1株犬副流感病毒的分离鉴定及生物学特性研究

论文摘要

试验旨在分离鉴定犬副流感病毒（canine parainfluenza virus,CPIV）,并对其生物学特性进行研究。用Vero细胞接种感染CPIV阳性犬肺脏组织,盲传4代,收集72 h病毒液进行RT-PCR鉴定、电镜观察、血凝试验、热敏性试验、紫外照射试验及病毒一步生长曲线的测定,同时扩增N基因进行序列分析,并构建系统进化树。结果显示,试验成功从出现咳嗽、流鼻涕等呼吸系统疾病症状的病犬肺脏中分离出1株CPIV,命名为CPIV-BJ01;RT-PCR扩增结果发现,在534 bp处有特异性目的条带。病毒电镜观察发现,其超微结构呈圆形、有囊膜、直径在80～200 nm之间;血凝试验显示,病毒在4和37℃均能凝集1%猪红细胞,与报道的CPIV血凝特性一致;病毒对热敏感,长时间高温下病毒毒价会随之下降;紫外照射可使病毒在短时间内对细胞的感染性急剧下降。病毒一步生长曲线测定结果显示,在12～48 h病毒高速增殖,细胞培养液中病毒滴度急剧上升,之后趋于稳定。CPIV N基因序列与19株有代表性的副流感病毒N基因相比,其核苷酸序列同源性为97.1%～99.8%。遗传进化分析表明,CPIV-BJ01与PIV5 1168-1（登录号:KC237064.1）和PIV5 ZJQ 221（登录号:KX100034.1）位于同一分支上,亲缘关系较近。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 病毒的分离与增殖
•   1.3 RT-PCR扩增
•     1.3.1 RNA提取及cDNA合成
•     1.3.2 引物设计及合成
•     1.3.3 PCR扩增
•   1.4 病毒的电镜观察
•   1.5 生物学特性试验
•     1.5.1 血凝试验
•     1.5.2 热敏性试验
•     1.5.3 紫外线照射试验
•     1.5.4 病毒一步生长曲线测定
•   1.6 N基因克隆与遗传进化分析
•     1.6.1 引物设计及合成
•     1.6.2 重组质粒pMD-CPIV-N的构建
•     1.6.3 N基因序列分析
• 2 结 果
•   2.1 CPIV-BJ01株的分离鉴定
•     2.1.1 细胞病变
•     2.1.2 RT-PCR鉴定结果
•     2.1.3 病毒的电镜观察电镜图片显示, 病毒粒子呈圆形, 有囊膜, 直径在80～200 nm （图3） 。
•   2.2 CPIV-BJ01株的生物学特性试验
•     2.2.1 血凝试验
•     2.2.2 热敏性试验
•     2.2.3 紫外照射试验
•     2.2.4 病毒一步生长曲线测定
•   2.3 CPIV-BJ01株N基因的克隆及遗传进化分析
•     2.3.1 N基因的克隆
•     2.3.2 N基因的遗传进化分析
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘畅,秦彤,梁琳,由欣月,王春凤,钱爱东,李金祥,崔尚金

关键词: 犬副流感病毒,分离鉴定,生物学特性,进化分析

来源: 中国畜牧兽医 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林农业大学动物科学技术学院,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

基金: 国家“十三五”重点研发计划“宠物病毒性传染病新型生物治疗制剂研究与产品创制”(2016YFD0501003),两种SPF犬病原的抗体检测方法的建立(2017YFD0501603),中国农业科学院创新工程项目(ASTIP-IAS15)

分类号: S852.65

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.03.030

页码: 891-897

总页数: 7

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