柑橘CitPG34的克隆、定位与表达分析

论文摘要

【目的】多聚半乳糖醛酸酶是一类参与细胞壁降解的水解酶,在植物生长发育和器官脱落过程中发挥着重要作用。本研究克隆柑橘CitPG34及其启动子（CitPG34-P）并进行表达分析,为深入研究柑橘PG在幼果脱落过程的生物功能奠定基础。【方法】以‘塔罗科’血橙（Citrus sinensis L. Osbeck）为材料,克隆CitPG34及其启动子,利用ProtParam、Cello、CLUSTALX、MEGA5.2、PlantCARE等软件对其蛋白特性及启动子顺式作用元件进行分析预测;利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析CitPG34在不同组织以及柑橘幼果脱落过程中的表达水平。采用同源重组的方法构建pCAMBIA1302-CitPG34-GFP融合蛋白表达载体和CitPG34启动子表达载体（CitPG34-P::gus）,分别用于亚细胞定位和启动子活性分析。【结果】从‘塔罗科’血橙幼果离层中克隆获得CitPG34,其ORF为1 194 bp,编码397个氨基酸,预测蛋白分子量为41.47 kD,理论等电点为5.19,其不稳定系数为30.23,表明CitPG34属于稳定蛋白;通过在线软件TMHMM分析发现:CitPG34为跨膜蛋白,具有一个跨膜结构,位于第7—29位氨基酸之间。在CitPG34二级结构中,α-螺旋结构约占15.37%,扩展链约占29.72%,无规则卷曲约占54.91%,与其三级结构预测基本一致。NJ树分析显示CitPG34与西洋梨PcPG3（BAF42034）亲缘关系最近,表明CitPG34可能与果实脱落和软化相关。qRT-PCR分析表明,CitPG34在花中表达量最高,在根、叶、离层A、离层C中表达量较低,在幼果中几乎不表达。1-氨基环丙烷羧酸（ACC）处理果梗后能显著提高离层A中CitPG34的表达水平,相反IAA抑制其转录。此外,在柑橘幼果正常脱落过程中,CitPG34表达明显升高。亚细胞定位发现,CitPG34主要位于细胞壁。克隆获取CitPG34起始密码子（ATG）前2 075 bp启动子序列（CitPG34-P）,PlantCare预测发现,在CitPG34-P序列上存在多种顺式调控元件,如核心启动元件TATA-box、增强子元件CAAT-box以及脱落酸响应元件ABRE等。将CitPG34-P::gus转入烟草,通过GUS组织化学染色发现,该启动子受乙烯诱导,主要在叶脉和毛状体中表达。【结论】CitPG34的ORF长度为1 194 bp,可编码397个氨基酸,其蛋白主要位于细胞壁;该基因具有明显的组织特异性,在花中表达最高;CitPG34表达量与柑橘幼果脱落显著相关。上述结果表明,CitPG34在柑橘幼果脱落和花发育过程中可能发挥着重要的生物功能。

论文目录

• 0 引言
• 1 材料与方法
•   1.1 试验材料
•     1.1.1 植物材料
•     1.1.2 试验主要试剂
•   1.2 材料处理
•   1.3 总RNA提取与c DNA合成
•   1.4 引物设计与合成
•   1.5 柑橘CitPG34的克隆
•   1.6 生物信息学分析
•   1.7 CitPG34启动子克隆
•   1.8 基因表达分析
•   1.9 亚细胞定位
•   1.1 0 CitPG34-P::gus表达载体的构建
•   1.1 1 烟草遗传转化
•   1.1 2 GUS组织化学染色
• 2 结果
•   2.1 CitPG34的克隆及生物信息学分析
•   2.2 CitPG34的表达分析
•   2.3 亚细胞定位
•   2.4 Cit PG34启动子的克隆与分析
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 葛廷,黄雪,谢让金

关键词: 柑橘,多聚半乳糖醛酸酶,基因表达,亚细胞定位,启动子,幼果脱落

来源: 中国农业科学 2019年19期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,园艺

单位: 西南大学柑桔研究所/中国农业科学院柑桔研究所

基金: 重庆市基础研究与前沿探索项目(cstc2018jcyjAX0564)

分类号: Q943.2;S666

页码: 3404-3416

总页数: 13

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