耐甲氧西林伪中间型葡萄球菌的分离鉴定及其生物被膜形成能力的检测

论文摘要

为了对从临床患病犬皮肤采集的样品进行分离菌鉴定,并了解犬源伪中间型葡萄球菌(Staphylococcus pseudintermedius)的生物被膜形成能力,试验对采集的临床患犬的皮肤样品通过染色镜检、触酶试验、血浆凝固酶试验、耐热核酸酶试验进行鉴定,并对分离菌进行药敏试验,对16S rRNA基因、凝固酶(Coagulase)基因、MecA基因及生物被膜主要基因(ica、sarA)进行PCR扩增,同时对Coagulase、MecA基因的PCR扩增产物测序并进行BLAST比对分析。结晶紫染色定量法检测分离菌的生物被膜形成能力,扫描电镜(SEM)观察生物被膜的形态结构。结果表明:染色镜检、触酶试验、血浆凝固酶试验初步确定分离菌为葡萄球菌,耐热核酸酶试验初步确定为伪中间型葡萄球菌。分离菌对红霉素、头孢哌酮、哌拉西林等抗菌药物表现为中介或耐药,对多西环素、四环素、米诺环素等敏感。16S rRNA基因、Coagulase基因、MecA基因及生物被膜主要基因(ica、sarA)PCR扩增结果均为阳性,16S rRNA基因、MecA基因扩增产物测序结果表明,分离菌为耐甲氧西林伪中间型葡萄球菌。结晶紫染色定量法检测结果表明,该分离菌可形成中等黏附。电镜检测可见菌体呈球形,菌体聚集成簇,细菌间有黏液样物质,且菌体表面被大量丝状黏性物质包裹,即菌体分泌的大量胞外物质。说明本试验分离得到耐甲氧西林伪中间型葡萄球菌,该分离菌具有生物被膜形成能力。

论文目录

• 1 材料
•   1.1 病料来源
•   1.2 主要试剂
•   1.3 药敏纸片
•   1.4 主要仪器
• 2 方法
•   2.1 细菌的分离培养
•   2.2 革兰氏染色镜检
•   2.3 触酶试验
•   2.4 血浆凝固酶试验
•   2.5 耐热核酸酶试验
•   2.6 药敏试验
•   2.7 16S rRNA基因的PCR鉴定及测序
•     2.7.1 PCR样品的制备
•     2.7.2 PCR扩增
•     2.7.3 测序及比对分析
•   2.8 特异性基因的PCR鉴定及测序
•   2.9 生物被膜形成能力的结晶紫染色法检测
•   2.10 生物被膜的扫描电镜（SEM）观察
• 3 结果与分析
•   3.1 细菌的分离培养
•   3.2 革兰染色镜检
•   3.3 触酶试验
•   3.4 血浆凝固酶试验
•   3.5 耐热核酸酶试验
•   3.6 药敏试验
•   3.7 16S rRNA及特异性基因的PCR检测
•   3.8 序列测定与分析
•   3.9 生物被膜半定量的检测
•   3.10 生物被膜扫描电镜的检查
• 4 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张欣,姜轩,付超,赵瑞利,马吉飞,潘晨浩,胡烨,丁巧玲,葛秀国

关键词: 生物被膜,凝固酶,耐药基因,分离鉴定

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年24期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 天津农学院动物科学与动物医学学院,天津农学院附属动物医院

基金: 天津市应用基础与前沿技术研究计划一般项目(14JCYBJC30000,18JCYBJC30100),天津市高校“中青年骨干创新人才”培养计划项目,天津市“131”创新型人才培养计划项目,天津市生猪产业技术体系创新团队猪细菌病岗位项目(ITTPRS2017004)

分类号: S852.611

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.04.0019

页码: 87-92+177

总页数: 7

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