亲和淘选论文_邢锦城

导读:本文包含了亲和淘选论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:镰刀,噬菌体,亲和,论文,PCR,TAIL。

亲和淘选论文文献综述

邢锦城^[1]（2010）在《禾谷镰刀菌致病相关基因的鉴定及其毒素DON特异亲和肽段的淘选》一文中研究指出由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)引起的赤霉病((Fusarium Head Blight)是世界性流行病害,危害小麦、大麦、玉米的生产。该病害的流行不仅造成作物的严重减产、品质降低,而且导致受侵染籽粒中含有真菌毒素,危害食品安全和人畜健康。禾谷镰刀菌产生的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是单端孢霉烯族化合物中的一种,主要污染小麦、玉米等谷物及其制品。DON毒素对的谷物污染严重,在收割季节如雨量偏多则DON的污染更为严重。DON毒素不仅具有生殖毒性、免疫毒性和致动物呕吐等急性毒性,而且与人的癌症的诱发相关。本研究围绕禾谷镰刀菌展开,共分两部分,第一部分旨在鉴定同禾谷镰刀菌致病性相关的基因,进一步探明禾谷镰刀菌的致病机制；第二部分旨在通过淘选同毒禾谷镰刀菌素DON特异亲和的肽段,达到简化DON毒素检测方法的目的。本研究以突变体库中经初次鉴定为致病力变异菌株的10个突变体菌株和野生型菌株为材料,围绕致病相关基因的鉴定,首先通过人工接种方法在抗赤性不同的小麦品种中淘选出具有显着致病力变异的突变体菌株,进而利用绿色荧光蛋白标记比较致病力变异菌株同野生型菌株在致病进程上的差异,观察突变基因对菌株致病力的影响方式,最后利用TAIL-PCR技术鉴定出菌株中发生插入突变的基因。结果表明,突变菌株G12在叁个小麦品种中的致病力明显增强,且同初次鉴定结果相符。通过绿色荧光蛋白标记观察致病进程表明,突变体G12对穗轴的侵染更早,在穗轴中的荧光信号更强。TAIL-PCR对突变体插入位点侧翼序列进行扩增结果表明,突变体G12的转座子插入位点位于一个未知基因FGSG_04134.3的编码区内,蛋白结构域分析表明该蛋白含有一个C2H2型锌指结构,同源性分析表明,该基因编码的氨基酸序列同烟曲霉和稻瘟病菌的con7p转录因子同源性达53%。推测突变基因可能是同禾谷镰刀菌致病性相关的转录因子,并以负调控的方式影响致病相关基因的表达。该基因的具体功能有待进一步研究。为了建立针对DON毒素的更加简便的检测方法,本研究在制备DON人工抗原的基础上,从噬菌体随机七肽库中淘选DON的特异亲合肽段,并通过竞争性ELISA对淘选到的肽段加以验证。人工抗原合成结果表明：采用丁基硼酸封闭法制备的DON人工抗原的适合噬菌体的淘选要求,TLC检测表明人工抗原合成成功；亲和肽段淘选结果表明：经过四轮淘选,噬菌体出现富集现象,ELISA检测阳性克隆并测序,结果表明,淘选到得阳性噬菌体氨基酸序列为MAPGWVP.竞争性ELISA检测表明,该肽段同DON毒素分子具有特异亲和性,结合率随竞争的线性区间在0.01-0.1μg/ml。表明以该短肽替代常规ELISA检测中的DON免疫抗体,可以用于检测浓度范围为0.01-0.1μg/ml的DON样品,这种方法绕过制备免疫抗体的过程,使DON毒素的免疫检测过程大大简化。(本文来源于《南京农业大学》期刊2010-06-01）