利用CRISPR/Cas9构建斑马鱼tbx20基因突变体及其功能分析

论文摘要

转录因子TBX20在脊椎动物心脏的腔室发育和维护中起至关重要的作用。利用CRISPR/Cas9系统成功制备了斑马鱼tbx20突变鱼系,T7E1检测结果显示F0敲除效率平均为42. 1%,测序分析F1中突变种质遗传效率为36. 7%。F2突变体中观察到心脏突变表型:48 hpf,心包腔肿大,静脉窦瘀血,环化异常,心脏结构变形; 3 dpf,心脏畸形拉伸成线状结构。原位杂交和qRT-PCR结果显示,突变体中vmhc表达上调,amhc和myl7表达下调。成功制备了斑马鱼tbx20突变体,结果表明tbx20纯合突变体心脏畸形,环化受到影响,为深入探究tbx20在早期心脏腔室分化过程中的作用奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株和质粒
•   1.2 斑马鱼的来源与养殖条件
•   1.3 gRNA靶点设计
•   1.4 Cas9 mRNA及gRNA制备
•   1.5 显微注射
•   1.6 T7E1酶切检测
•   1.7 qRT-PCR检测tbx20突变体中下游基因的表达
•   1.8 地高辛标记RNA探针进行斑马鱼整体原位杂交
• 2 结果与分析
•   2.1 利用CRISPR/Cas9成功构建斑马鱼tbx20基因突变体
•   2.2 斑马鱼tbx20突变导致心脏发育异常
•   2.3 tbx20影响心脏腔室结构的分化
•   2.4 tbx20调控vmhc、amhc和myl7的表达
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 朱哲,胡沛男,李伟明,祖尧

关键词: 斑马鱼,心脏发育,腔室分化

来源: 上海海洋大学学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 上海海洋大学科技部海洋生物科学国际联合研究中心,上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心

基金: 国家自然科学基金(31501166),上海市教育委员会晨光计划项目(14CG49)

分类号: Q78

页码: 1-9

总页数: 9

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