RNA结合模体蛋白3对细胞总蛋白质合成的影响及其靶基因的鉴定

论文摘要

RNA结合模体蛋白3 （RNA binding motif protein 3,RBM3）受低温应激产生,参与介导亚低温的神经保护功能,但其作用机制及其下游靶分子尚不清楚。本研究构建了人RBM3基因的重组表达质粒,运用一种新型的、非放射性方法即翻译表面感应（surface sensing of translation,SUnSET）来检测RBM3过表达对细胞总蛋白质合成（global protein synthesis,GPS）的影响。结果显示,RBM3过表达使细胞总蛋白质的合成水平上调23. 7%（P <0. 001）,这与RBM3过表达引发的真核翻译延伸因子2 （eukaryotic translation elongation factor 2,e EF2）及真核翻译起始因子2α（eukaryotic initiation factor 2α,eIF2α）的活性增高相一致。对RBM3可能的下游靶基因内质网蛋白3（reticulon 3,RTN3）,以及Yes相关蛋白1 （Yes-associated protein 1,YAP1）的表达进行分析。结果显示,RBM3使RTN3及YAP1在蛋白质水平的表达分别提高了51. 7%（P <0. 01）与43. 3%（P <0. 01）。与蛋白质水平变化相比,RBM3使YAP1在mRNA水平上调了2. 0倍（P <0. 001）,但对RTN3的mRNA表达未见显著影响。以上研究表明,SUnSET是一种稳定、可靠的细胞GPS的检测手段; RBM3可显著促进细胞GPS,且对其下游基因RTN3和YAP1存在靶向关系。本研究的结果为深入探讨RBM3的神经保护作用机制提供了理论基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株、质粒和细胞
•   1.2 培养基
•   1.3 试剂和仪器
•   1.4 重组质粒的构建
•   1.5 质粒提取、SH-SY5Y细胞培养及转染
•   1.6 Western印迹检测蛋白质表达
•   1.7 RNA提取及实时荧光定量PCR
•   1.8 SUn SET法检测总蛋白质合成
•   1.9 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 RBM3重组质粒的构建和表达
•   2.2 过表达RBM3促进细胞总蛋白质的合成
•   2.3 过表达RBM3增强蛋白质eEF2、eIF2α在细胞中的活性
•   2.4 RBM3促进YAP1和RTN3基因在蛋白质水平上的表达
•   2.5 RBM3促进YAP1 mRNA的表达但不影响RTN3
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 雷冰冰,袁昕,马周聪,宋炯,庄雪珂,吕辰飞,杨海杰

关键词: 结合模体蛋白,总蛋白质合成,翻译表面感应,内质网蛋白,相关蛋白

来源: 中国生物化学与分子生物学报 2019年09期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 新乡医学院生命科学技术学院

基金: 国家科学自然基金(No.81771336,No.U17041860),新乡医学院研究生创新课题(No.YJSCX201807Z)资助~~

分类号: Q75

DOI: 10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.09.07

页码: 968-974

总页数: 7

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