重组人骨靶向干扰素γ-1b在大肠杆菌中的表达

论文摘要

目的建立人骨靶向干扰素γ-1b的高效原核表达体系。方法从Drug Bank数据库下载人干扰素γ-1b氨基酸序列,在羧基端加上10个天冬氨酸标签作为骨靶向分子。采用大肠杆菌偏爱密码子,DNA Star软件分析获得骨靶向性干扰素γ-1b的基因序列。人工合成基因序列并克隆入pET3c质粒表达载体。将上述pET3c-rhIFNγ-1b-D10重组表达载体转入大肠杆菌BL21,筛选高效表达菌株。分离包涵体,8mol/L尿素溶解,利用镍柱亲和层析纯化重组蛋白。Western blot检测目的蛋白的特异性表达。结果测序结果显示所克隆的骨靶向rhIFNγ-1b基因序列正确,筛选出高效表达菌株。经SDS-PAGE显示在相对分子质量19KD处出现特异的目的蛋白表达带,表达量约占全菌蛋白的30%。表达产物以包涵体形式存在,8mol/L尿素变性后经镍柱亲和层析纯化,纯度大于90%,浓度为0.8mg/mL。Western检测显示在19KD处出现特异性目的条带。结论成功在大肠杆菌中表达了人骨靶向干扰素γ-1b,为研究其生物学活性及用于骨硬化症的治疗奠定基础。

论文目录

• 1--材料与方法
•   1.1 大肠杆菌DH5α、BL21、质粒pET3c由本室保存。
•   1.2 rhIFNγ-1b-D10重组表达载体的构建
•   1.3 骨靶向重组人干扰素γ-1b （rhIFNγ-1b-D10） 在大肠杆菌中的表达
•   1.4 目的蛋白的Western blot检测
•   1.5 目的蛋白表达形式分析
•   1.6 目的蛋白的镍柱亲和层析纯化
• 2--结---果
•   2.1 骨靶向重组人干扰素γ-1b （rhIFNγ-1b-D10） 的表达与鉴定
•   2.2 rhIFNγ-1b-D10蛋白表达形式的确定
•   2.3 包涵体分离及纯化
• 3--讨---论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王志宇,曹广祥,付加芳,宗工理,李俊玲,王世立

关键词: 干扰素,骨靶向系统,原核表达,纯化,骨硬化症

来源: 罕少疾病杂志 2019年04期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 山东省医药生物技术研究中心山东第一医科大学(山东省医学科学院),国家卫生健康委生物技术药物重点实验室,山东省罕少见病重点实验室

基金: 山东省医药卫生科技发展计划项目2017WS074,山东省医学科学院院级科技计划面上项目2017-36

分类号: R346;Q78

页码: 50-52

总页数: 3

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