导读:本文包含了基因枪轰击论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,小鼠,瘟病,疫苗,转基因,小麦,旱稻。
基因枪轰击论文文献综述
刘梅[1]（2014）在《基因枪轰击法介导抗逆基因LEA的旱稻转化》一文中研究指出众所周知，地球表面虽72%被水覆盖，淡水资源却仅占所有水资源的0.75%，其中又大部分以不能被直接利用的固体形式存在，不少地区仍存在饮水危机。农业为水资源消耗的一大巨头，在中国农业用水占总用水量的70%在不减少作物产量的情况下提高农作物的耐受性和抗逆性，对水资源问题的解决和全球粮食的供给有很大程度上的缓解。二十世纪七十年代转基因技术应运而生对物种种质资源的改良带来了福音。水稻是世界上主要的粮食作物之一，旱稻又称陆稻，水稻的变异类型，能适应生长于旱地坡地及干旱环境下，以上因素导致旱稻能节约大量的农业用水，从而降低生产成本进而提高经济效益，本课题选用“旱稻2号”为实验材料利用基因枪轰击法为主要转化方法转入LEA（late embryogenesis abundant proteins）家族的一员8704。课题主要研究了“旱稻2号”胚性愈伤的培养并对基因枪轰击法针对旱稻的转化条件进行了研究，通过实验获得了“旱稻2号”合适的表面消毒的方法，及培养基成分及适宜胚性愈伤诱导的最佳激素浓度，及基因枪轰击转化时转化效率高的金粉浓度和轰击参数。转化后通过浓度梯度实验得出适合“旱稻2号”筛选的最佳草甘膦浓度，及分化所需各激素浓度，移栽最适状态。通过提取转基因植株叶片DNA的提取，经分子水平检测得到阳性植株。(本文来源于《河北科技大学》期刊2014-05-01）
王鹤[2]（2013）在《基因枪轰击法和睾丸输出管注射法建立转基因小鼠的实验研究》一文中研究指出转基因动物在生命科学、医学和生物制药等领域有着广泛的研究和应用前景,因此科学家们一直在探索一种更简便易行、经济实用而又高效的转基因方法。为了探讨基因枪法和睾丸输出管注射法在建立转基因小鼠的可行性，我们分别进行了两个实验。实验一：基因枪轰击法在建立转基因小鼠上的实验研究。首先，挑选清洁级40日龄雄性KM小鼠20只，雌性KM小鼠60只。将需要导入的质粒eGFP-C1进行转化提取。然后准备基因枪设备，清洗发射管，清洁高压管道，准备消毒操作试剂、工具、设备。包覆DNA微弹，准备受体。最后准备金粉的清洗，DNA子弹的制作。子弹包装完成后，就开始准备基因枪轰击。我们先用基因枪轰击T293细胞,轰击后48小时观察，T293细胞出现绿色荧光，证明绿色荧光蛋白在T293细胞中表达，基因枪轰击细胞可行，可以进行下一步实验。然后开始准备基因枪轰击小鼠的睾丸，先将小鼠用腹腔注射0.1mL1%戊巴比妥钠麻醉，待小鼠麻醉后，固定四肢于木板上。将阴囊剪开一个小口，将睾丸拉出。将基因枪对准小鼠睾丸上方3-5cm处轰击。小鼠睾丸基因枪轰击后，一周以后，取小鼠睾丸培养支持细胞，以观察荧光。睾丸支持细胞培养48小时后观察出现绿色荧光，这表明eGFP-C1在小鼠睾丸的支持细胞中表达。另外取小鼠睾丸进行石蜡切片的制作，观察到曲细精管石蜡切片出现了彩色荧光，进一步表明绿色荧光蛋白在小鼠睾丸曲细精管中表达。基因枪轰击小鼠睾丸10天后，挑选10只健康的小鼠和雌鼠按雌雄比例3:1合笼，待生出仔鼠后，对全部出生的小鼠提取尾尖DNA进行PCR检测，共出生小鼠314只，将这314只小鼠，全部提取尾尖组DNA织做PCR鉴定后，有12只显示阳性。阳性率为0.038﹪。通过本实验，验证了通过基因枪轰击的方法可以建立转基因小鼠。实验二：睾丸输出管注射法建立转基因小鼠的实验研究。首先，质粒EGFP-C1的转化与提取同实验一。然后对T293细胞进行转染实验，48小时后观察到绿色荧光表达非常好，可以进行下一步的实验。睾丸输出管注射用玻璃针的制作好后，可以进行注射，将注射用转染液配制好，按脂质体试剂Lipofectamine2000说明书将将载体eGFP-C1与脂质体混合。麻醉小鼠，注射时浓度一般为1%的戊巴比妥钠，腹腔注射0.1mL。找出输出管将配好的转染液注射进去，注射完后立即取一只睾丸进行石蜡切片的制作，观察到曲细精管全部变蓝，这表明转染液已经注射进入曲细精管。睾丸注射一周后取睾丸培养支持细胞，观察到绿色荧光，这表明eGFP-C1已经在小鼠睾丸支持细胞中表达。睾丸注射10天后挑选健康的雄鼠10只，按雌雄比例3:1合笼。生下仔鼠后提取全部小鼠的尾尖组织DNA进行PCR检测，共产下仔鼠327只，将全部仔鼠尾尖组织提取DNA做PCR鉴定后，获得阳性仔鼠17只，转基因鼠阳性率为0.052﹪。通过本实验证明通过睾丸输出管注射法可以建立转基因小鼠。(本文来源于《新疆农业大学》期刊2013-06-01）
闵东红,何莎,张彦,夏兰琴[3]（2013）在《基因枪转化小麦主要轰击参数的优化》一文中研究指出基因枪转化是目前小麦遗传转化的主要方法。影响基因枪转化效率的主要参数有轰击距离、轰击压力、DNA总量及浓度、金粉颗粒大小及用量等。为改善目前小麦遗传转化效率偏低的现状,以普通小麦品种科农199为受体材料,设金粉大小(0.6μm和1.0μm)、轰击距离(5.5cm和8.5cm)及轰击压力(650、900和1100psi)叁因素共12个处理,利用pAHC25质粒转化小麦幼胚,以确定最佳轰击参数,建立稳定高效的普通小麦基因枪转化体系。结果表明,3个因素的不同组合对幼胚的愈伤诱导效率没有明显影响,但对再生率影响较大,以金粉0.6μm、轰击距离5.5cm的再生率最高。3个因素组合的不同处理对GUS瞬时表达有明显影响,以金粉0.6μm、轰击距离5.5cm和轰击压力650psi处理的GUS瞬时表达量最高。本试验最终获得28株转基因植株,其中12株来自金粉0.6μm、轰击距离5.5cm和轰击压力650psi的处理,该处理的平均转化率达2.45%。(本文来源于《作物学报》期刊2013年01期）
何莎[4]（2012）在《基因枪转化普通小麦品种科农199主要轰击参数的优化》一文中研究指出基因枪转化是目前小麦遗传转化的主要方法。基因枪轰击参数是影响小麦转化效率的一个重要方面，主要包括DNA沉淀辅助剂、DNA的总量及浓度、金粉颗粒大小及用量、轰击距离、轰击压力、轰击次数、真空度等。近几十年来，基因枪介导的小麦遗传转化取得了显着进展，但由于小麦属于异源六倍体植物，基因组庞大，重复序列多，再生能力差，遗传转化效率不高的问题一直没有得到有效解决。另外，虽然针对不同的小麦品种优化转化条件等方面的研究也多有报道，但是，目前用于基因枪转化的小麦品种（基因型）仍然十分有限。为了改善目前小麦遗传转化效率偏低的现状和扩大基因型范围，本研究以普通小麦品种科农199为受体，选取了金粉大小（0.6μm；1.0μm）、轰击距离（5.5cm；8.5cm）和轰击压力（650psi；900psi；1100psi）叁个对小麦基因枪转化有重要影响的参数，共12个处理组合，采用pAHC25质粒，转化小麦幼胚，以期确定最佳轰击参数，建立稳定、高效的普通小麦尤其是中国小麦品种的基因枪转化体系，获得了如下研究结果:1.不同的参数组合对小麦幼胚GUS瞬时表达量有重要影响。不同参数下轰击后GUS瞬时表达的差异。从单个参数来看，当金粉为0.6μm时，平均GUS瞬时表达量/胚为43.6±2.1，明显高于金粉为1.0μm时的13.9±1.4；轰击距离增加至8.5cm，平均GUS瞬时表达量/胚为11.2±1.4，显着低于轰击距离为5.5cm时的55.9±4.8；轰击压力对GUS瞬时表达也有重要的影响，650psi与900psi的影响差异不大，但当轰击压提高到1100psi时，每个胚的平均GUS瞬时表达量明显减少。从参数组合来看，处理0.6μm×5.5cm×650psi得到的GUS瞬时表达量最大，为84.2±7.3。2.不同参数组合对小麦愈伤诱导和再生效率有重要的影响。12个参数组合轰击小麦幼胚的愈伤诱导率都较高，普遍大于84.9±8.8%，最高可达98.0±1.5%，在统计学上不同参数组合对幼胚愈伤诱导效率差异不显着。但轰击参数对小麦幼胚再生率的影响，在不同处理间差异明显。其中，处理0.6μm×650psi×5.5cm的平均再生率达到68.7±2.1%，为所有处理中最高；仅次之为0.6μm×900psi×5.5cm和0.6μm×1100psi×5.5cm，平均再生率分别为60.6±1.7%和59.5±1.4%；而处理1.0μm×1100psi×8.5cm的平均再生率最低，仅为23.3±3.8%，与其他处理相比差异显着。3.不同的参数组合对转化率也有影响。本实验共获得28株转基因植株，其中金粉为0.6μm、轰击距离为5.5cm、轰击压力为650psi这个组合获得12株转基因株系，转化效果最好，平均转化效率为2.66%，最高可达5.80%。4. GUS组织化学染色和Southern blot分析结果表明，GUS基因已整合到小麦基因组中并能表达。部分转基因植株中GUS基因不表达与转基因的拷贝数有关，多拷贝可能导致了外源基因沉默。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2012-05-01）
杜志钊,高润红,陈志伟,何婷,李梁[5]（2011）在《利用基因枪轰击花药将GUS基因导入大麦小孢子》一文中研究指出为了建立和不断完善大麦单倍体细胞遗传转化体系,并突破其对模式品种的依赖,以2份大面积推广种植的优良大麦品种的花药为受体材料,利用基因枪法将GUS报告基因导入其小孢子,比较了不同基因型大麦花药经基因枪轰击后小孢子转化频率的差异,并探讨了不同轰击次数对小孢子转化频率的影响。研究结果表明,供试品种花药经基因枪轰击后,都有少量小孢子被成功转化,表现GUS活性;玉米泛素基因Ubi启动子能启动报告基因GUS在大麦小孢子中表达;基因枪轰击对小孢子的转化频率存在一定的基因型差异,两轰击处理组合下,品种"花22"的小孢子转化频率比"花30"的分别高出50.9%和77.8%;具有GUS活性的小孢子随轰击次数的增多而增加,轰击2枪较轰击1枪小孢子转化频率高出113.9%(花30)和77.6%(花22)。(本文来源于《麦类作物学报》期刊2011年06期）
刘建凤,李秋伶,黄惠,王敬敬,王省芬[6]（2010）在《基因枪轰击棉花茎尖转植酸酶基因》一文中研究指出磷是农作物生产中一个重要限制因子,土壤缺磷已成为影响作物产量提高和资源持续性发展利用的世界性问题。土壤中含有较多的有机磷,并能够通过生物小循环不断补充,但现有作物不能直接吸收土壤有机磷,只有被酶水解为无机磷之后才能被作物吸收利用。棉花一生中吸收的磷素70%～90%来自土壤,但土壤中有效磷的含量难以满足生长需要。因此,利用转基因技术结合常规育种,将磷高效利用基因如植酸酶基因等转化到棉花中,创造磷高效利用的棉花新种质,进而选育磷高效利用新品种,对于棉花的高产优质至关重要,也将为解决农作物有效利用土壤有机磷资源开辟一条经济有效的途径。(本文来源于《中国棉花学会2010年年会论文汇编》期刊2010-08-01）
黎敏,卢菲,韩新锋,朱德康,车茜[7]（2009）在《基因枪轰击小鹅瘟病毒VP3基因疫苗诱导鹅体内体液免疫的机制》一文中研究指出将小鹅瘟病毒VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只1μg、3μg和6μg的基因枪轰击免疫30日龄四川白鹅,用免疫组织化学法检测pcDNA-GPV-VP3在鹅体内各组织器官表达情况;用间接ELISA检测免疫鹅血清中GPV抗体滴度。结果:①各剂量免疫组1d时能在免疫部位皮肤,3d时能在心脏/十二指肠/空肠/盲肠/肝脏,7d时在回肠/直肠检测到pcDNA-GPV-VP3的表达;7d表达最多;表达可持续至35～63d;表达产物的数量和表达持续时间总体规律为6μg组>3μg组>1μg组。②免疫后第7d血清抗体开始升高,21d达到最大值,免疫后第14～217d极显着(P<0.01)高于PBS和空白质粒对照;体液免疫效果存在一定的剂量依赖。研究表明,pcDNA-GPV-VP3基因枪轰击免疫雏鹅后能在免疫部位皮肤、心肌、肝脏和各肠段中表达并能够诱导雏鹅产生良好的体液免疫。(本文来源于《高技术通讯》期刊2009年07期）
李万奎,程安春,汪铭书,朱德康,罗启慧[8]（2009）在《用原位杂交检测基因枪轰击小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内分布规律》一文中研究指出将小鹅瘟病毒(Goose Parvovirns,GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别按每只6、3、1μg的剂量基因枪轰击免疫4周龄BALB/c小鼠,于免疫后不同时间采集小鼠心、肝、脾、肺、肾、肠、脑和免疫部位皮肤等组织,用原位杂交方法检测pcDNA-GPV-VP3在小鼠体内的分布规律。结果显示,pcDNA-GPV-VP3在免疫后1h即分布于小鼠除脑外各个组织,脑组织于免疫后3h呈阳性,各组织阳性信号随时间的推移逐渐减弱;pcDNA-GPV-VP3在不同组织中持续时间依次为肝脏>心>脾>免疫部位>肾、肠>肺>脑;pcDNA-GPV-VP3不同剂量组信号强弱和持续时间存在的总体规律依次为6μg组>3μg组>1μg组。基因枪轰击pcDNA-GPV-VP3于免疫后能快速而广泛的分布于小鼠各个组织且持续存在达63d。(本文来源于《中国动物传染病学报》期刊2009年02期）
刘晓东,程安春,汪铭书,韩新锋,卢菲[9]（2008）在《荧光定量PCR检测基因枪轰击免疫小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内的动态分布》一文中研究指出通过基因枪轰击不同剂量(6μg/只、3μg/只和1μg/只)GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3) 免疫 BALB/c 小鼠,并用萤光定量 PCR(FQ-PCR)检测 pcDNA-GPV-VP3在小鼠各组织器官中(心、肝、脾、肺、肾、脑、肠和免疫部位皮肤)分布规律.结果表明:①pcDNA-GPV-VP3在各剂量免疫小鼠1h 即可在各组织中被检测到,其中在免疲部位皮肤含量最高,在心与肺中含量也较高,在脑中含量最低;②pcDNA-GPV-VP3在组织器官里的含量于3h 开始下降,31wk 仍能在叁个剂量免疫组小鼠的各个组织器官中检测到,但多数组织器官中的含量比1h 时约少了10~2,免疫部位皮肤减少了10~3;③不同剂量免疫组各组织器官中 pcDNA-GPV-VP3含量6μg/只组>3μg/只组>1μg/只组,但剂量组之间的差异并不显着(P>0.05)。研究表明:FQ-PCR 是定量检测 pcDNA-GPV-VP3在免疫小鼠各组织器官含量的可靠实验手段,pcDNA-GPV-VP3免疫小鼠后1h 时可分布至小鼠体内各组织器官中并持续存在31wk 以上。(本文来源于《第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集（下册）》期刊2008-04-01）
刘晓东,汪铭书,程安春,韩新锋,卢菲[10]（2008）在《肌注和基因枪轰击小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内表达时相的比较研究》一文中研究指出将小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只200μg、100μg、50μg肌肉注射和6μg、3μg、1μg基因枪轰击的方法免疫六组 BALB/c 小鼠,通过免疫组织化学法检测 pcDNA-GPV-VP3在 BALB/c 小鼠体内的动态表达规律.结果:在肌肉注射叁组中,表达产物在心、免疫部位肌肉、肾和肝细胞细胞核中被检测到,基因疫苗的剂量和表达产物的量呈现一定的正相关性;基因枪轰击叁组中,表达产物在心、免疫部位皮肤、肾和肝细胞细胞棱中被检测到,基因疫苗的剂量和表达产物的量呈现较弱的正相关性.研究表明:肌肉注射和基因枪轰击都是 pcDNA-GPV-VP3良好的免疫途径,基因枪轰击基因疫苗剂量很小,但基因疫苗在多种组织中较肌肉注射先检测出表达产物且持续时间长,表达量多,基因枪轰击免疫要优于肌肉注射免疫.(本文来源于《第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集（下册）》期刊2008-04-01）
基因枪轰击论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
转基因动物在生命科学、医学和生物制药等领域有着广泛的研究和应用前景,因此科学家们一直在探索一种更简便易行、经济实用而又高效的转基因方法。为了探讨基因枪法和睾丸输出管注射法在建立转基因小鼠的可行性，我们分别进行了两个实验。实验一：基因枪轰击法在建立转基因小鼠上的实验研究。首先，挑选清洁级40日龄雄性KM小鼠20只，雌性KM小鼠60只。将需要导入的质粒eGFP-C1进行转化提取。然后准备基因枪设备，清洗发射管，清洁高压管道，准备消毒操作试剂、工具、设备。包覆DNA微弹，准备受体。最后准备金粉的清洗，DNA子弹的制作。子弹包装完成后，就开始准备基因枪轰击。我们先用基因枪轰击T293细胞,轰击后48小时观察，T293细胞出现绿色荧光，证明绿色荧光蛋白在T293细胞中表达，基因枪轰击细胞可行，可以进行下一步实验。然后开始准备基因枪轰击小鼠的睾丸，先将小鼠用腹腔注射0.1mL1%戊巴比妥钠麻醉，待小鼠麻醉后，固定四肢于木板上。将阴囊剪开一个小口，将睾丸拉出。将基因枪对准小鼠睾丸上方3-5cm处轰击。小鼠睾丸基因枪轰击后，一周以后，取小鼠睾丸培养支持细胞，以观察荧光。睾丸支持细胞培养48小时后观察出现绿色荧光，这表明eGFP-C1在小鼠睾丸的支持细胞中表达。另外取小鼠睾丸进行石蜡切片的制作，观察到曲细精管石蜡切片出现了彩色荧光，进一步表明绿色荧光蛋白在小鼠睾丸曲细精管中表达。基因枪轰击小鼠睾丸10天后，挑选10只健康的小鼠和雌鼠按雌雄比例3:1合笼，待生出仔鼠后，对全部出生的小鼠提取尾尖DNA进行PCR检测，共出生小鼠314只，将这314只小鼠，全部提取尾尖组DNA织做PCR鉴定后，有12只显示阳性。阳性率为0.038﹪。通过本实验，验证了通过基因枪轰击的方法可以建立转基因小鼠。实验二：睾丸输出管注射法建立转基因小鼠的实验研究。首先，质粒EGFP-C1的转化与提取同实验一。然后对T293细胞进行转染实验，48小时后观察到绿色荧光表达非常好，可以进行下一步的实验。睾丸输出管注射用玻璃针的制作好后，可以进行注射，将注射用转染液配制好，按脂质体试剂Lipofectamine2000说明书将将载体eGFP-C1与脂质体混合。麻醉小鼠，注射时浓度一般为1%的戊巴比妥钠，腹腔注射0.1mL。找出输出管将配好的转染液注射进去，注射完后立即取一只睾丸进行石蜡切片的制作，观察到曲细精管全部变蓝，这表明转染液已经注射进入曲细精管。睾丸注射一周后取睾丸培养支持细胞，观察到绿色荧光，这表明eGFP-C1已经在小鼠睾丸支持细胞中表达。睾丸注射10天后挑选健康的雄鼠10只，按雌雄比例3:1合笼。生下仔鼠后提取全部小鼠的尾尖组织DNA进行PCR检测，共产下仔鼠327只，将全部仔鼠尾尖组织提取DNA做PCR鉴定后，获得阳性仔鼠17只，转基因鼠阳性率为0.052﹪。通过本实验证明通过睾丸输出管注射法可以建立转基因小鼠。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因枪轰击论文参考文献
[1].刘梅.基因枪轰击法介导抗逆基因LEA的旱稻转化[D].河北科技大学.2014
[2].王鹤.基因枪轰击法和睾丸输出管注射法建立转基因小鼠的实验研究[D].新疆农业大学.2013
[3].闵东红,何莎,张彦,夏兰琴.基因枪转化小麦主要轰击参数的优化[J].作物学报.2013
[4].何莎.基因枪转化普通小麦品种科农199主要轰击参数的优化[D].西北农林科技大学.2012
[5].杜志钊,高润红,陈志伟,何婷,李梁.利用基因枪轰击花药将GUS基因导入大麦小孢子[J].麦类作物学报.2011
[6].刘建凤,李秋伶,黄惠,王敬敬,王省芬.基因枪轰击棉花茎尖转植酸酶基因[C].中国棉花学会2010年年会论文汇编.2010
[7].黎敏,卢菲,韩新锋,朱德康,车茜.基因枪轰击小鹅瘟病毒VP3基因疫苗诱导鹅体内体液免疫的机制[J].高技术通讯.2009
[8].李万奎,程安春,汪铭书,朱德康,罗启慧.用原位杂交检测基因枪轰击小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内分布规律[J].中国动物传染病学报.2009
[9].刘晓东,程安春,汪铭书,韩新锋,卢菲.荧光定量PCR检测基因枪轰击免疫小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内的动态分布[C].第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集（下册）.2008
[10].刘晓东,汪铭书,程安春,韩新锋,卢菲.肌注和基因枪轰击小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内表达时相的比较研究[C].第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集（下册）.2008
论文知识图
