分类号: S852.65

页码: 33-39

总页数: 7

文件大小: 638K

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